Name: Criblage à haut débit siARN préjudice de cellules épithéliales de chloropicrine et cornée induite par le fluorure d’hydrogène (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 20 s
Description: Découvrez le criblage siRNA à haut débit pour étudier les lésions toxiques des cellules épithéliales cornéennes exposées au fluorure d'hydrogène et à la chloropicrine. Cette méthode permet d'identifier rapidement les voies cellulaires impliquées dans la réponse aux toxiques.

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Cette recherche a été financée par le National instituts de santé contrecarrer programme interagences accord # AOD13015-001. Nous tenons à remercier Stephanie Froberg et Peter Hurst pour leurs efforts et leur expertise en matière de production vidéo.

<ol><li>Randleman, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRandleman%2C+B+%22Drugs%2C+Diseases+and+Procedures%22">Drugs, Diseases and Procedures</a>. Hampton, R. , Medscape. (2011).</li>
<li>Fish, R., Davidson, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+ocular+thermal+and+chemical+injuries%2C+including+amniotic+membrane+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Management of ocular thermal and chemical injuries, including amniotic membrane therapy.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 21 (4), 317-321 (2010).</li>
<li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+treatment+strategies+for+hydrofluoric+acid+burns%3A+current+status+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">A review of treatment strategies for hydrofluoric acid burns: current status and future prospects.</a> Burns. 40 (8), 1447-1457 (2014).</li>
<li>Gaytan, B. D., Vulpe, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+toxicology%3A+tools+to+advance+the+future+of+toxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Functional toxicology: tools to advance the future of toxicity testing.</a> Frontiers in Genetics. 5, 110(2014).</li>
<li>North, M., Vulpe, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3100848/">Functional toxicogenomics: mechanism-centered toxicology.</a> International Journal of Molecular Sciences. 11 (12), 4796-4813 (2010).</li>
<li>McManus, M. T., Sharp, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+silencing+in+mammals+by+small+interfering+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Genetics%22%5BJournal%5D)">Gene silencing in mammals by small interfering RNAs.</a> Nature Reviews Genetics. 3 (10), 737-747 (2002).</li>
<li>Bassik, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+mammalian+genetic+interaction+map+reveals+pathways+underlying+ricin+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A systematic mammalian genetic interaction map reveals pathways underlying ricin susceptibility.</a> Cell. 152 (4), 909-922 (2013).</li>
<li>Solaimani, P., Damoiseaux, R., Hankinson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+RNAi+high-throughput+screen+identifies+proteins+necessary+for+the+AHR-dependent+induction+of+CYP1A1+by+2%2C3%2C7%2C8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Genome-wide RNAi high-throughput screen identifies proteins necessary for the AHR-dependent induction of CYP1A1 by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin.</a> Toxicological Sciences. 136 (1), 107-119 (2013).</li>
<li>Cox, J. A., Gooding, R., Kolakowski, J. E., Whitmire, M. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCox%2C+JA+%22Chemical+Terrorism+Risk+Assessment%3B+CSAC+12-006%22">Chemical Terrorism Risk Assessment; CSAC 12-006</a>. , U.S. Department of Homeland Security, Science and Technology Directorate, Chemical Security Analysis Center. Aberdeen Proving Ground, MD. (2012).</li>
<li>Zang, R., Li, D., Tang, I., Wang, J., Yang, S. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/267200748_Cell-Based_Assays_in_High-Throughput_Screening_for_Drug_Discovery">Cell-Based Assays in High-Throughput Screening for Drug Discovery.</a> International Journal of Biotechnology for Wellness Industries. 1, 31-51 (2012).</li>
<li>Ray, R., Hauck, S., Kramer, R., Benton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+convenient+fluorometric+method+to+study+sulfur+mustard-induced+apoptosis+in+human+epidermal+keratinocytes+monolayer+microplate+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A convenient fluorometric method to study sulfur mustard-induced apoptosis in human epidermal keratinocytes monolayer microplate culture.</a> Drug and Chemical Toxicology. 28 (1), 105-116 (2005).</li>
<li>Ruff, A. L., Dillman, J. F. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfur+mustard+induced+cytokine+production+and+cell+death%3A+investigating+the+potential+roles+of+the+p38%2C+p53%2C+and+NF-kappaB+signaling+pathways+with+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemical+and+Molecular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Sulfur mustard induced cytokine production and cell death: investigating the potential roles of the p38, p53, and NF-kappaB signaling pathways with RNA interference.</a> Journal of Biochemical and Molecular Toxicology. 24 (3), 155-164 (2010).</li>
<li>Smith, W. J., Gross, C. L., Chan, P., Meier, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+human+epidermal+keratinocytes+in+culture+as+a+model+for+studying+the+biochemical+mechanisms+of+sulfur+mustard+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The use of human epidermal keratinocytes in culture as a model for studying the biochemical mechanisms of sulfur mustard toxicity.</a> Cell Biology and Toxicology. 6 (3), 285-291 (1990).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Toxnet%22">Toxnet</a>. , 
 <a target="_blank" href="https://toxnet.nlm.nih.gov/">https://toxnet.nlm.nih.gov/</a> (2016).</li>
