Name: Stratégies d’échantillonnage et traitement des échantillons de tissu de la biobanque de modèles biomédicaux porcins (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: Découvrez les techniques d'échantillonnage de tissus porcins pour biobanque : la méthode de submersion pour estimer les volumes et la technique de l'orientateur pour générer des coupes isotropes aléatoires permettant une analyse morphologique quantitative sans biais.

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Les auteurs remercient Lisa Pichl excellente assistance technique.

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Génération des collections échantillon biobanque de modèles animaux porcins nécessite des techniques robustes et protocoles pour la détermination des volumes d’organes et de tissus, la génération reproductible de représentant, des échantillons de tissu redondant convenant à un large éventail de Méthodes d’analyse différentes et pour la randomisation de l’orientation des sections d’échantillon pour des analyses quantitatives stéréologiques. Les méthodes décrites dans le présent article sont adaptés à la taille des tissus ...

Dans la médecine translationnelle, les porcs sont plus en plus courants pour une utilisation comme modèles de grand animaux1,2,3,4,5, en raison de nombreuses similitudes avantageux entre le porc et anatomie et physiologie et la disponibilité de méthodes biologiques moléculaires établies permettant la génération d’adapté, modifié génétiquement des modèles de porc pour un large éventail de maladies conditions1,4.
Toutefois, par rapport aux modèles de rongeurs, le nombre d’animaux d’un modèle de cochon respectifs qui peuvent être fournis pour expériences en tout temps est limité. Cela est dû à l’intervalle de génération porcin d’environ un an et les efforts financiers et beaucoup de temps requis pour la génération de modèles de porcins et de l’élevage. Par conséquent, les animaux individuels d’un modèle porcin, ainsi que les échantillons qui peuvent être générés de ces porcs, sont très précieux, en particulier si génétiquement modifiée modèles porcines et/ou des problèmes expérimentaux à long terme (p. ex., complications tardives de maladies chroniques) sont examinées dans les individus âgés de6,2,7.
Dans le cadre de toute étude, exécution d’analyses supplémentaires, qui ne était pas prévue dans le protocole expérimental de l’étude initial pourrait plus tard se pour révéler pertinentes, par exemple, à l’adresse des questions distinctes découlant précédemment découvert résultats inattendus. Si les échantillons appropriés pour de telles expériences supplémentaires ne sont pas disponibles, coût disproportionnellement plus élevé et les dépenses de beaucoup de temps peuvent être nécessaires de produire des porcs supplémentaires et des échantillons de tissus. Pour être préparé à ces éventualités, génération de biobanque collections d’échantillons de sauvegarde conservées des différents organes, de tissus ou liquides bio, quantitativement et qualitativement adaptées pour un large éventail d’analyses ultérieures, est considéré comme un important approche2,6,7. Découlant des prestations optimales un modèle animal porcin, la disponibilité des échantillons adéquats biobanque offre également la possibilité unique pour effectuer un large éventail de méthodes d’analyse différentes sur les matériaux des échantillons identiques sur un niveau de plusieurs organes dans la même chaque animal, par exemple, par la distribution d’échantillons à des scientifiques de différents groupes de travail organisés en un réseau de recherche sur2,6,7. En outre, la stratégie d’échantillonnage '' tourné vers l’avenir '' dans les biobanques contribue également à une réduction du nombre d’animaux nécessaires dans une étude. Les avantages du modèle porcin biobanques ont récemment été démontrés dans un multi-organes, étude multiomics, orgue la diaphonie dans un modèle porcin génétiquement modifié du diabète à long terme, sur des échantillons de la biobanque de porc Munich MIDY 2.
Il y a certaines exigences obligatoires biobanque échantillons doivent généralement respecter pour établir la fiabilité et la facilité d’interprétation des résultats des analyses effectuées par la suite. Les échantillons doivent être générés de façon reproductible, et ils doivent être représentatifs, c'est-à-diresuffisamment reflétant les caractéristiques morphologiques et moléculaires intéressées des tissus ou d’organes les échantillons ont été prélevés à7. Pour convenir à un large éventail de types d’analyses en aval, les échantillons doivent être pris en quantité suffisante et traitées selon les demandes (y compris les conditions de temps et température) différentes méthodes d’analyse, y compris les descriptifs analyses histopathologiques, tels que cryohistology, paraffine et plastique histologie, immunohistochimie, hybridation in situ , analyses microscopiques électron ultrastructurales et bilans diagnostiques de laboratoire clinique, aussi bien que moléculaires analyses d’ADN, d’ARN, de protéines et de métabolites.
