Name: Guidée par l’image de la résection du glioblastome et Implantation intracrânienne d’échafaudages de graines cellules souches thérapeutiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Découvrez la résection chirurgicale du glioblastome chez la souris et l'implantation d'échafaudages de cellules souches mésenchymateuses thérapeutiques. Cette méthode évalue l'efficacité des agents thérapeutiques postopératoires.

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Les auteurs reconnaissent les contributions éditoriales de Dr. Kathryn Pietrosimone. PLA échafaudages ont été fabriqués par le laboratoire du Dr Elizabeth Loboa à North Carolina State University. Ce travail a été soutenu par l’Université Cancer Research Fund de l’UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center et l’UNC translationnelle et Institut de Sciences cliniques (KL2TR001109, UL1TR001111).

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de The University of North Carolina à Chapel Hill.
Remarque : Cette procédure est effectuée sur des souris avec une craniotomie ouvert, comme une version modifiée du protocole par Mostany et Portera-Cailliau19 dans laquelle le tissu osseux qui est enlevé chirurgicalement est abandonné, laissant le cerveau accessible pour la mise en place et éventuelle résection de tumeurs GBM. Suite craniotomie, tumeurs sont établis par l’intermédiaire de l’implantation stéréotaxique visée à Ozawa et James20. Nous implanter 1 x 105 U87 mCh-Fl cellules aux coordonnées suivantes (en mm de bregma) stéréotaxiques : (2.5, 0, -0,5).
1. cellule Culture et préparation d’échafaudage
NOTE : Les échafaudages doivent être préparés à 48 h avant l’implantation chez la souris. Les volumes suivants sont fournis sur une base de par-échafaudages. Multipliez les quantités selon les besoins pour les échafaudages supplémentaires.
<ol><li>Couper les échafaudages PLA en morceaux de taille cavité de résection (environ 2 x 2 mm). Échafaudages peuvent être coupés à la main à l’aide de ciseaux ou un poinçon de répétabilité.</li>
	<li>Stériliser en les immergeant dans l’éthanol à 70 % pendant 15 min puis en les immergeant dans du PBS. Placez échafaudage au moyen de l’aigle modifié de Dulbecco (DMEM) contenant 10 % sérum fœtal (SVF) et 1 % la pénicilline-streptomycine pendant la préparation de cellules pour l’amorçage.</li>
	<li>Soulever les MSCs cultivées à l’aide de 0.05 % de trypsine (3 à 5 mL pour une fiole T75). Incuber à 37 ° C pendant 5 min. veiller à ce que les cellules ont levé, puis ajouter les 7-10 mL DMEM dans le ballon pour inactiver la trypsine.</li>
	<li>Transférer le contenu de la fiole dans un tube à centrifuger de 15 mL. Compter les cellules à l’aide d’un hémocytomètre. Pellet 5 x 105 MSCs pour chaque échafaudage par centrifugation à 100 x g pendant 5 min.</li>
	<li>Aspirer hors surnageant et remettre en suspension les MSCs dans 5 µL DMEM par 5 x 105 cellules.</li>
	<li>Préparer les échafaudages à l’ensemencement par tapoter les sécher.<ol>
<li>Supprimer un échafaudage d’immersion DMEM avec une pince et le placer temporairement sur le couvercle de la plaque 6 puits. Soulevez l’échafaud glisser le couvercle, laissant derrière lui une goutelette de DMEM excédentaire.</li>