<li>Bancroft, W. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBancroft%2C+WD+%22The+Medical+Department+of+the+United+States+Army+in+the+World+War%22">The Medical Department of the United States Army in the World War</a>. 14, Otis Historical Archives, National Museum of Health and Medicine. (1926).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chloropicrin+Risk+Characterization+Document%22">Chloropicrin Risk Characterization Document</a>. , California Environmental Protection Agency. (2012).</li>
<li>Aigueperse, J., et al. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/14356007.a11_307">Fluorine Compounds, Inorganic. Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry</a>. , Wiley-VCH. (2000).</li>
<li>Sotozono, C. <a target="_blank" href="https://journals.lww.com/corneajrnl/Abstract/2000/11003/Second_Injury_in_the_Cornea__The_Role_of.4.aspx">Second Injury in the Cornea: The Role of Inflammatory Cytokines in Corneal Damage and Repair.</a> Cornea. 19 (6), S155-S159 (2000).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guidelines+and+Recommendations+for+Dharmacon+siRNA+Libraries%22">Guidelines and Recommendations for Dharmacon siRNA Libraries</a>. , 
 <a target="_blank" href="http://dharmacon.gelifesciences.com/uploadedFiles/Resources/sirna-libraries-guidelines.pdf">http://dharmacon.gelifesciences.com/uploadedFiles/Resources/sirna-libraries-guidelines.pdf</a> (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Lipofectamine+RNAiMAX+Reagent%22">Lipofectamine RNAiMAX Reagent</a>. , 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/migration/files/cell-culture/pdfs.par.72509.file.dat/Lipofectamine%20rnaimax%20protocol%20v2.0.pdf
">https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/migration/files/cell-culture/pdfs.par.72509.file.dat/Lipofectamine%20rnaimax%20protocol%20v2.0.pdf
</a> (2017).</li>
<li>Denizot, F., Lang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorimetric+assay+for+cell+growth+and+survival.+Modifications+to+the+tetrazolium+dye+procedure+giving+improved+sensitivity+and+reliability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid colorimetric assay for cell growth and survival. Modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability.</a> Journal of Immunological Methods. 89 (2), 271-277 (1986).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22IL-8+%28human%29+AlphaLISA+Detection+Kit%2C+5%2C000+Assay+Points%22">IL-8 (human) AlphaLISA Detection Kit, 5,000 Assay Points</a>. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.perkinelmer.com/searchresult?searchName=AL224F&_csrf=dd35c533-8dc4-4005-a87f-c5ab3a519bf3">http://www.perkinelmer.com/searchresult?searchName=AL224F&_csrf=dd35c533-8dc4-4005-a87f-c5ab3a519bf3</a> (2016).</li>
<li>Araki-Sasaki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+SV40-immortalized+human+corneal+epithelial+cell+line+and+its+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">An SV40-immortalized human corneal epithelial cell line and its characterization.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 36 (3), 614-621 (1995).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Statistical+Parameter+for+Use+in+Evaluation+and+Validation+of+High+Throughput+Screening+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">A Simple Statistical Parameter for Use in Evaluation and Validation of High Throughput Screening Assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
<li>Ruff, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+model+for+sulfur+mustard-induced+ocular+injury+and+long-term+clinical+analysis+of+injury+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cutaneous+and+Ocular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse model for sulfur mustard-induced ocular injury and long-term clinical analysis of injury progression.</a> Cutaneous and Ocular Toxicology. 32 (2), 140-149 (2013).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22GeneTitan+MC+Instrument+North+America%2FJapan+%28110V%29%22">GeneTitan MC Instrument North America/Japan (110V)</a>. , 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/00-0372?SID=srch-srp-00-0372">https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/00-0372?SID=srch-srp-00-0372</a> (2018).</li>
<li>Zhang, X. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pair+of+new+statistical+parameters+for+quality+control+in+RNA+interference+high-throughput+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics%22%5BJournal%5D)">A pair of new statistical parameters for quality control in RNA interference high-throughput screening assays.</a> Genomics. 89 (4), 552-561 (2007).</li>
<li>He, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Sodium+Fluoride+on+the+Proliferation+and+Gene+Differential+Expression+in+Human+RPMI8226+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Trace+Element+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of Sodium Fluoride on the Proliferation and Gene Differential Expression in Human RPMI8226 Cells.</a> Biological Trace Element Research. 167 (1), 11-17 (2015).</li>
<li>Tabuchi, Y., Yunoki, T., Hoshi, N., Suzuki, N., Kondo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+gene+networks+involved+in+sodium+fluoride-elicited+cell+death+accompanying+endoplasmic+reticulum+stress+in+oral+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Genes and gene networks involved in sodium fluoride-elicited cell death accompanying endoplasmic reticulum stress in oral epithelial cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 15 (5), 8959-8978 (2014).</li>