Pour permettre l’évaluation d’un large éventail de distinctes paramètres morphologiques quantitatifs tels que des nombres, des volumes, longueurs ou des surfaces de structures tissulaires distinctes par des analyses quantitatives stéréologiques, section randomisée des avions de la des échantillons histologiques des tissus/organes respectifs doivent être préparés à7,8,9,10,11. Dans des études morphologiques quantitatifs, la détermination précise du volume total des tissus, organes ou compartiment de l’orgue, les échantillons ont été prélevés de (c.-à-d., l’espace de référence) est d’une importance cruciale7,9 , 12 pour calculer les quantités absolues des paramètres au sein de l’organe respectif, des tissus ou organisme intéressés. Finalement, l’effet du retrait de tissu incorporation liées au cours de la préparation des coupes histologiques doit être déterminé et pris en compte13. Par conséquent, des analyses quantitatives stéréologiques, notamment des échantillons archivés (corrigé d’échantillons de tissus, tissus incorporé blocs, coupes histologiques, etc.) dans les études précédentes sont parfois12sévèrement limité, voire même impossible, surtout si la volumétrie des tissus/organes respectifs ne faisait pas, si aucun de ses designs d’échantillonnage adéquates ont été appliqués pour justifier des échantillons représentatifs, si les nombres et les quantités d’échantillons individuels disponibles ne suffisent pas, ou si le traitement de la échantillons est incompatible avec l’estimation du ou les paramètres morphologique quantitatif d’intérêt. En raison des multiples facteurs d’influence possibles, l’aptitude des matériaux archive-échantillon pour des analyses des paramètres morphologiques quantitatifs distincts impossible de répondre sans équivoque, mais dépend de l’évaluation minutieuse de chaque cas individuel.
Ainsi, comme l’emplacement, taille, nombre, traitement, direction de coupe et l’orientation des échantillons potentiellement affecte les résultats des analyses ultérieures, ces facteurs sont d’une grande importance et doivent être envisagées dans le protocole expérimental d’aucune étude. En ce qui concerne ces aspects et les particularités de l’anatomie porcin, directives d’échantillonnage complet, détaillé et à grande échelle des modèles animaux adaptés aux porcins ont récemment été créées, offrant une solide référence à standardisées et reproductibles et la production efficace de redondants, suffisamment transformés, qualité des échantillons de plus de 50 différents porcine organes et tissus6,7.
Les descriptions méthodologiques et le didacticiel vidéo montré dans le présent article prévoient détaillées, exemples, compréhensible, instructions étape par étape pour une performance pratique d’une variété de techniques de volumétrie, prélèvement d’échantillons de tissus porcins et organes et traitement des échantillons de tissus pour analyse en aval différentes méthodes. Les techniques recommandés incluent des méthodes pour la détermination des volumes d’organes et de tissus et de densités fondées sur les principes d’Archimède et Cavalieri9, y compris la détermination des dimensions de rétrécissement en trois dimensions des tissus associés à la intégration dans différents encastrement médias14 pendant le traitement pour examen histologique, application d’échantillonnage aléatoire systématique possible pondérée en fonction du volume s’approche, traitement des échantillons de tissus prélevés pour différents ultérieures analyses7,8,9,15et génération de convenablement orienté et traitement échantillons pour potentiel des analyses quantitatives stéréologique7,8, 9,10,11. À côté de leur application dans des projets porcins biobanque, les méthodes démontrées sont généralement appropriées pour toutes les études examinant les propriétés histo-morphologiques quantitatifs des organes/tissus. En outre, conceptions de l’échantillonnage aléatoire systématique sont particulièrement bénéfiques pour la génération d’échantillons représentatifs dans les expériences à l’aide de méthodes d’analyse moléculaire pour détecter les altérations de l’abondance de, par exemple, ARN, protéines ou métabolites dans différents organes et tissus.
Les sections suivantes fournissent une brève introduction à ces méthodes, tandis que leur performance pratique est décrite dans la section protocole.