		<li>Replacez l’échafaud sur le couvercle à nouveau dans un endroit nouveau et sec. Répétez 3 à 5 fois, puis placer l’échafaudage partiellement séché dans une nouvelle plaque 6 puits pour l’amorçage. Répétez pour chaque échafaudage. Remarque : Un échafaudage partiellement séché offre optimale cellulaire ensemencement des résultats. Si l’échafaudage est trop humide, cellules seront glissent à l’échafaud et adhère à la plaque bien ci-dessous. Si l’échafaudage est trop sec, la goutte ne s’étendra pas sur l’échafaud ensemble, ayant pour résultat cellule initiale mauvaise distribution.</li>
	</ol>
</li>
	<li>À l’aide d’une pipette, mélanger doucement le flacon de cellules souches pour homogénéiser la suspension comme certaines cellules peuvent se sont installés au fond.</li>
	<li>Lentement, pipette 2,5 µL fraîchement mélangé suspension SMC directement sur l’échafaud, créant une petite goutte sur le haut de l’échafaud.</li>
	<li>Ajouter 300 µL DMEM vers les bords de chaque puits. Cela permettra d’éviter l’évaporation rapide de la gouttelette de cellule. Incuber à 37 ° C pendant 30 min, ce qui permet des cellules attacher à l’échafaud.</li>
	<li>Avec une pince, doucement renversera les échafaudages de la plaque bien. Suspension MSC semences 2,5 µL fraîchement mélangé (il en résulte un total de 5 x 105 cellules ensemencées par échafaudage). Incuber à 37 ° C pendant 30 min, ce qui permet des cellules attacher à l’échafaud.</li>
	<li>Couvrir les échafaudages en DMEM en ajoutant 2 mL dans chaque puits de la plaque 6 puits. Soulevez doucement les échafaudages pour permettre des médias s’écouler sous eux. Incuber à 37 ° C dans cet État pendant 48 h avant la chirurgie d’implantation.</li>
	<li>Vérifier les échafaudages après 24h et ajouter/modifier des médias si on observe une évaporation excessive ou médias décoloré à cause de déséquilibre du pH.</li>
</ol>2. fluorescence guidée par la résection et l’Implantation de l’échafaudage
NOTE : Stériliser tous les outils avant l’initialisation de la chirurgie. Administrer une analgésie prophylactique tel qu’indiqué dans votre protocole IACUC institutionnel.
<ol><li>Placer le cadre stéréotaxique sur la scène d’une fluorescence stéréomicroscope de dissection.</li>
	<li>Anesthésier la souris sous inhalation isoflurane dans une chambre à induction. Une fois anesthésié, fixez la souris dans le cadre stéréotaxique avec anesthésie par inhalation continue d’alimentation via un adaptateur de coiffe isoflurane. Maintenir la température du corps avec un coussin chauffant ou une sonde. NOTE : 4-5 % isoflurane est adapté pour l’induction et 2 à 3 % est adapté pour l’entretien, mais cela doit être adapté et surveillé pour chaque souris.</li>
	<li>Appliquer pommade ophtalmique sur les yeux pour éviter le dessèchement de la cornée. Stériliser l’incision du cuir chevelu avec une série de trois alcool et trois lingettes de Bétadine.</li>
	<li>Effectuer le test de réflexe de pincement orteil sur chaque branche et confirmer la réponse négative pour assurer le bonne anesthetization. Assurer un rythme respiratoire régulier d’environ 55-65 respirations/min.</li>
	<li>Avec une pincette, pincer et soulevez doucement le cuir chevelu. Faire une incision médiane de rostral caudal linéaire avec des ciseaux chirurgicaux. Irriguer le site de l’incision avec du PBS et enlever le gras sous-cutané avec un coton-tige dans un mouvement de brossage circulaire. Organiser la peau telle que la fenêtre crânienne établies soit entièrement visible.</li>