<li>Pesonen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloropicrin-induced+toxic+responses+in+human+lung+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Chloropicrin-induced toxic responses in human lung epithelial cells.</a> Toxicology Letters. 226 (2), 236-244 (2014).</li>
<li>Wilhelm, S. N., Shepler, K., Lawrence, L. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWilhelm%2C+SN+%22Fumigants%3A+Environmental+Fate%2C+Exposure%2C+and+Analysis%22">Fumigants: Environmental Fate, Exposure, and Analysis</a>. Seiber, J. N., et al. 652, American Chemical Society. Ch. 8 (1997).</li>
<li>Adamek, E., Pawlowska-Goral, K., Bober, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+effects+of+fluoride+ions+on+enzyme+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annales+Academiae+Medicae+Stetinensis%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo effects of fluoride ions on enzyme activity.</a> Annales Academiae Medicae Stetinensis. 51 (2), 69-85 (2005).</li>
<li>Heard, K., Hill, R. E., Cairns, C. B., Dart, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+neutralizes+fluoride+bioavailability+in+a+lethal+model+of+fluoride+poisoning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicology%3A+Clinical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Calcium neutralizes fluoride bioavailability in a lethal model of fluoride poisoning.</a> Journal of Toxicology: Clinical Toxicology. 39 (4), 349-353 (2001).</li>
<li>Sparks, S. E., Quistad, G. B., Casida, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloropicrin%3A+reactions+with+biological+thiols+and+metabolism+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Research+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Chloropicrin: reactions with biological thiols and metabolism in mice.</a> Chemical Research in Toxicology. 10 (9), 1001-1007 (1997).</li>
<li>Sparks, S. E., Quistad, G. B., Li, W., Casida, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloropicrin+dechlorination+in+relation+to+toxic+action%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemical+and+Molecular+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Chloropicrin dechlorination in relation to toxic action.</a> Journal of Biochemical and Molecular Toxicology. 14 (1), 26-32 (2000).</li>
<li>Byron, K. A., Varigos, G., Wootton, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1421657/">Hydrocortisone inhibition of human interleukin-4.</a> Immunology. 77 (4), 624-626 (1992).</li>
<li>van der Poll, T., Lowry, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+interleukin+8+production+by+human+whole+blood+is+enhanced+by+epinephrine+and+inhibited+by+hydrocortisone%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced interleukin 8 production by human whole blood is enhanced by epinephrine and inhibited by hydrocortisone.</a> Infection and Immunity. 65 (6), 2378-2381 (1997).</li>
<li>Solomon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline+inhibition+of+interleukin-1+in+the+corneal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Doxycycline inhibition of interleukin-1 in the corneal epithelium.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (9), 2544-2557 (2000).</li>
<li>Mishra, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+oxidative+stress-induced+epigenetic+modifications+in+pancreatic+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial oxidative stress-induced epigenetic modifications in pancreatic epithelial cells.</a> International Journal of Toxicology. 33 (2), 116-129 (2014).</li>
<li>Stockholm, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+phenotypic+heterogeneity+in+a+clonal+cell+population+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The origin of phenotypic heterogeneity in a clonal cell population in vitro.</a> PLoS One. 2 (4), e394(2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22ATCC+Animal+Cell+Culture+Guide%22">ATCC Animal Cell Culture Guide</a>. , American Type Culture Collection. Manassas, VA. (2014).</li>
<li>Lundholt, B. K., Scudder, K. M., Pagliaro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+reducing+edge+effect+in+cell-based+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">A simple technique for reducing edge effect in cell-based assays.</a> Journal of Biomolecular Screening. 8 (5), 566-570 (2003).</li>
<li>Mpindi, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+normalization+methods+on+high-throughput+screening+data+with+high+hit+rates+and+drug+testing+with+dose-response+data%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Impact of normalization methods on high-throughput screening data with high hit rates and drug testing with dose-response data.</a> Bioinformatics. 31 (23), 3815-3821 (2015).</li>
<li>Zhang, X. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illustration+of+SSMD%2C+z+score%2C+SSMD%2A%2C+z%2A+score%2C+and+t+statistic+for+hit+selection+in+RNAi+high-throughput+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">Illustration of SSMD, z score, SSMD*, z* score, and t statistic for hit selection in RNAi high-throughput screens.</a> Journal of Biomolecular Screening. 16 (7), 775-785 (2011).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Clause de non-responsabilité: les opinions exprimées dans cet article sont ceux des auteurs et ne reflètent pas la politique officielle du département de l’armée, ministère de la défense ou le gouvernement des États-Unis. Cette recherche a été soutenue par un accord interinstitutions entre NIH/NIAID et le USAMRICD et en partie par une nomination au Programme Postgraduate Research Participation à l’US armée médical recherche Institut de défense chimique administrée par le chêne Crête d’Institut pour la Science et l’éducation à travers un accord interinstitutions entre le U.S. Department of Energy et USAMRMC.