Détermination des volumes d’organes et de tissus Détermination du poids des organes et des volumes est importante dans plusieurs paramètres expérimentaux, que ces facteurs pourraient indiquer des changements, potentiellement liées à expérimentalement examiné les facteurs d’intérêt. Le volume total d’un organe ou le tissu est aussi communément requis pour calculer les paramètres quantitatifs absolues, (par exemple, le nombre total de cellules), des densités de volume numérique stereologically estimé (c.-à-d., le nombre de cellules par unité de volume du tissu)7,12. En dehors des techniques utilisant des équipements techniques complexes, comme la tomographie par ordinateur, il existe essentiellement trois méthodes pratiques habituellement utilisées pour déterminer le volume absolu d’un organe ou tissu. Le volume d’un organe peut être déterminé par « mesure volumétrique directe » selon le principe d’Archimède, c'est-à-dire, en mesurant le volume d’eau ou une solution saline déplacés par la structure lorsqu’il est complètement submergé. Toutefois, pour relativement grandes orgues porcins, ces approches sont impraticable et enclin à l’imprécision, car ils nécessitent des flacons volumétrique/de mesure très large. Plus commodément, le volume d’un organe/tissu peut être calculé à partir de son poids et la densité7,12,16, qui peut efficacement être déterminé à l’aide de la « méthode de submersion »7,12 ,16 (étape de protocole 1.1.). Volumes d’organes et de tissus peuvent également être estimés à l’aide de la volumétrie des approches basées sur le « principe de Cavalieri » (1598-1647). En termes simples, le principe de Cavalieri stipule, que si deux objets sont sectionnées dans des plans parallèles à un plan de masse, et les profils des sections coupent par le biais de deux objets au correspondant distance depuis le plan de masse ont les mêmes zones, les deux objets ont le même volume. Ainsi, on peut estimer le volume d’objets façonnés arbitrairement comme le produit de leurs zones de profil de section dans les plans de coupe parallèle, tout aussi lointain et la distance entre les plans de coupe. C’est compréhensible avec l’analogie suivante : considérons deux cheminées comprenant le même nombre de pièces identiques sont placées côte à côte, une pile avec la pièces de monnaie ordonnée empilée les uns sur les autres ce qui donne une forme cylindrique de la pile de la pièce et l’autre empilement de pièces de monnaie avec décentré placé pièces (Figure 3 a). Bien que les formes des deux cheminées de la pièce sont différents, leurs volumes sont identiques, depuis les zones des pièces à des niveaux correspondants de deux piles (c'est-à-direles zones des profils de sections parallèles coupent par les deux cheminées de la pièce à égale distance de la au sol) sont identiques. Estimation des volumes d’organes porcins et de tissus en utilisant le principe de Cavalieri7,12,15 est décrit à l’étape 1.2.
Détermination de l’étendue du retrait des tissus associé à enrobage histologique Dans les analyses de plusieurs paramètres morphologiques quantitatifs mesurés dans des coupes de tissus histologiques, l’effet de rétraction tissulaire liées à enrobage survenant pendant le traitement pour l’histologie des tissus doit être déterminé et pris en compte. L’ampleur du retrait de tissu liées à enrobage peut être variable et dépend à la fois sur le tissu, son traitement et l’incorporation moyenne8,13,17,18,19. Généralement, les changements liés à enrobage du volume d’un échantillon de tissu (c'est-à-dire, pour la plupart de rétrécissement) se produisent dans les trois dimensions de l’espace et, par conséquent, affecte tous les paramètres dimensionnels estimées par des analyses quantitatives stéréologiques8 . Fondamentalement, l’ampleur du retrait de tissu incorporation liées, exprimé comme le facteur de rétrécissement des tissus linéairefS, peut être estimée comme indiqué dans l’étape 1.3. et utilisés pour la correction des paramètres morphologiques quantitatifs (rétrécissement sensible)14.
Échantillonnage aléatoire systématique pondérée en fonction du volume des organes/tissus Création d’une biobanque de collection des échantillons d’organes et de tissus porcins, approches d’échantillonnage aléatoire systématique pondérée en fonction du volume tel que décrits à l’étape 2 se sont avérés pour être pratiques, rapide et efficaces des techniques de génération de représentant, tissu multi-usage échantillons7,8,9,15.