	<li>Doucement perforer la dura seulement intérieur jusqu’aux frontières de la fenêtre crânienne à l’aide d’une aiguille 18 G. Répétez jusqu'à ce que l’incision retrace entièrement l’intérieur de la fenêtre.</li>
	<li>Retirez la dura de peeling loin à l’aide de pinces fines, révélant le parenchyme sous-jacent et la tumeur.</li>
	<li>Localiser la tumeur de mCh-Fl U87 en éteignant les lumières de la pièce et allumer le stéréomicroscope fluorescence-mode. Préparez résection en chargeant une pointe de pipette 1-200 µL dans l’extrémité du tuyau d’une pompe à vide.</li>
	<li>Allumer la pompe à vide. Résection de la tumeur en aspirant doucement le tissu fluorescent jusqu'à ce qu’aucun signal de la demeure. Éteindre la pompe à vide et jeter l’embout de la pipette. Tourner la fluorescence au large et la salle de feux arrière sur. Remarque : Pour contrôler le saignement, irriguer avec PBS froid et appliquer une pression constante avec un coton-tige. Dans les cas plus graves, la cavité de résection peut également être temporairement emballée avec un agent hémostatique tant qu’il est supprimé lorsque le saignement est arrêté suivie d’une autre d’irrigation de PBS.</li>
	<li>Immédiatement avant l’implantation, lentement tremper un échafaudage PLA MSC graines dans du PBS pour enlever des médias non désirées et les composants associés. L’échafaudage de l’implant dans la cavité de résection. Si nécessaire, ajouter 1 fibrinogène µL (67-106 mg/mL) suivi par 1 thrombine µL (400-625 U/mL) pour garantir l’échafaud en place.</li>
	<li>Avec la dure-mère supprimé et le lambeau osseux de la fenêtre crânienne déjà abandonné, joint la plaie simplement en fermant la peau et appliquer la colle chirurgicale. Enlever l’animal d’anesthésique inhalé et permettent de récupérer sur une surface chauffée.</li>
	<li>Souris une fois ambulatoire, retour à la cage. Administrer un analgésique le calendrier approuvé par IACUC. Répéter pour chaque souris.</li>
</ol>3. post-opératoire d’imagerie
<ol><li>À l’aide de la seringue à insuline 28-G, injecter la souris avec D-luciférine (150 mg/kg voie intrapéritonéale).</li>
	<li>Attendre 10 min. Cela permettra la luciférine de circuler dans tout le corps et réagissent avec les cellules cancéreuses exprimant luciférase dans le cerveau pour obtenir l’expression maximale.</li>
	<li>Sous anesthésie isoflurane (comme mentionné précédemment), image souris une bioluminescence d’imagerie (BLI) afin de visualiser les tumeurs. Varier les durées d’exposition comme nécessaires (secondes ou minutes) selon la taille de la tumeur.</li>
	<li>Répétez la procédure d’imagerie comme nécessaires à la détermination de la cinétique de croissance tumorale. Continuer à surveiller la santé des animaux. Remarque : Les thérapeutiques MSCs exprimera constitutivement TRAIL, tuer les cellules cancéreuses et la suppression de la croissance tumorale globale. Tous les 2-5 jours d’imagerie fournit une fréquence suffisante à cette fin.</li>
	<li>Lorsque des points de terminaison prédéterminés décrites dans le protocole IACUC ont été satisfaites, sacrifier des souris en perfusion transcardial et recueillir des tissus pour analyse.</li>
</ol>