Dans les présentes, nous décrivons nos méthodes et nos résultats sur le développement d’une cellule épithéliale de haut débit cornée, modèle pour l’étude des lésions HF et CP de dépistage. Nous présentons aussi les résultats de l’écran de siARN primaires pour blessure de HF. Il y avait de nombreux défis pour le développement de modèles HTS pour l’étude des blessures TIC. Les méthodes que nous pourrions trouver dans la littérature concernant l’étude de HF, HFA ou CP dans les modèles de culture cellulaire ont été d’un gran...

Lésion oculaire induite par la substance toxique est une véritable urgence oculaire parce que les produits chimiques sont susceptibles d’infliger rapidement des lésions tissulaires importants. Malheureusement, les traitements pour lésion de la cornée induite par la substance toxique ne sont généralement favorables comme aucune thérapeutique spécifique n’existe pour soigner ces blessures. L’actuelle stratégie de traitement est non spécifique et comprend principalement des traitements thérapeutiques topiques tels que les lubrifiants, antibiotiques, et cycloplegics suivie d’anti-inflammatoires (par exemple, stéroïdes) une fois la cornée a re-epithelialized1 ,2. Malgré les meilleur traitement thérapeutique options actuelles disponibles, le pronostic à long terme est généralement médiocre en raison d’une opacification cornéenne progressive et une néovascularisation2,3.
Modèles animaux ont traditionnellement été utilisés pour étudier la toxicité chimique et comprendre les mécanismes des blessures. Cependant, les études chez l’animal sont fastidieux et coûteux. Il y a aussi des efforts pour réduire les essais sur les animaux. Par exemple, la législation REACH (EC 1907/2006) dans l’Union européenne a dispositions visant à réduire les essais sur les animaux. Les dispositions comprennent une exigence que compagnies de partagent des données afin d’éviter les animaux tests et obtenir l’approbation de l’Agence des produits chimiques avant d’effectuer les tests proposés sur les animaux. En vertu des dispositions du règlement REACH, l’expérimentation animale doit être un dernier recours. Il y a aussi la réglementation européenne de cosmétiques (ce 1223/2009) qui a éliminé les tests des cosmétiques chez les animaux. Lorsque des études chez l’animal sont effectués, ils sont guidés par les principes des 3R (raffinement, réduction et remplacement), qui établit un cadre pour effectuant des recherches sur les animaux plus humaine, ce qui réduit le nombre d’animaux utilisés et en utilisant des solutions de rechange non animale Lorsque c’est possible. Pour ces raisons, le domaine de la toxicologie a cherché à adopter les dosages in vitro qui permettent de mieux comprendre les mécanismes moléculaires de toxicité et peuvent se faire à plus haut débit4. Il s’agit d’une approche fonctionnelle de toxicologie où les substances toxiques sont définis par leur fonction, et non uniquement par leur composition chimique. Fait un pas de plus, fonctionnelle toxicogénomique cherche à comprendre le rôle que jouent les gènes spécifiques dans les effets des substances toxiques,5. Avec l’application de la technologie de siARN, écrans pour étudier la fonction des gènes dans les réponses moléculaires et cellulaires aux substances toxiques peuvent être faits à haut débit. siARN sont double brin molécules d’ARN qui sont 19-25 nucléotides qui profiter du post transcriptionnelle de gènes silencieux parcours présent dans toutes les cellules de mammifères,6. Celles-ci sont synthétiquement faits et conçus pour cibler un gène spécifique. Lorsque introduit dans une cellule, le siARN est traitée et un brin, le brin de guide, est chargé dans le complexe silencieux RNA-induced (RISC). Le siARN dirige le RISC à une région complémentaire dans une molécule d’ARNm et le RISC dégrade l’ARNm. Cela se traduit par la réduction de l’expression du gène spécifique. La réduction résultant de l’expression du gène spécifique peut alors être étudiée dans les cellules exposées toxiques pour déterminer la fonction de ce gène dans la réponse cellulaire à la substance toxique. Une telle approche a été utilisée afin de mieux comprendre les mécanismes de la susceptibilité de la ricine et l’induction de la procréation assistée dépendante du CYP1A17,8.
