Un modèle murin syngénique bioluminescentes et Fluorescent orthotopique du Cancer de la Prostate androgéno-dépendants et résistant à la Castration

Le but du présent protocole est de démontrer l’injection intra prostatique de cellules de cancer de la prostate, avec castration ultérieure. Orthotopique des modèles précliniques de cancer de la prostate androgéno-dépendants et résistant à la castration sont essentielles pour étudier la maladie dans le contexte d’un micro-environnement tumeur cliniquement pertinents et un hôte immunocompétent.

L’objectif global de cette procédure est d’effectuer une injection intra-prostatique de cellules cancéreuses murines pour induire la formation de tumeurs orthotopiques syngéniques capables de modéliser à la fois le cancer de la prostate androgéno-dépendant et résistant à la castration. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du cancer de la prostate, telles que ce qui motive le développement du cancer de la prostate et quels traitements fonctionnent le mieux pour éliminer ces tumeurs. Les principaux avantages de cette technique sont que les tumeurs orthotopiques sont génétiquement plus complexes, qu’elles se développent dans un microenvironnement tumoral cliniquement représentatif et qu’elles peuvent être génétiquement modifiées avant l’injection.

Les implications de cette technique s’étendent au traitement du cancer de la prostate humain, car les tumeurs orthotopiques répondent aux thérapies de la même manière que celle observée chez les patients humains. Après avoir confirmé une absence de réponse au pincement des orteils, appliquez une pommade sur les yeux de la souris et rasez toute la fourrure de l’abdomen de l’animal. Stérilisez la peau exposée avec trois cycles de gommage chirurgical à l’aide de tampons stériles non adhérents suivis de lingettes imbibées d’alcool stériles.

Lorsque la peau est sèche, placez la souris en position couchée sur une surface propre au-dessus d’un coussin chauffant directement sous l’objectif d’un microscope chirurgical propre. Et couvrez l’animal avec un drapé stérile avec un petit trou découpé sur l’abdomen. Faites une incision d’un centimètre dans la peau externe et la musculature abdominale interne le long de la ligne médiane de l’abdomen au-dessus du pénis et des glandes préputiales.

Localisez l’une des vésicules séminales bilatérales et les lobes antérieurs de la prostate qui sont généralement postérieurs, latéraux et légèrement supérieurs à la vessie. Demandez à un assistant de mélanger la solution de cellules cancéreuses MIC-CAP Matrigel avec un pipetage doux et d’aspirer lentement 30 microlitres de cellules dans une aiguille de calibre 28 attachée à une seringue de 50 microlitres. Ensuite, à l’aide de la pince à tissus Graefe, soulevez doucement l’extrémité d’une vésicule séminale pour créer une tension sur le tissu sans perforer la vésicule et insérez soigneusement le biseau de l’aiguille parallèlement à l’axe long du lobe antérieur de la prostate. Injectez lentement tout le volume des cellules dans le lobe, puis rétractez lentement l’aiguille pour éviter les fuites.

Une injection réussie se manifestera par un engorgement du lobe antérieur de la prostate. Maintenez soigneusement et régulièrement la vésicule séminale et le lobe de la prostate injecté à l’extérieur de la souris pendant environ 30 secondes pour permettre au Matrigel de se solidifier partiellement dans le lobe. Utilisez un applicateur stérile à embout en polyester pour recueillir toute fuite de solution cellulaire dans l’abdomen afin d’empêcher le développement de tumeurs non orthotopiques.

Une injection intraprothétique précise est essentielle pour le développement de tumeurs non orthotopiques. Prendre des précautions supplémentaires pour éviter de perforer la vésicule séminale, injecter lentement la suspension de cellules cancéreuses et recueillir toute fuite cellulaire augmentera le succès de cette procédure. Maintenant, ramenez doucement la vésicule séminale et le lobe injecté dans l’abdomen sans exercer de pression sur le lobe et remplacez tous les tissus extériorisés.

À l’aide de sutures à l’aiguille de coupe inversée résorbables 5-0 en vicryl, fermez la musculature abdominale interne avec des points de suture continus suivis de la fermeture de la peau abdominale externe avec des points interrompus à l’aide de sutures à l’aiguille de coupe inversée non résorbables en monofilament de nylon 4-0. Ensuite, administrez une analgésie postopératoire et placez la souris dans une cage sans litière à mi-chemin sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce qu’elle se rétablisse complètement. La transfection stable des cellules Myc-CaP pour l’expression de luciférase et de mCherry permet aux tumeurs de la prostate d’être suivies d’une bioluminescence et d’une fluorescence in vivo non invasives.

Ici, des tumeurs représentatives disséquées de l’abdomen au 30e jour après l’injection intra-prostatique sont montrées. Avec une technique appropriée, le volume et le poids de la tumeur peuvent être enregistrés avec une erreur standard relativement faible, bien qu’une certaine variabilité soit attendue entre les petites et les grandes masses tumorales. Les cellules cancéreuses murines injectées par injection intra-prostatique peuvent également être analysées par immunohistochimie pour détecter la présence de cellules T CD3 positives infiltrant la tumeur ou d’autres cellules immunitaires d’intérêt.

De plus, ce modèle fournit un critère de survie objectif, car la grande masse tumorale primaire provoque une ascite abdominale hémorragique et/ou une diminution du toilettage ambulatoire et/ou de la piloérection. La castration trois jours après l’injection intra-prostatique entraîne une régression tumorale robuste suivie d’une récidive tumorale éventuelle après environ 30 jours, représentative d’un cancer de la prostate résistant à la castration. La dissection et l’analyse histologique des tumeurs cancéreuses de la prostate résistantes à la castration ne révèlent aucune différenciation neuroendocrinienne car les tumeurs maintiennent des niveaux élevés de récepteurs aux androgènes et sont négatives pour le marqueur neuroendocrinien synaptophysine.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 20 à 30 minutes si elle est correctement exécutée. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler d’administrer des analgésiques pré et postopératoires et d’effectuer toutes les interventions chirurgicales en utilisant une technique stérile et avec l’aide d’un assistant chirurgical. À la suite de cette procédure, d’autres méthodes telles que l’immunohistochimie, la cytométrie en flux et l’évaluation du volume et du poids de la tumeur et de la survie des animaux peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur les réponses aux immunothérapies et à d’autres thérapies expérimentales.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’injecter des cellules cancéreuses de la prostate dans le lobe antérieur de la prostate de souris pour une éventuelle castration chirurgicale et une analyse de la régression et de la récidive de la tumeur. N’oubliez pas que travailler avec des cellules cancéreuses peut être extrêmement dangereux et qu’il y a des précautions telles que le port d’un équipement de protection individuelle approprié qui doit toujours être pris lors de l’exécution de cette procédure.