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</ol>

Les Drs Sheets, Bagó et Hingtgen ont équité dans Falcon Therapeutics, qui a obtenu une licence des aspects de la technologie de l’échafaudage de UNC Chapel Hill et de cellules souches.

Chirurgie peut généralement être complétée en 30 min par souris, étant donné que les points suivants sont pris en considération pour maximiser la précision et éviter les pièges chronophages. Tout d’abord, assurez-vous que la souris est positionnée correctement dans l’instrument stéréotaxique avant de commencer la procédure. Des mouvements de tête indésirables limitera la précision chirurgicale de la craniotomie, localisation de l’implantation de la tumeur et le degré de la résection de tumeur. Avant la résection, enlever...

Glioblastome (GBM) est le cancer le plus fréquent primaires du cerveau chez les adultes, avec une médiane de survie lamentable de seulement 12 à 15 mois1,2,3,4,5. Survie n’a pas significativement amélioré depuis 2005 alors que la norme actuelle clinique de résection maximale suivie par radiation et chimiothérapie par témozolomide concomitante et adjuvante était adopté6,7. Alors que ce traitement donne les patients avec un soulagement temporaire des symptômes, norme de soin entraîne invariablement une réapparition comme des foyers de cancer invasif soustraire à la résection et sont protégés contre les thérapies systémiques de la barrière sang - encéphalique (BHE). Les stratégies qui visent des foyers de tumeur invasive tout en contournant la BHE sont urgent pour séduire le contre cette maladie agressive et débilitante.
Cellules souches mésenchymateuses humaines (MSCs) semblent prometteuses comme drogue de vecteurs pour GBM en raison de leur tumeur native tropisme8,9. MSCs possèdent des récepteurs pour et migrent vers des facteurs solubles qui sécrètent des tumeurs, y compris de facteur de culture cellulaire stromale 1α (SDF-1 bis), matrice métalloprotéinase-1 (MMP-1) et monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) entre autres10, 11 , 12 , 13. génie MSCs d’exprimer et de sécréter des médicaments cytotoxiques leur permet d’être exploités comme véhicules de livraison de drogue tumeur-homing. MSCs machinés se déplacent vers des foyers de tumeur invasive et livrer des protéines thérapeutiques. Cette approche a démontré la faisabilité de diverses précliniques GBM modèles9,14. Cependant, la grande majorité de ces modèles n’inclure pas de résection chirurgicale malgré la pertinence clinique de cette composante. Émergentes à l’aide de nouveaux modèles de résection des études ont révélé que le déplacement chirurgical de la tumeur diminue la persistance de cellules souches qui sont directement injectés dans la cavité chirurgicale15. Efficacité réduite a entraîné la perte de viabilité, probablement due à une diminution de la dose et la durée des médicaments livrés pour les foyers de tumeur invasive.
Afin d’accroître la viabilité des cellules souches et medicaments, MSCs peuvent être semés sur les échafaudages avant l’implantation. Dans ce protocole, biocompatible et résorbable électrofilées nanofibrous poly(lactic acid) (PLA) sert d’échafaudage pour le PLA MSCs. fléchit et est conforme à la forme de la cavité de résection sur implant, ce qui maximise la couverture thérapeutique et minimise les distance MSCs doit parcourir pour atteindre les cellules tumorales. MSCs restent sur l’échafaud pendant l’implantation et puis migrent hors l’échafaudage vers les cellules tumorales après implantation16,17. MSCs et les médicaments cytotoxiques qu’ils transportent ensuite s’accumuler dans les foyers de la tumeur. Livraison de médicaments cytotoxiques pour la tumeur nécessite viabilité MSC et persistance, qui sont aidés par l’implantation sur des échafaudages.
Dans cette procédure, les vecteurs LENTIVIRAUX sont utilisés pour induire l’expression stable de fluorescent (in vitro de suivi) et bioluminescence (in vivo suivi) marqueurs dans les lignes des cancers et des cellules souches. La lignée humaine de GBM U87 est infectée par mCherry et firefly luciférase (U87 mCh-Fl) et les non thérapeutique MSCs avec GFP et renilla luciférase (MSC GFP-Rluc). La variante thérapeutique de MSCs expriment le ligand (MSC-TRAIL) d’induisant l’apoptose liées à TNFα. SENTIER, une protéine sécrétée constitutivement, lie à proximité des récepteurs de mort sur le cancer des cellules et initie l’apoptose induite par la caspase18.
Ici, nous fournissons un protocole pour guidée par l’image préclinique GBM résection chirurgicale et implantation des échafaudages graines MSC. En bref, souris Nudes reçoivent une craniotomie suivie trois jours plus tard par injection orthotopique stéréotaxique U87 mCh-FL pour établir la tumeur primitive. La tumeur implantée se développe pendant une période d’environ une semaine. Les échafaudages PLA sont ensemencées avec MSCs 48 h avant la chirurgie d’exérèse. La tumeur est ensuite réséquée sous direction fluorescente et l’échafaud MSC-chargé est implanté dans la cavité de résection. Survie de fardeau et souris de tumeur sont ensuite suivis de post-opératoire avec bioluminescence imaging (BLI). Une chronologie de ces procédures est présentée ci-dessous (Figure 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57452/57452fig1.jpg"> Figure 1 : chronologie des procédures. Souris reçoivent au départ une fenêtre crânienne (jour 0). Après une période de récupération de trois jours, les tumeurs sont implantés (jour 3) et de se développer pendant environ une semaine. Les échafaudages sont ensemencées avec MSCs (jour 8) deux jours avant la procédure de résection et d’implantation des tumeur (jour 10). La progression tumorale et l’efficacité thérapeutique sont évaluées via post-opératoire d’imagerie par la suite (jour 10 +). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57452/57452fig1large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>