La liste de produits chimiques le terrorisme risque évaluation (CTRA) et les listes de produits chimiques industriels toxiques (TIC) ont détaillé certains produits chimiques basés sur leur toxicité et le potentiel d’être libéré au cours d’un terroriste, guerre ou accident industriel événement9. Nous appliquons un siARN criblage à haute approche toxicogénomiques (HTS) à l’étude de la CTRA liste des substances toxiques, qui ont été identifiés à risque élevé d’usage lors d’un incident terroriste. Toxicologie traditionnelle cherche à comprendre les effets indésirables ayant des produits chimiques sur les organismes vivants ; Cependant, nous avons un désir supplémentaire pour comprendre les mécanismes des blessures afin d’informer de la mise au point des thérapeutiques et des approches thérapeutiques et, éventuellement, à découvrir des molécules qui peuvent être ciblées pour le développement thérapeutique. Cet effort d’une certaine façon peut être considéré comme analogue à l’utilisation de siRNA criblage à haut débit et des essais sur des cellules de base dans la drogue découverte processus10. Une différence majeure est que la découverte de médicaments généralement cherche une cible du singulier pour la découverte thérapeutique alors que dans notre approche, il est assez improbable qu’il y aurait une cible du singulier à haute valeur thérapeutique pour le traitement de l’exposition toxique. Nous prévoyons que tout paradigme de traitement efficace pour l’exposition toxique nécessiterait une approche multi-facettes pour atteindre la haute valeur thérapeutique, et données toxicogénomiques peuvent informer vitale d’un paradigme de traitement efficace.
Benchtop automation apporte la méthodologie haut débit aux laboratoires en dehors de l’industrie pharmaceutique ou de biotechnologie. Les études in vitro à notre Institut ont été historiquement les dosages traditionnels qui sont de faible débit11,12,13. En quelques années, notre laboratoire est passée à l’utilisation de la robotique de benchtop pour effectuer des siARN criblage à haut débit. Nous présentons ici, le raffinement des modèles de cellules oculaires et le développement de in vitro des méthodes d’exposition à l’acide fluorhydrique (HF) et de la chloropicrine (CP) adapté aux siARN criblage à haut débit. Notre objectif est d’identifier des molécules qui régulent la lésion cellulaire en réponse à ces substances toxiques. Les objectifs de la bibliothèque de siARN, que nous avons sélectionné incluent les récepteurs couplés aux protéines G, protéines kinases, phosphatases, protéases, canaux ioniques et autres cibles potentiellement thérapeutiques. HF et le CP ont été sélectionnés pour l’étude en renvoyant les agents liste CTRA avec les rapports ToxNet des accidents industriels pour trouver ceux qui présentent le plus grand risque de blessure oculaire par vapeur exposition9,14. CP (formule chimique Cl3ONC2, numéro CAS 76-06-2) a été utilisé comme un gaz lacrymogène dans WWI15. Il est actuellement utilisé comme un fumigant agricole et fonctions comme un nématicide, fongicide et insecticide16. Fluorure d’hydrogène (HF) est utilisé dans les processus y compris alkylation dans les raffineries de pétrole et de la fluoration électrochimique de composés organiques17. HF (formule chimique HF, numéro CAS 62778-11-4) est un gaz, mais dans sa forme aqueuse est acide fluorhydrique (HFA numéro CAS 7664-39-3). Par conséquent, nous avons choisi d’utiliser HFA dans notre cellule en modèles d’exposition. L’antigène de T grand SV40 immortalisé ligne de cellules épithéliales cornéennes humaines QUE SV40-HCEC a été sélectionné pour l’étude. La viabilité cellulaire et les marqueurs inflammatoires IL-8 ont été choisis comme points de terminaison, parce que les cibles qui sont impliqués dans la lésion cellulaire devraient être reflétées dans la mort cellulaire et la réponse inflammatoire. Plus précisément, si une cible devait jouer un rôle protecteur dans l’exposition toxique, mort cellulaire et/ou la production de cytokines inflammatoires devrait augmenter lorsque l’expression cible est inhibée par les siARN. L’inverse serait vrai pour les cibles qui jouent un rôle négatif. En outre, inflammation chronique semble jouer un rôle dans la pathologie de la cornée après que exposition et intervention dans les voies de la mort cellulaire peuvent améliorer les résultats cliniques2,18.