Génération d’isotrope uniforme aléatoire et des sections verticales uniforme aléatoire pour les analyses quantitatives stéréologiques Biobank échantillons de tissus doivent être adapté pour un large éventail de méthodes différentes analyse stéréologique quantitative pour l’estimation d’un maximum de paramètres qui ne peut être déterminée sans un spécimen bien préparé. Presque tous les paramètres stéréologiques quantitatives peuvent être déterminés, en utilisant « isotrope (indépendant) uniforme aléatoire (IUR) sections »8,9. Dans les sections IUR, l’orientation tridimensionnelle du plan de la section de l’échantillon de tissu est aléatoire. Ceci peut être réalisé par randomisation de la position de l’échantillon de tissu par rapport à la position de l’avion de la section, tel qu’appliqué dans le « Isector » méthode11 (étape 3.1 du protocole), ou par randomisation de l’orientation du plan de la section relative à la échantillon de tissu, comme dans la méthode « Orienteur »10 (étape 3.2 du protocole). Dans les échantillons de tissus, comme la peau ou la muqueuse spécimen affichant un axe vertical naturellement présent, ou défini et correctement identifiable, préparation des « vertical uniforme aléatoire (RVU) sections » (pas de protocole 3.3.) sectionné strictement dans le plan de leur axe vertical est avantageuse8,20. Pour un discours complet des fondements théoriques de l’échantillonnage IUR/VUR et un examen approfondi des potentiels en aval analyses stéréologiques quantitatives, le lecteur intéressé est dénommé les manuels de stéréologie quantitative dans la vie Sciences8,9.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Carl Roth GmbH, Allemagne</td><td>Agar (poudre), Cat. : 5210.3</td><td>Dissoudre environ 1 g de gélose dans 10 ml d’eau froide dans un bécher en verre ou en plastique, chauffer au four à micro-ondes à 700 W, faire bouillir la solution deux fois en agitant vigoureusement. Couler dans le moule encore chaud et laisser solidifier. Attention : Lors de la manipulation avec de l’gélose liquide chaude, portez des lunettes de protection et des gants.</td></tr><tr><td>Étrier</td><td>Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Allemagne</td><td>Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Cat. : 3664902</td><td>Tout type d’étrier (mécanique ou électronique) fera également l’affaire.</td></tr><tr><td>Moules de coulée (métal)</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml ; emi, Allemagne</td><td>Einbettsch&auml ; Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Réf. : 14302b</td><td>Tout autre type de moule de coulée de métal utilisé pour l’enrobage de paraffine fera également l’affaire.</td></tr><tr><td>Modèles de copie de grilles transversales (5 mm - 6 cm)</td><td>n.a.n.a.Les</td><td></td> <td>modèles de copie de grilles transversales (5 mm - 6 cm) sont fournis dans le fichier de données supplémentaires de Albl et al.&nbsp ; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi : 10.1177/0192623316631023 (2016)</td></tr><tr><td>Modèles de copie de cercles équiangulaires et pondérés en cosinus</td><td>n.a.n.a.Des</td><td></td> <td>modèles de copie de cercles équiangulaires et pondérés en cosinus sont fournis en Nyengaard & Gundersen. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi : 10.1183/09059180.00010101 (2006) et dans Gundersen et al. Stereological Principles and Sampling Procedures for Toxicological Pathologists. Dans : Haschek et Rousseaux&acute ; s Manuel de pathologie toxicologique. 3e éd., 215-286, ISBN : 9780124157590 (2013).</td></tr><tr><td>Pinces repliables (pinces à reliure YIHAI, 15 mm et 19 mm)</td><td>Ningbo Tianhong Stationery Co ltd., Chine</td><td>Y10006 et Y10005</td><td>Tout autre type de pinces pliantes de bureau standard fera également l’affaire.</td></tr><tr><td>Pince (anatomique)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Allemagne</td><td>neoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomistique, rund, Cat. : 1-1811</td><td>N’importe quel type de pince anatomique fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Solution de formaldéhyde 4 %</td><td>SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Allemagne</td><td>Formaldéhyde 37/40 %, cat. : 1000411525005</td><td>Diluer à 4 % à partir d’une solution concentrée. Tampon à pH neutre. Portez une protection oculaire, respiratoire et des mains appropriée. Traitez les échantillons de tissus fixés dans une solution de formaldéhyde sous une hotte d’évacuation et portez des lunettes de protection et des gants de laboratoire.</td></tr><tr><td>Papier millimétré (pour l’étalonnage)</td><td>B&uuml ; romarkt B&ouml ; ttcher AG, Iéna, Allemagne. