Un modèle à thorax fermé pour induire la Constriction de l’aorte transversale chez les souris

L’objectif global de cette procédure est d’effectuer une constriction aortique transverse, dans un modèle murin de poitrine fermée, induisant une hypertrophie myocardique ventriculaire gauche. Cette technique peu invasive aide à réduire les problèmes respiratoires et à minimiser la réponse inflammatoire. Cette méthode peut nous aider à répondre à des questions clés, dans le domaine de l’immunologie, par exemple, la réponse de la macrophagie cardiaque dans le développement de l’hypertrophie ventriculaire gauche.

Le principal avantage de cette technique est que la cage thoracique reste intacte, et donc le traumatisme est minimisé. Étant donné que les espaces et les volumes courants sont adaptés au poids corporel, ce protocole peut être utilisé chez des souris de différentes tailles. Il réduit également les traumatismes chirurgicaux et diminue les écarts dans les valeurs de mesure.

Après avoir anesthésié une souris, selon le protocole textuel, déplacez la souris vers une table d’opération à température contrôlée et détachez le cône de nez qui est connecté à la boîte d’induction de l’anesthésie pour maintenir la narcose. À l’aide d’une suture en nylon, fixez les incisives supérieures de la souris. Pincez la queue pour vous assurer de l’absence de réflexe.

Utilisez du ruban adhésif pour fixer les extrémités. Après avoir inséré une sonde rectale, appliquez la crème dépilatoire sur la gorge et le haut du thorax, selon les instructions du fabricant, et laissez-la reposer pendant une minute. Ensuite, essuyez la crème et répétez si nécessaire.

Avec les réglages du ventilateur ajustés aux paramètres physiologiques, et l’animal sous un microscope chirurgical, incisez la peau sur la ligne médiane à environ trois millimètres sous la mandibulaire jusqu’à la deuxième côte. Identifier la ligne médiane et les tissus conjonctifs de la glande sous-mandibulaire. Ensuite, utilisez deux pinces inclinées pour diviser doucement et brutalement la glande sur la ligne médiane et explorez le muscle trachéal.

Préparez doucement la trachée, en écartant brutalement les muscles paratrachéaux. Utilisez une pince pour tirer sur la langue afin de redresser la gorge pour une intubation plus facile, et insérez doucement une canule d’intubation à l’intérieur de la trachée. Confirmez l’intubation en visualisant directement le tube à l’intérieur de la trachée et en vérifiant si le mouvement de la poitrine est correct.

Préparez les deux artères carotides, qui se trouvent en complément de la trachée, à l’aide d’une pince pour séparer doucement le tissu conjonctif. Appliquez du gel à ultrasons sur l’extrémité de la sonde Doppler de 20 hertz et placez l’extrémité de la sonde sur l’artère carotide droite et gauche, à un angle inférieur à 45 degrés. Tournez lentement la sonde pour la déplacer latéralement et médialement afin de trouver un signal Doppler, puis inclinez la sonde pour optimiser le signal.

À l’aide d’une nouvelle paire de gants stériles et de ciseaux, élargissez l’incision cutanée jusqu’au deuxième espace intercostal. Ensuite, avec la pointe de la pince, ouvrez le deuxième espace intercostal et insérez les écarteurs. À 200 % de grossissement, identifiez la ligne médiane et les tissus conjonctifs.

Ensuite, à l’aide d’une pince coudée, divisez délicatement le thymus. Retirez le tissu adipeux jusqu’à ce que l’arc aortique soit clairement visible. À l’aide d’une pince à pouce coudée, préparez un tunnel sous l’aorte transverse, entre l’artère brachiocéphale et l’artère carotide commune gauche.

Ensuite, à l’aide d’une pince fine, tenez une suture 6-0 et passez le fil sous l’arc aortique. Avec la deuxième pince, prenez le fil de l’autre côté de l’arc. Placez soigneusement l’espaceur parallèlement à l’aorte transversale.

Préparez un double nœud lâche sur l’entretoise et assurez-vous que le placement optimal de l’entretoise est parallèle à l’aorte. Ensuite, faites le premier nœud, et faites rapidement un deuxième nœud opposé, avant de retirer rapidement l’entretoise. L’étape la plus critique de toute la procédure consiste à faire les deux nœuds rapidement et fermement, et à retirer immédiatement l’entretoise.

Fermez le deuxième espace intercostal, avec une suture en polypropylène 6-0, et portez une attention particulière aux vaisseaux sous-claviers lors de la ligature. Ensuite, à l’aide d’une suture en polypropylène 6-0, cousez la peau en un motif de suture continu. Confirmez la ligature et effectuez les soins postopératoires, selon le protocole textuel.

Ces mesures de la vitesse du flux Doppler valident un TAC réussi, qui provoque une augmentation de la vitesse sanguine dans l’artère carotide droite, en raison d’une pression élevée dans le ventricule gauche et l’aorte, tout en provoquant une vitesse de flux sanguin atténuée post-sténosée dans l’artère carotide gauche. Comme le montre ce graphique, les rapports poids cardiaque et poids corporel ont considérablement augmenté chez les souris TAC, par rapport aux souris non baguées, six jours après la chirurgie. Ce rapport était presque constant après 21 jours.

La fréquence cardiaque a un effet significatif sur la contractilité ventriculaire gauche et le débit cardiaque. Ce graphique révèle qu’il n’y avait pas de différences dans les fréquences cardiaques des souris à bandes aortiques et non aortiques, après 21 jours. Comme démontré ici, une bande constante de l’aorte a été prouvée par une augmentation de la pression artérielle systolique, mesurée via un cathéter ventriculaire gauche après 21 jours.

Les souris C57 black six, sont généralement connues pour développer une hypertrophie excentrique avec dysfonction systolique après TAC. Une augmentation du diamètre ventriculaire gauche a été constatée, ce qui semble également significatif dans les mesures de volume de pression. En conséquence, les volumes systolique et diastolique finaux ont considérablement augmenté.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de 10 minutes, si elle est bien faite. Enfin, cette procédure fournit une analyse optimisée de la réponse immunitaire dans l’hypertrophie ventriculaire gauche, car le traumatisme chirurgical minime limite l’induction non spécifique du système immunitaire. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer une constriction aortique transverse standardisée et mini-invasive.