<table><tbody><tr><td>Plate-forme de manipulation de liquide Bravo</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>G5409A</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur de plaques Bravo</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>Option 159</td><td></td>Tête</tr> de <tr>pipette<td>jetable Bravo 96LT</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>Option 178</td><td>Tête de pipetage à large pointe à 96 canaux</td></tr><tr><td>Bravo 96ST</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>Option 177</td><td>Pipetage à petite pointe à 96 canaux unité principale</td></tr><tr><td>Bravo 384ST tête de</td> pipetage jetable <td>Agilent ou équivalent</td><td>Option 179</td><td>384 canaux petite tête de pipetage</td></tr><tr><td>Bravo 96 250 &mu ; L embouts de barrière stérile</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>19477-022</td><td></td></tr><tr><td>Bravo 384 30 &mu ; L embouts de barrière stérile</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>19133-212</td><td></td></tr><tr><td>Bravo 384 70 &mu ; L embouts de barrière stérile</td><td>Agilent ou équivalent</td><td>19133-212</td><td></td></tr><tr><td>EnSpire lecteur de plaques multimode</td><td>Perkin Elmer ou équivalent</td><td>2300-0000</td><td>Détecteur de test AlphaLISA avec excitation laser haute puissance</td></tr><tr><td>IL-8 (humain) Kit de détection AlphaLISA&nbsp ;</td><td>Perkin Elmer ou équivalent</td><td>AL224F</td> sans <td>billes de lavage Microscope</td></tr><tr><td>ProxiPlate-384 Plus blanc 384 microplaques à puits peu profond</td><td>Perkin Elmer ou</td><td>équivalent 6008359</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td></td><td>13778500 Réactif de transfection</td></tr><tr><td>Opti-MEM 1 Sérum réduit Medium</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco ou équivalent</td><td>12605010</td><td>Solution de détachement cellulaire</td></tr><tr><td>IncuCyte Zoom</td><td>Essen Instruments ou équivalent</td><td>ESSEN BIOSCI 4473</td><td>Microscope automatisé logé dans un incubateur</td></tr><tr><td>Chloropicrin</td><td>Trinity Manufacturing ou équivalent</td><td>N/A</td><td>Toxicité aiguë et irritant</td></tr><tr><td>DMEM-F12 Milieu de culture cellulaire</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td>11330-057</td><td>Contient HEPES</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td>1891471</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique humain (grade de culture cellulaire)</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td>E9644-.2MG</td><td></td></tr><tr><td>Insuline humaine recombinante (grade de culture cellulaire)</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>Solution de pénicilline-streptomycine (grade de culture cellulaire)</td><td>Invitrogen ou équivalent</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone (qualité culture cellulaire)</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>H0888-10G</td><td></td></tr><tr><td>Glucose&nbsp ; (qualité culture cellulaire)</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp ; (qualité culture cellulaire)</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>P5493</td><td></td></tr><tr><td>siRNA</td><td>Dharmacon ou équivalent</td><td>divers</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de thiazolyle bromure de tétrazolium</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>M5655</td><td>Substrat de test MTT</td></tr><tr><td>Tampon siRNA Thermo</td><td>ou équivalent</td><td>B002000</td><td></td></tr><tr><td>96 plaques de culture cellulaire</td><td>Corning ou équivalent</td><td>CLS3595</td><td></td></tr><tr><td>culture cellulaire T150 flacons</td><td>Corning ou équivalent</td><td>CLS430825</td><td></td></tr><tr><td>BSL-2 hotte de culture cellulaire</td><td>Nuaire ou équivalent</td><td>NU-540</td><td></td></tr><tr><td>Réservoirs robotisés de 300 mL</td><td>Thermo ou équivalent</td><td>12-565-572&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>96 réservoirs d’automatisation à chicanes</td><td>Thermo ou équivalent</td><td>1064-15-8</td><td></td></tr><tr><td>Bouteilles de stockage stériles jetables de 500 ml</td><td>Corning ou équivalent</td><td>CLS430282</td><td></td></tr><tr><td>Thermosoudeuse sur microplaques</td><td>Thermo ou équivalent</td><td>AB-1443A</td><td></td></tr><tr><td>Feuille de thermoscellage sur microplaques</td><td>Thermo ou équivalent</td><td>AB-0475</td><td></td></tr><tr><td>Cardamonin</td><td>Tocris ou équivalent</td><td>2509</td><td>Anti-inflammatoire, utilisé comme témoin positif</td></tr><tr><td>SKF 86002&nbsp ;</td><td>Tocris ou équivalent</td><td>2008</td><td>Anti-inflammatoire, utilisé comme témoin positif</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>Acide fluorhydrique à 48 %</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>339261</td><td>Toxicité corrosive et aiguë</td></tr><tr><td>1000 &mu ; L Pipettes monocanaux</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17014382</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu ; L Pipettes monocanaux</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17014391</td><td></td></tr><tr><td>20 &mu ; L Pipettes monocanaux</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17014392</td><td></td></tr><tr><td>1000 &mu ; L Pipettes 12 canaux</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17014497</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu ; L Pipettes 12 canaux</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17013810</td><td></td></tr><tr><td>20 &mu ; L Pipettes 12 canaux</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17013808</td><td></td></tr><tr><td>pointes de pipette 1000 &mu ; L</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17002920</td><td></td></tr><tr><td>pointes de pipette 200 &mu ; L</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17014294</td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette 20 &mu ; L</td><td>Rainin ou équivalent</td><td>17002928</td><td></td></tr><tr><td>Hotte chimique</td><td>Jamestown Metal Products</td><td>MHCO_229</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de stockage d’échantillons à 384 puits</td><td>Thermo ou équivalent</td><td>262261</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium</td><td>Sigma ou équivalent</td><td>S6191</td><td></td></tr><tr><td>Tubes coniques de 50 mL</td><td>Thermo ou équivalent</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques 50 mL</td><td>Corning ou équivalent</td><td>07-200-576</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques 25 mL</td><td>Corning ou équivalent</td><td>07-200-575</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques 10 mL</td><td>Corning ou équivalent</td><td>07-200-574</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques 5 mL</td><td>Corning ou équivalent</td><td>07-200-573</td><td></td></tr><tr><td>SV40-HCEC cellules épithéliales cornéennes humaines immortalisées</td><td>N/A</td> N<td>/A</td><td>Ces cellules ne sont pas disponibles dans le commerce, mais peuvent être obtenues auprès des chercheurs cités dans l’article</td></tr><tr><td>Sceptor Handheld Automated Cell Counter</td><td>Millipore ou équivalent</td><td>PHCC20060</td><td></td></tr><tr><td>GeneTitan Multi-Channel (MC) Instrument</td><td>Affymetrix ou équivalent</td><td>00-0372</td><td></td></tr><tr><td>Affymetrix 24 et 96 plaques</td><td>Affymetrix ou équivalent</td><td>901257 ; 901434</td><td></td></tr><tr><td>Draegger tube HF</td><td>Draeger ou équivalent</td><td>8103251</td><td></td></tr><tr><td>tube Draegger CP</td><td>Draeger ou équivalent</td><td>8103421</td><td></td></tr><tr><td>Pompe Draegger</td><td>Draeger ou équivalent</td><td>6400000</td><td></td></tr><tr><td>Joints à plaque transparente</td><td>Resesarch Products International ou équivalent</td><td>202502</td><td></td></tr><tr><td>Réservoirs de réactifs</td><td>VistaLab Technologies ou équivalent</td><td>3054-1000</td><td></td></tr><tr><td>Xlfit</td><td>IDBS ou complément Excel équivalent</td><td>N/A</td><td>utilisé pour l’ajustement automatique des courbes</td></tr></tbody></table>