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Penig Millimeterpapier A4, Cat. : 2514</td><td>N’importe quel type de papier millimétré (à l’échelle millimétrique) fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Béchers de laboratoire (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Germany</td><td>Becherglas SIMAX&reg ; , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Cat. : E-1031, E-1032, E-1035, E-1036</td><td>N’importe quel type de bécher en verre ou en plastique d’un volume de 5 à 100 ml fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Balance(s) de laboratoireMettler</td> <td>Toledo GmbH, Gie&szlig ; fr, Allemagne</td><td>PM6000</td><td>Toute balance de laboratoire standard avec des plages de mesure comprises entre 0,1 mg et environ 20 g, respectivement entre 100 mg et environ 500 g, fera l’affaire</td></tr><tr><td></td><td>. ttingen, Allemagne</td><td>BP61S</td><td></td></tr><tr><td>Lames microtomes</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml ; nde, Germany</td><td>FEATHER Lames de microtome S35, Cat. :14700</td><td>N’importe quel type de lames de microtome à usage unique fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Logiciel / système de morphométrie/planimétrie</td><td>National Institute of Health (NIH)</td><td>ImageJ</td><td>Télécharger de https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997).</td></tr><tr><td>Zeiss-Kontron, Eching, Allemagne</td><td>Système d’analyse d’images VideoplanTM</td><td>Rupture de stock</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo</td><td>Nikon</td><td>D40</td><td>N’importe quel type d’appareil photo numérique pouvant être monté sur un trépied fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Transparents en plastique</td><td>Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Allemagne</td><td>Laser Overhead-Folie DINA4 Cat. :&nbsp ; 3562</td><td>N’importe quel transparent en plastique imprimable au laser fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Tables de nombres aléatoires</td><td>n.a.n.a.Les</td><td></td> <td>tables de nombres aléatoires peuvent être générées de manière pratique (avec un nombre défini de nombres aléatoires et dans des intervalles définis), à l’aide de générateurs de nombres aléatoires, tels que : https://www.random.org/</td></tr> <tr><td>Lames de rasoir</td><td>Plano GmbH, Wetzlar, Allemagne</td><td>T5016</td><td>N’importe quel type de lames de rasoir fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Souverain</td><td>B&uuml ; romarkt B&ouml ; ttcher AG, Iéna, Allemagne. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, transparent, Cat. : ln30</td><td>N’importe quel type de règle à l’échelle cm-mm fera aussi l’affaire.</td></tr><tr><td>Saline salée (0,9 %)</td><td>Carl Roth GmbH, Allemagne</td><td>Natriumchlorid, >99 % Cat. : 0601.1</td><td>Pour préparer une solution saline à 0,9 %, dissoudre 9 g de NaCl dans 1000 ml d’eau distillée à 20&deg ;C.</td></tr><tr><td>Lames de scalpel</td><td>Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Allemagne</td><td>BRAUN Lames chirurgicales N&deg ; 22</td><td>N’importe quel type de lames de scalpel fera l’affaire.</td></tr><tr><td>Scanner</td><td>Hewlett-Packard</td><td>hp scanjet 7400c</td><td>Tout type de scanner de bureau standard capable de numériser avec des résolutions de 150 à 600 dpi fera l’affaire.</td></tr><tr><td></td><td></td><td>Des exemples de dispositifs de tranchage auto-construits peuvent être trouvés dans Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi : 10.1002/ar.20747 (2009) et dans le fichier de données supplémentaire de Albl et al.&nbsp ; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi : 10.1177/0192623316631023 (2016).</td><td></td></tr><tr><td>Moules de coulée sphérique (par exemple, de 25,5 mm de diamètre)</td><td>Pralinen-Zutaten.de, Windach, Allemagne</td><td>Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25,5 mm</td> Les <td>moules de coulée sphériques peuvent également être auto-construits ou obtenus auprès d’autres fournisseurs de confisseurs (pour les pralines). Les moules de coulée indiqués ici sont en fait l’emballage/l’emballage de corps de pralines creuses (mangez d’abord les pralines, puis utilisez l’emballage pour la génération de sections du secteur i)</td></tr><tr><td>Fil mince</td><td>Basteln & Hobby Schobes, Stra&szlig ; fürth, Allemagne. </td><td>Catégorie : 216464742</td><td>Tout autre type de fil fin fera également l’affaire.</td></tr><tr><td>Papier de soie</td><td>NeoLab Migge GmbH, Heidelberg, Allemagne</td><td>Declcate Task Wipes-White, Cat. : 1-5305</td><td>Tout autre type de papier de soie de laboratoire fera également l’affaire.</td></tr><tr><td>Stylo étanche</td><td>Staedler Mars GmbH & Co KG, N&uuml ; rnberg, Grmany</td><td>Lumocolor permanent 313, 0,4 mm, S, noir, Cat. : 313-2</td><td>Tout autre type de stylo étanche fera également l’affaire.</td></tr></tbody></table>

