Hémisection latérale de la moelle épinière et évaluations comportementales asymétriques chez les rats adultes

Ici nous décrivons des procédures chirurgicales pour produire une hémisection latérale fiable de moelle épinière (HX) au niveau thoracique de 9^e dans les rats adultes et évaluations neurocomportementales conçues pour détecter des déficits asymétriques après une telle blessure unilatérale.

Ce protocole fournit un modèle animal fiable d’une hémisection latérale de moelle épinière qui imite le syndrome de Brown-Sequard chez l’homme, et une nouvelle échelle combinée de comportement pour évaluer des déficits asymétriques de comportement. Ce modèle d’hémisection de souris peut davantage notre compréhension des affaiblissements neurologiques qui se produit dans le syndrome de Brown-Sequard chez l’homme. Contrairement à vos évaluations mentionnées, notre nouvelle échelle de comportement combinée peut être appliquée à n’importe quel moule qui a exigé des déficits asymétriques d’évaluation, de locomotive et de laboratoire.

L’utilisation de ce modèle cohérent et naturel de la section hémi peut faciliter la comparaison du résultat expérimental entre la recherche fondamentale et la recherche en traduction. L’utilisation d’un résultat cohérent avec ce modèle peut être difficile pour les débutants. L’étape critique consiste à placer l’aiguille verticalement dans la ligne médiane, comme un guide pour induire la blessure.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer à la fois les procédures chirurgicales et comportementales. Le jour de l’intervention, nettoyez la table chirurgicale avec 70 % d’éthanol et placez un coussin chauffant préchauffé sur la table. Après avoir couvert la zone chirurgicale avec un drapé chirurgical stérile, confirmer un manque de réponse au pincement des pieds chez un rat anesthésié.

Appliquez de l’onguent sur les yeux de l’animal pour éviter le séchage cornéen et rasez les cheveux au-dessus des vertèbres thoraciques. Ensuite, nettoyez la peau exposée avec trois gommages alternés à base d’iode et d’éthanol. Lorsque l’animal est prêt, localiser la treizième côte et suivre la côte dorsalement pour identifier sa connexion avec la vertèbre T-13.

Comptez jusqu’à identifier la vertèbre T-9, et utilisez une lame de scalpel numéro quinze pour faire une incision de trois à quatre centimètres de la peau médiane sur les huit à onzièmes processus épineux vertébraux. Déplacez le rat sous un microscope chirurgical, et disséquez et séparez brutalement les muscles paraspinaux latéralement des processus épineux vers les facettes des vertèbres T-9 et T-10 des deux côtés. Désablisez la colonne vertébrale avec un support stabilisateur modifié, faites une fente des deux côtés de l’os vertébral latéral et faites glisser les bras en acier inoxydable du support sous les facettes transversales exposées du processus.

Serrez les vis pour fixer le support, et utilisez un protracteur pour exposer les processus laminaires vertébraux T-8 à 11 et spinous. À l’aide d’un rongeur, couper le processus épineux T-9 et enlever une petite partie du lamina, à gauche jusqu’à la ligne médiane et toute la partie droite du lamina, le plus latéralement possible. Puis insérez doucement le ronguer sous le lamina, et coupez un petit morceau d’os à la fois, jusqu’à ce que la région désirée de laminectomie soit terminée.

Ensuite, identifiez la ligne médiane dorsale de la moelle épinière, et insérez une aiguille de calibre 30 verticalement à travers la ligne médiane, dans la moelle épinière, jusqu’à la paroi ventrale du canal vertébral, avec le biseau orienté vers la droite. Arrêtez tout saignement avec un petit morceau de mousse de gel stérile, et insérez une pointe d’une paire de ciseaux de micro-chirurgie iridectomy à travers la ligne médiane de la voie de l’aiguille, et l’autre pointe le long de la surface latérale de l’hémichorie droite, pour faire une coupe complète sur l’hémichord droit. Utilisez le bord latéral de la même aiguille qu’un couteau, pour couper à travers l’écart de lésion pour confirmer une hémisection droite complète.

Et visualiser le fond du canal vertébral, pour vérifier l’exhaustivité de l’hémisection droite. Utilisez le mélange de ciment pour construire le pont étroit au-dessus de l’éponge, et les processus épineux T-8 et T-10. Ensuite, suture les couches musculaires et cutanées séparément avec 4/0 fil de soie, et injecter 0,9% stérile saline sous-cutanée pour maintenir l’hydratation.

Presser la vessie urinaire deux à trois fois par jour pendant la première semaine, et une à deux fois dans les semaines suivantes, jusqu’à ce que la vessie spontanée annule les retours. Aux moments expérimentaux appropriés après la procédure, placez le rat adulte dans une expérience en plein champ et examinez la locomotion de l’animal pendant quatre minutes. À l’aide de la table, attribuez une valeur de 1 pour oui et de 0 pour non pour chaque catégorie de comportement, et résumez la valeur totale pour donner un score final unilatéral d’étape d’hémisection de 0-8.

Pour l’analyse du couplage à la porte, enregistrez l’animal expérimental marchant sur un dispositif de piste étroit, et attribuez un score de 0 pour no'1 pour les réguliers et/ou maladroits et 2 pour normal' pour chaque catégorie de couplage. Pour l’évaluation du placement par contact, maintenez l’animal en position verticale, de sorte que les deux membres postérieurs soient disponibles pour la réponse de placement, et brossez la surface dorsale d’un membre postérieur légèrement vers l’avant vers le bord d’une surface. Observez le placement du pied sur la surface, et attribuez un score de placement de contact de membre postérieur de 0 pour aucun placement » et 1 pour le placement 'Pour l’évaluation de grille-marche, placez le rat sur une grille surélevée de trente-six par trente-huit centimètres en plastique-enduit de fil-maille avec des ouvertures carrées de 3 cm, et enregistrez le rat marchant librement à travers la plate-forme pendant 30 étapes pour permettre la quantification du nombre de faux pas de pied pour chaque membre pour déterminer la sévérité du déficit moteur.

La coloration fluorescente d’Amino d’une section transversale à l’épicentre de blessure montre une perte complète de l’hémichord droit. Et la préservation de l’hémichorie gauche contrelaral à la blessure. Les scores des différentes mesures d’évaluation des portes peuvent être analysés séparément, ou ils peuvent être combinés dans un comportement combiné composite après le score d’hémisection.

Dans les trois premiers jours après la blessure, les rats perdent la capacité d’étape, avec des mouvements step-like commençant à réapparaître sur le côté ipsilesional à 7 10 jours après blessure. Et avec la plupart des étapes étant des étapes dorsales. Par 28 jours après l’hémisection T-9, les rats peuvent prendre des mesures plantaires avec une coordination pratiquement normale.

En comparaison, le membre postérieur contralesional est moins interrompu avec le score unilatéral d’hémisection tombant dans les cinq premiers jours après la blessure, et retournant à la ligne de base par jour 10, après blessure. Pour le test de couplage total de la porte, la stabilité et l’adaptabilité de la coordination après l’hémisection sont nettement réduites au cours des cinq premiers jours suivant la blessure. Le placement de contact et la marche en grille du membre postérieur ipsilateral sont également affectés, récupérant habituellement quand l’animal commence à prendre des étapes plantaires.

Il peut être difficile de produire une blessure propre. Placer une aiguille au milieu peut être une ligne directrice utile pour assurer une séparation complète du tissu.