criblage à haut débit siarn préjudice de cellules épithéliales de chloropicrine et cornée induite par le fluorure d’hydrogène

High Throughput SiRNA Screening for Chloropicrin and Hydrogen Fluoride-Induced Cornea Epithelial Cell Injury

Lésion oculaire induite par la substance toxique est une véritable urgence oculaire parce que les produits chimiques sont susceptibles d’infliger rapidement des lésions tissulaires importants. Traitements pour lésion de la cornée induite par la substance toxique sont généralement favorables car aucune thérapeutique spécifique n’existe pour soigner ces blessures. Dans les efforts pour développer des traitements et thérapies pour s’occuper de l’exposition, il peut être important de comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires de ces blessures. Nous proposons que l’utilisation de criblage à ARN (siRNA) inhibiteur petit haut débit peut être un outil important qui pourrait aider à élucider plus rapidement les mécanismes moléculaires des lésions épithéliales cornée chimique. siARN sont double brin molécules d’ARN qui sont 19-25 nucléotides de long et utilisent le silençage voie pour dégrader les ARNm de gènes post-transcriptionnels ayant une homologie avec le siARN. La réduction résultant de l’expression du gène spécifique peut alors être étudiée dans les cellules exposées toxiques pour déterminer la fonction de ce gène dans la réponse cellulaire à la substance toxique. Le développement et la validation des modèles d’exposition in vitro et des méthodes pour le haut débit (HTS) de dépistage de fluorure d’hydrogène (HF) et chloropicrine-(CP) induites par des blessures oculaires sont présentés dans cet article. Même si nous avons choisi ces deux des substances toxiques, nos méthodes sont applicables à l’étude des autres substances toxiques avec des modifications mineures au protocole exposition toxique. L’antigène de T grand SV40 immortalisé ligne de cellules épithéliales cornéennes humaines QUE SV40-HCEC a été sélectionné pour l’étude. La viabilité cellulaire et la production d’IL-8 ont été choisis comme points de terminaison dans le protocole de dépistage. Plusieurs défis associés au développement de l’exposition de produits toxique et les méthodes de culture cellulaire adaptés aux études HTS sont présentés. La création de modèles HTS pour ces substances toxiques permet pour d’autres études pour mieux comprendre le mécanisme de blessure et d’écran potentiel thérapeutique pour des lésions oculaires chimiques.

Élaboration de méthodes d’exposition
Nous avons affiné et évalué la pertinence de la ligne de cellules épithéliales cornéennes humaines SV40-HCEC pour utilisation dans les études HTS. SV40-HCEC ont été immortalisé à l’aide de l’antigène de T grand SV-40 et étaient un cadeau du namawa Pal23. Il y avait trop de variables explorées dans le développement de méthodologie exposition de présente...

Criblage de RNA inhibitrice petit haut débit est un outil important qui pourrait aider à élucider plus rapidement les mécanismes moléculaires des lésions épithéliales cornée chimique. Nous présentons ci-après, le développement et la validation des modèles d’exposition et des méthodes pour le criblage à haut débit de fluorure d’hydrogène et chloropicrine-cornée épithéliales lésion induite.

Criblage à haut débit siARN préjudice de cellules épithéliales de chloropicrine et cornée induite par le fluorure d’hydrogène

Toxicant-induced ocular injury is a true ocular emergency because chemicals have the potential to rapidly inflict significant tissue damage. Treatments ...

Cette vidéo montre nos méthodes de criblage de siRNA à haut débit dans un modèle de cellule épithéliale cornéenne de lésions toxiques. Ce travail est important, car le criblage à haut débit des siRNA est une méthode rentable et rapide pour élucider les voies et les régulateurs de la réponse cellulaire aux toxiques. Ce travail pourrait nous aider à mieux comprendre comment la cornée réagit aux agressions toxiques.Préparez une suspension de cellules épithéliales de la cornée dans un milieu préchauffé contenant 0,5 microgramme par millilitre d’hydrocortisone dans une bouteille de milieu jetable. Faites tourner la bouteille pour suspendre uniformément les cellules et versez-la dans un réservoir sur le nid de secoueur orbital d’un manipulateur de liquide automatisé. Maintenez la suspension cellulaire sur une plaque chauffante à 37 degrés pendant le processus de placage des cellules.À l’aide d’un manipulateur de liquides automatisé, ajoutez des cellules aux plaques à une densité de mille cellules par puits dans 70 microlitres de milieu par puits sur une plaque de 96 puits. Ensemencer un minimum de 14 plaques de 96 puits avec des cellules pour chaque plaque de bibliothèque de siRNA à étud

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JoVE Journal

Biology

Biologie

Cette vidéo décrit un test fluorométrique in vitro visant à évaluer les effets des formulations de larmes artificielles sur l’activité métabolique cellulaire des cellules épithéliales cornéennes à l’aide d’une solution de bleu Alamar à base de résazurine. Une formulation non toxique maintient les cellules dans un état sain et métaboliquement actif, facilitant la réduction de la résazurine en une résorufine hautement fluorescente.

alamarBlue Assay : Une méthode fluorométrique sensible pour dépister les effets cytotoxiques des formulations de larmes artificielles sur l’activité métabolique des cellules épithéliales cornéennes humaines

Ici, nous décrivons un test de gène rapporteur basé sur des cellules comme un outil précieux pour cribler les bibliothèques chimiques à la recherche de composés modulant les mécanismes de contrôle post-transcriptionnel exercés par 3' UTR.