stratégies d’échantillonnage et traitement des échantillons de tissu de la biobanque de modèles biomédicaux porcins

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

Pour la recherche translationnelle, modèles porcines sont progressivement devenus plus populaires. Étant donné la valeur élevée de chaque animal, en particulier des porcs génétiquement modifiés, modèles et le nombre souvent limité d’animaux disponibles de ces modèles, création de collections (biobanque) des échantillons de tissu suffisamment transformés adapté pour un large spectre des méthodes d’analyses subséquentes, y compris les analyses non précisés à l’instant d’échantillonnage, représentent des approches utiles pour profiter pleinement de la valeur translationnelle du modèle. En ce qui concerne les particularités de l’espèce porcine anatomie, des lignes directrices exhaustives ont récemment été établies pour génération normalisée de représentant, échantillons de haute qualité provenant de différents organes porcins et tissus. Ces lignes directrices sont des conditions essentielles pour la reproductibilité des résultats et la comparaison entre différentes études et les enquêteurs. L’enregistrement des données de base, tels que le poids des organes et volumes, la détermination des sites d’échantillonnage et du nombre d’échantillons de tissus à générer, ainsi que leur orientation, taille, traitement et directions de coupe, est des facteurs pertinents détermination de la généralisation et la convivialité de l’échantillon pour des analyses morphologiques moléculaires, qualitatives et quantitatives. Ici, une démonstration illustrative, pratique, étape par étape des techniques plus importantes pour la production de représentant, biobanque multi-usages spécimen provenant de tissus porcins est présenté. Les méthodes décrites ici incluent la détermination de volumes d’organes et de tissus et de la densité, l’application d’une procédure d’échantillonnage aléatoire systématique pondérée en fonction du volume pour les organes parenchymateux par comptage point, détermination de l’étendue du retrait de tissu associés à enrobage histologique des échantillons et génération d’échantillons orientés au hasard pour des analyses quantitatives stéréologiques, comme isotrope uniforme aléatoire (IUR) sections générées par les méthodes « Orientation » et « Isector » et vertical uniforme sections (RVU) aléatoires.

Technique d’immersion pour détermination de la masse de tissus ou d’organes
Figure 12 a -B montre la détermination représentative de la densité et le volume d’un rein de porc en utilisant la technique d’immersion décrite à l’étape 1.1 (Figure 1, Figure 2). Des résultats plus représentatifs des mesures de la densité des tissus ...

L’application pratique et les performances des méthodes pour la génération d’échantillons de tissus représentant des modèles animaux porcins pour un large éventail d’analyses en aval dans les projets de la biobanque sont démontrées, y compris la volumétrie, l’échantillonnage aléatoire systématique, et le traitement différencié des échantillons de tissus pour les types d’analyses qualitatives et quantitatives, morphologiques et moléculaires.

