Une hépatectomie partielle lobulaire : Un modèle chirurgical pour la régénération du foie morphologique

L’objectif global de cette intervention chirurgicale est d’induire une régénération morphologique du foie par hépatectomie lobulaire partielle. Cette méthode peut répondre à des questions clés dans les domaines de la biologie des cellules souches et de la médecine régénérative sur la régénération morphologique du foie et les cellules souches spécifiques du foie. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est peu invasive et ne nécessite pas d’agressions chimiques ou de cautérisation.

Avant de toucher les animaux, frottez la litière de la cage de la mère sur les gants. Transférez ensuite tous les chiots et une partie de la litière de la cage de la mère dans une cage vide sur un coussin chauffant. Ensuite, placez un chiot sous un microscope à dissection.

Après avoir confirmé le niveau approprié de sédation par absence de réponse au pincement des orteils, utilisez un petit tampon de gaze pour désinfecter la paroi abdominale postérieure de l’animal avec de la bétadine. Utilisez des ciseaux de micro-dissection et des pinces pour faire une incision d’un demi-centimètre médio-claviculaire gauche immédiatement sous la cage thoracique. Utilisez la pince pour séparer délicatement la peau.

Ensuite, faites une deuxième incision plus profonde dans la cavité péritonéale et utilisez le bord émoussé arrière des ciseaux et des pinces de micro-dissection pour appliquer une légère pression latérale sur les deux côtés de l’abdomen, forçant l’apex du lobe gauche hors de la cavité péritonéale. Lorsque l’apex gauche du lobe gauche est visible, amputez la quantité expérimentale appropriée de tissu du lobe et placez le tissu dans un tube de 1,5 millilitre de PBS sur de la glace. À l’aide d’un morceau de gaze roulé, ramenez doucement le lobe gauche dans la cavité péritonéale.

Retirez la gaze lorsque le saignement s’arrête et mouillez le site chirurgical et la zone environnante avec de la gaze imbibée de PBS. Fermez le site chirurgical avec des sutures et un point de suture. Ensuite, roulez doucement mais soigneusement une gaze imbibée de PBS sur le site du chiot et de la plaie, en veillant à ce qu’il ne reste pas de sang ou de bétadine.

Laissez le petit récupérer près des compresses de gaze exposées aux excréments et à l’urine de la mère. Lorsque tous les petits ont été hépatectomisés, retournez tous les animaux et la litière dans la cage de la mère. Après avoir pesé les lobes, fixez les échantillons de tissus dans du paraformaldéhyde à 2 % pendant une heure à température ambiante.

À la fin de la fixation, transférez les tissus dans des moules de congélation individuels contenant un fluide de température de coupe optimal pour la congélation sur de la glace sèche. Et acquérez des sections de 7 à 10 micromètres de chaque lobe à l’aide de n’importe quel cryostat standard. Vérifiez les chiots quotidiennement pendant au moins 56 jours pour confirmer que leurs plaies restent fermées et injectez une analgésie 24 et 48 heures après la chirurgie.

Au point final expérimental approprié, prélevez et pesez le foie de chaque petit sur bloc. Ensuite, séparez soigneusement chaque lobe individuel au niveau de son attache proximale et comparez la masse du lobe gauche amputé à la masse de l’ensemble du foie pour déterminer l’étendue de la régénération dans chaque lobe. Une régénération subtile du lobe gauche peut être observée 7 à 14 jours après la chirurgie et une régénération complète est souvent observée après 56 jours.

Sans différence significative dans les zones hépatocytaires du foie régénéré révélée par l’analyse histologique. De plus, les injections néonatales d’EdU chez la souris indiquent une augmentation significative du nombre de cellules proliférantes dans le lobe gauche blessé en régénération par rapport aux témoins non blessés, ce qui suggère que la prolifération cellulaire contribue à la régénération du lobe gauche chez les nouveau-nés. L’hépatectomie chez les souris juvéniles du jour 14 postnatal entraîne une diminution de la régénération du lobe gauche avec une compensation accrue des lobes non blessés.

Indiquant qu’au bout de 14 jours, la réponse de la lésion à la résection aiguë passe de la régénération spécifique du lobe à la compensation globale. Une fois maîtrisée, cette technique peut être complétée en 15 minutes si elle est exécutée correctement. Lors de cette procédure, il est important d’être aussi prudent que possible afin de ne pas causer de stress supplémentaire à la mère ou aux chiots.

Après cette procédure, d’autres méthodes telles que les hépatécomies en série ou les lésions hépatiques chroniques peuvent être utilisées pour évaluer davantage le potentiel de régénération du foie. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la biologie des cellules souches pour explorer la régénération du foie chez la souris néonatale. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de réaliser une amputation contrôlée spécifique au lobe du foie de souris néonatale.

N’oubliez pas que travailler avec de l’isoflurane est extrêmement dangereux et que des précautions telles qu’un masque facial et des gants doivent toujours être prises lors de cette procédure.