Haut-débit criblage de modulateurs chimique des gènes post-transcriptionnelle réglementées

L’objectif de l’étude était d’évaluer l’impact biologique de 15 constituants de la fumée de cigarette en utilisant une combinaison d’un analyseur de cellules en temps réel basé sur l’impédance et d’une plateforme basée sur le criblage à haut contenu (HCS) pour l’évaluation toxicologique in vitro. Cette étude fournit des informations sur les doses efficaces, la toxicité et les modes d’action des composés testés.

Haut Analyse de dépistage du contenu pour évaluer les effets toxicologiques des composants nocifs et potentiellement dangereux (HPHC)

Dans la présente, nous présentons un protocole permettant d’utiliser le petit ARN interférent spécifique de la protéine de choc thermique 27 (HSP27) pour évaluer la fonction de HSP27 pendant la cicatrisation des plaies épithéliales cornéennes. L’interférence ARN est la meilleure méthode pour inhiber efficacement l’expression des gènes afin d’étudier la fonction des protéines dans divers types de cellules.

Enquête basée sur l&#39;interférence ARN de la fonction de la protéine de choc thermique 27 pendant la cicatrisation cornéenne épithéliale Wound

Nous décrivons ici un test haut débit fluorescence qui mesure la membrane plasmique rescellage d’efficacité grâce à des analyses fluorimétrique et imageries de cellules vivantes. Ce test peut être utilisé pour le dépistage des drogues ou des gènes de cible qui régulent la membrane plasmique réapposition de sceau sur des cellules mammaliennes.

Haut débit mesure de Membrane plasmique réapposition de sceau sur l’efficacité des cellules de mammifères

Ce protocole démontre la détection simultanée d’espèces réactives d’oxygène (ROS), de cellules vivantes et de cellules mortes dans les cultures primaires vivantes à partir de cellules de surface oculaires de souris. 2',7'-Dichlorofluoresceindiacetate, propidium iodide, et Hoechst coloration sont utilisés pour évaluer le ROS, les cellules mortes, et les cellules vivantes, respectivement, suivie par l’imagerie et l’analyse.

Évaluation des dommages oxydatifs dans les cellules de surface oculaires de la souris primaire/cellules souches en réponse aux dommages causés par les ultraviolets-C (UV-C)

Cet article décrit les procédures utilisées pour évaluer la toxicité du rayonnement UV et des toxines chimiques sur une lignée cellulaire primaire et immortalisée.

Détermination de la toxicité du rayonnement UV et des produits chimiques sur les cellules épithéliales cornéennes humaines primaires et immortalisées

Ici, des modèles animaux basés sur la souris et le lapin sont développés pour les lésions mécaniques et chimiques de l’épithélium cornéen afin de cribler de nouveaux traitements et le mécanisme sous-jacent.

Modèles animaux ex vivo et in vivo pour les lésions mécaniques et chimiques de l’épithélium cornéen

Ce protocole décrit une nouvelle méthode pour quantifier les espèces réactives de l’oxygène (ROS) intracellulaires en utilisant le dihydroéthidium (DHE) comme sonde de colorant de fluorescence en utilisant une approche de criblage à haut débit. Le protocole décrit les méthodes d’évaluation quantitative des espèces réactives de l’oxygène (ROS) intracellulaires dans les trois lignées cellulaires différentes de carcinome hépatocellulaire.

Évaluation préalable à haut débit de la génération d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) à l’aide d’un colorant de fluorescence à base de dihydroéthidium (DHE)

La culture ex vivo d’organes de cornée porcine et la cicatrisation des plaies épithéliales constituent un moyen économique, éthique, reproductible et quantitatif de tester la toxicité oculaire des produits chimiques. Ils aident également à élucider les mécanismes sous-jacents à la régulation de l’épithélialisation et de la réparation tissulaire, et à évaluer les traitements pour traiter la kératopathie diabétique et le retard de cicatrisation des plaies.

Évaluation de la toxicité thérapeutique et chimique à l’aide de cornées porcines cultivées sur des organes et de la cicatrisation des plaies épithéliales

Découvrez le criblage siRNA à haut débit pour étudier les lésions toxiques des cellules épithéliales cornéennes exposées au fluorure d'hydrogène et à la chloropicrine. Cette méthode permet d'identifier rapidement les voies cellulaires impliquées dans la réponse aux toxiques.

Criblage à haut débit siARN préjudice de cellules épithéliales de chloropicrine et cornée induite par le fluorure d’hydrogène

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