<table><tbody><tr><td>Juste pour souris instrument stéréotaxique</td><td>Stoelting</td><td>51730</td><td>Maintient un positionnement stable de la tête pendant l’opération</td></tr><tr><td>Stéréomicroscope à dissection par fluorescence</td><td>Leica</td><td>M165 FC&nbsp ;</td><td>Permet l’imagerie en temps réel de la tumeur pendant la résection</td></tr><tr><td>Système d’injecteur stéréotaxique intégré motorisé (ISI)</td><td>Stoelting</td><td>53315</td><td>Permet un volume et un taux précis d’injection de cellules tumorales</td></tr><tr><td>Adhésif tissulaire Vetbond</td><td>3M</td><td>1469</td><td>Colle sugical pour fermer la plaie cutanée</td></tr><tr><td>Larmes artificielles</td><td>Akorn</td><td>664268</td><td>Empêche les yeux de se dessécher pendant l’opération</td></tr><tr><td>Webcol alcool préparations</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>Stériliser le site d’incision</td></tr><tr><td>Gommage chirurgical à la bétadine</td><td>Purdue Fredick Company</td><td>6761815117</td><td>Stériliser le site d’incision</td></tr><tr><td>Applicateurs à embout en coton</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-115</td><td>Outil chirurgical</td></tr><tr><td>Système d’aspiration E-vac</td><td>Argos</td><td>EV310</td><td>Pompe à vide utilisée pour réséquer la tumeur</td></tr><tr><td>Fibrinogène et thrombine extraits de TISSEEL</td><td>Baxter</td><td></td><td>Pour fixer temporairement l’échafaudage dans la cavité de résection</td></tr><tr><td>IVIS Système d’imagerie optique cinétique in vivo</td><td>Caliper Life Science</td><td></td><td>Imageur bioluminescent</td></tr><tr><td>D-Luciférin sel de potassium</td><td>PerkinElmer</td><td>122799</td><td>Agent d’imagerie in vivo</td></tr></tbody></table>

guidée par l’image de la résection du glioblastome et implantation intracrânienne d’échafaudages de graines cellules souches thérapeutiques

Image-Guided Resection of Glioblastoma and Intracranial Implantation of Therapeutic Stem Cell-seeded Scaffolds

Glioblastome (GBM), le cancers du cerveau primaire plus courantes et les plus agressifs, porte une espérance de vie de 12 à 15 mois. La courte espérance de vie est due en partie à l’incapacité de la cure actuelle, consistant en une exérèse chirurgicale suivie de radiations et de chimiothérapie, afin d’éliminer les foyers de tumeur invasive. Traitement de ces foyers peut-être être améliorée avec effets humain cellules souches mésenchymateuses (CSM). MSCs pièce tropisme tumeur puissant et peuvent être conçues aux protéines thérapeutiques express qui tuent les cellules tumorales. Avancements dans les modèles précliniques indiquent que la résection chirurgicale induit une perte prématurée de MSC et réduit l’efficacité thérapeutique. Efficacité du traitement du CSM peut être améliorée en semis MSCs sur un échafaud poly(lactic acid) biodégradables (PLA). Livraison MSC dans la cavité de résection chirurgicale sur un échafaud PLA restaure rétention cellulaire, persistance et meurtre de tumeur. Afin d’étudier les effets de l’implantation de graines MSC PLA sur GBM, un modèle préclinique précis est nécessaire. Ici, nous fournissons un protocole chirurgical préclinique pour la résection de la tumeur guidée par l’image de GBM chez des souris immunodéficientes suivie d’implantation de l’échafaudage de graines MSC. MSCs sont conçus avec des constructions des gènes à constitutivement express et sécrètent des thérapeutique liées à TNFα induisant l’apoptose ligand (TRAIL) ainsi que la protéine fluorescente verte (GFP) pour permettre le suivi fluorescent. De même, les cellules de tumeur U87 sont machinés pour mCherry express et luciférase firefly, offrant double fluorescent/luminescents de suivi. Alors qu’il est actuellement utilisé pour enquêter sur les cellules souches médiée par livraison d’agents thérapeutiques, ce protocole peut être modifié afin d’étudier l’impact de la résection chirurgicale sur les autres interventions GBM.