Stratégies d’échantillonnage et traitement des échantillons de tissu de la biobanque de modèles biomédicaux porcins

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Cette vidéo présente deux techniques clés d’échantillonnage et de traitement des échantillons de tissus porcins de la biobanque. La technique d’immersion estime de manière fiable le volume total des organes et des tissus, et la technique d’orientation génère des coupes de tissus isotropes aléatoires pour une estimation non biaisée des paramètres morphologiques quantitatifs. Le principal avantage de la technique d’immersion pour la détermination de la densité tissulaire est qu’elle peut être appliquée à tout type de tissu et qu’elle produit des résultats fiables pour les petits comme pour les grands échantillons.Les avantages de la technique d’orientation sont qu’elle est très efficace et qu’elle fonctionne également avec de grands échantillons de tissus. Pour commencer la volumétrie, pour un grand organe, excisez un morceau de tissu de taille appropriée de l’organe. Frottez soigneusement l’échantillon avec une serviette en papier pour éliminer l’excès de sang et de liquide tissulaire.Ensuite, pesez l’échantillon sur une balance de précision et notez le poids de l’échantillon. Ajoutez 0,9 % de solution saline dans un bécher de taille appropriée. Ne remplissez pas complètement le béc

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JoVE Journal

Medicine

Médecine

Il s'agit d'un protocole pour la préparation optimale des tissus pour les analyses génomiques, transcriptomiques et protéomiques des chauves-souris capturées à l'état sauvage. Il comprend des protocoles pour la capture et la dissection des chauves-souris, la préservation des tissus et la culture cellulaire du tissu de chauve-souris.

Collection de tissus de chauves-souris pour -Analyses d'omics et culture cellulaire primaire

Dans ce protocole, des amorces spécifiques de porcin ont été conçues, des fragments spécifiques d’ADN de porcine contenant des plasmides ont été construits, et des courbes standard pour la quantitation ont été établies. À l’aide d’amorces spécifiques aux espèces, cpsDNA a été quantifié par qPCR dans des modèles de transplantation de cellules de porc à souris et des modèles de transplantation de patchs d’artère de porc à singe.

Quantification de l’ADN spécifique du porc circulant dans le sang d’un modèle de xénotransplantation

Ce protocole détaille la technique d’ablation du cerveau porcin dans son intégralité et la dissection de plusieurs régions du cerveau couramment étudiées en neurosciences.

Extraction et dissection du cerveau de porc domestiqué

Dans les travaux suivants, nous décrivons les étapes consécutives nécessaires à l'établissement d'une grande biobanque de cancer colorectal et pancréatique.

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The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

Caractérisation des cellules endothéliales de croissance sanguine (BOEC) à partir du sang périphérique porcin

Les biobanques sont des ressources cruciales pour la recherche biomédicale et l’unité Biobanque de médecine translationnelle et numérique de l’Institut européen d’oncologie est un modèle dans ce domaine. Nous fournissons ici une description détaillée des procédures opérationnelles normalisées des biobanques pour la gestion de différents types d’échantillons biologiques humains.

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Amélioration de la fiabilité des biobanques de tumeurs de la prostate grâce à une technique d’échantillonnage et une caractérisation histologique améliorées

Ce protocole décrit la réalisation d’une craniectomie à l’aide d’une perceuse pneumatique à grande vitesse sur un porc Landrace danois âgé de 3 mois. L’accès se fait par l’os frontal et révèle la dure-mère ventrale et les hémisphères cérébraux sous-jacents. Cette procédure permet d’accéder à une grande partie du cerveau du porc.

Accès au cerveau porcin par forage pneumatique à grande vitesse

Ici, nous présentons une méthode standard pour isoler efficacement les cellules souches et les adipocytes dérivés de l’adipos, caractérisée par une réduction de &gt; 90 % du temps de traitement, une forte viabilité cellulaire et une large compatibilité.

Isolation efficace des cellules souches et adipocytes dérivés de l’adipeux à partir du tissu adipeux porcine

Dans les sections suivantes, nous décrivons les procédures pour la préparation d'alginate de microsphères pour une utilisation dans des applications biomédicales. Nous spécifiquement illustrent une technique pour créer alginate multicouche microsphères dans le double but de la cellule et l'encapsulation de protéines en tant que traitement potentiel pour les diabétiques de type 1.

Génération d&#39;alginate de microsphères pour des applications biomédicales

Découvrez les techniques d'échantillonnage de tissus porcins pour biobanque : la méthode de submersion pour estimer les volumes et la technique de l'orientateur pour générer des coupes isotropes aléatoires permettant une analyse morphologique quantitative sans biais.

Stratégies d’échantillonnage et traitement des échantillons de tissu de la biobanque de modèles biomédicaux porcins

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