Cellules tumorales U87 ont été machinés pour mCherry express et luciférase firefly (U87 mCh-Fl) avant l’injection et pour permettre la résection guidée par l’image et bioluminescence suivi (Figure 2 a-C). Les cellules souches ont été de même conçus avec diagnostic GFP-Rluc (MSC-GFP) ou GFP-essai thérapeutique (MSC-TRAIL) et ensemencées sur les échafaudages PLA pour confirmer l’attachement et la prolifération (Figure 2D</s...

Recherche de tumeur thérapeutiques cellules souches mésenchymateuses (CSM) semblent prometteuses comme traitement pour le glioblastome envahissante. Optimale transplantation implique livraison de MSCs dans la cavité de résection de tumeur sur les échafaudages. Ici, précliniques techniques d’étude MSC traitement du glioblastome figurent notamment : la résection de tumeur guidée par l’image ; implantation de graines MSC échafaudages ; et suivi un traitement postopératoire.

Guidée par l’image de la résection du glioblastome et Implantation intracrânienne d’échafaudages de graines cellules souches thérapeutiques

Glioblastoma (GBM), the most common and aggressive primary brain cancer, carries a life expectancy of 12-15 months. The short life expectancy is due in ...

L’objectif global de cette procédure est de réséquer chirurgicalement le cancer du cerveau chez la souris et d’implanter un échafaudage ensemencé de cellules souches thérapeutiques tumorales dans la cavité de résection postopératoire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines de la thérapie cellulaire et de la neuro-oncologie, telles que l’impact de la résection chirurgicale sur l’implantation cellulaire dans la cavité chirurgicale, l’efficacité des nouveaux agents thérapeutiques sur le cancer du cerveau post-chirurgical et l’influence des systèmes d’administration basés sur des échafaudages sur les résultats thérapeutiques. Le principal avantage de cette technique est que les interventions contre le cancer du cerveau peuvent être étudiées chez la souris d’une manière qui imite étroitement la norme clinique de soins chez les patients humains.Bien que cette méthode puisse donner un aperçu de la thérapie par cellules souches administrée sur un échafaudage, elle peut également être appliquée à d’autres interventions, telles que les nanoparticules, les petites molécules, les virus oncolytiques ou d’autres thérapies émergentes. Préparez les échafaudages

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L'implantation intracrânienne d'GL261 cellules en souris C57BL / 6 produit gliomes malins qui récapitulent plusieurs des caractéristiques de glioblastome humain. Nous avons utilisé des cellules exprimant de façon stable GL261 luciférase pour nous permettre...

Implantation intracrânienne avec 3D ultérieures In Vivo Bioluminescent imagerie des gliomes murin

Nous décrivons une méthode intégrée pour la précision, l'implantation stéréotaxique de cellules humaines de glioblastome multiforme dans le cerveau des souris nude et de série...

Implantation stéréotaxique intracrânienne et<em&gt; In vivo</em&gt; Imagerie bioluminescente de xénogreffes tumorales dans un système de modèle de souris de glioblastome multiforme

En combinant une poli et renforcé vulnérabilité de la victime (ports) crânienne injection fenêtre et le glioblastome cellule (GBM), on peut observer l'initiation gliome et la croissance des cellules de glioblastome injectées dans le cerveau d'une souris vivante longitudinalement.

Imagerie gliome Initiation<em&gt; In Vivo</em&gt; Grâce à une poli et renforcé mince crâne fenêtre crânienne

Cette vidéo décrit la technique d’ensemencement de cellules souches mésenchymateuses (CSM) sur un échafaudage biodégradable en poly(acide lactique) (PLA). Les échafaudages préparés peuvent être implantés dans la cavité de résection chirurgicale du cerveau d’où ils peuvent migrer vers des foyers tumoraux. De plus, ces cellules peuvent être modifiées pour exprimer des protéines thérapeutiques afin de stimuler l’apoptose dans les cellules cancéreuses.

Préparation d’un échafaudage ensemencé par CSM : une technique pour préparer un échafaudage ensemencé de cellules souches mésenchymateuses en vue d’une implantation chirurgicale dans un modèle murin

Cette vidéo présente l’intervention chirurgicale pour la résection tumorale guidée par l’image et l’implantation d’un bio-échafaudage ensemencé de cellules souches mésenchymateuses génétiquement modifiées ou CSM exprimant le ligand induisant l’apoptose lié au facteur de nécrose tumorale ou TRAIL. Ces CSM thérapeutiques ont le potentiel dans le traitement des tumeurs cérébrales.

Résection tumorale guidée par fluorescence et implantation d’un échafaudage ensemencé par CSM dans un modèle murin : une procédure chirurgicale pour délivrer des cellules souches mésenchymateuses thérapeutiques dans la cavité de résection de tumeur cérébrale dans un modèle murin

Nous avons établi un modèle de glioblastome orthotopique corticale chez la souris pour intravitale microscopie à deux photons qui récapitule les contraintes biophysiques normalement en jeu au cours de la croissance de la tumeur. Une fenêtre en verre chronique remplaçant le crâne au-dessus de la tumeur permet le suivi de la progression de la tumeur au cours du temps par microscopie à deux photons.

Un modèle de souris orthotopique glioblastome maintien contraintes physiques et parenchyme cérébral Convient pour intravitale deux microscopie biphotonique

Les cellules souches sont des vecteurs thérapeutiques prometteurs pour traiter les tumeurs cérébrales en raison de leur tropisme intrinsèque tumoral. L'administration de cellules souches intranasales non invasives contourne la barrière hémato-encéphalique et démontre un fort potentiel de traduction clinique. Cet article résume les principes fondamentaux de la transmission des cellules souches intranasales dans un modèle de souris du gliome.

Livraison intradermique de cellules souches thérapeutiques au glioblastome dans un modèle de souris

Ici, nous présentons un protocole pour la préparation et l’administration stéréotaxique de lymphocytes humains allogéniques dans des souris immunodéficientes transportant des tumeurs primaires du cerveau humain orthotopique. Cette étude fournit une preuve de concept pour la faisabilité et l’efficacité antitumorale des immunothérapies cellulaires intrabrain-livré.

Stéréotaxique transfert adoptif de cellules immunitaires cytotoxiques dans des modèles murins de xénogreffes de glioblastome Multiforme Orthotopic homme

Ce travail décrit le développement d’électrodes interdigitées flexibles pour la mise en œuvre dans des modèles 3D de tumeurs cérébrales, à savoir la culture in vitro , le modèle in ovo et le modèle murin in vivo . La méthode proposée peut être utilisée pour évaluer les effets des champs électriques pulsés sur les tumeurs à différents niveaux de complexité.

Dispositifs électroniques organiques flexibles pour la thérapie par champs électriques pulsés du glioblastome

In vivo, les communications intercellulaires à l’origine de nombreuses maladies du système nerveux central, telles que le glioblastome (GBM), sont notoirement difficiles à mesurer et à caractériser. Ici, nous décrivons les procédures de microperfusion cérébrale à flux ouvert (cOFM) qui peuvent être utilisées pour échantillonner des composants du liquide interstitiel dans un modèle animal longitudinal de GBM.

Utilisation de la microperfusion cérébrale à flux ouvert pour la collecte longitudinale de liquide interstitiel dans un modèle animal de glioblastome

L’objectif de ce protocole est de fournir aux chercheurs une technique hautement reproductible pour les implantations intracrâniennes.

Implantation intracrânienne stéréotactique de lignées cellulaires de xénogreffes dérivées d’un patient chez des souris

Découvrez la résection chirurgicale du glioblastome chez la souris et l'implantation d'échafaudages de cellules souches mésenchymateuses thérapeutiques. Cette méthode évalue l'efficacité des agents thérapeutiques postopératoires.

Guidée par l’image de la résection du glioblastome et Implantation intracrânienne d’échafaudages de graines cellules souches thérapeutiques (Vidéo) | JoVE Journal

Guidée par l’image de la résection du glioblastome et Implantation intracrânienne d’échafaudages de graines cellules souches thérapeutiques

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