Un modèle ligaturé anse intestinale chez les poulets gratuit anesthésiés pathogène spécifique pour étudier la Virulence de Clostridium Perfringens

Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la recherche sur l’entérite nécrotique du poulet. Comme comparer la virulence de souches spécifiques clostridium perfringens causant cette maladie. Le principal avantage de cette technique est qu’elle réduit remarquablement le nombre de poulets habituellement nécessaires pour des expériences d’ambivore similaires.

Bien que cette méthode puisse donner un aperçu du potentiel de virulence des souches de Clostridium perfringens, elle peut également être appliquée à d’autres agents pathogènes intestinaux tels que Clostridium difficile, ou Salmonella enterica. En général, les personnes nouvelles à cette méthode auront du mal parce que les interventions chirurgicales ont besoin d’une formation spécifique et ne doivent être effectuées que par ceux qui ont acquis des compétences telles que la suture, une technique avant l’expérience. Après l’anesthésisation d’un poulet sans corne de jambe pathogène spécifique de 10 semaines, installez les moniteurs pour des mesures vitales et commencez manuellement à enlever les plumes de l’abdomen par traction douce.

Ensuite, frottez le site chirurgical à l’aide de chlorhexidine gluconate avec une brosse à poils doux. Frottez doucement la peau du centre à la périphérie pendant cinq minutes sans inverser le cours. Ensuite, effectuez trois passages alternatifs sur le site chirurgical avec la solution de gluconate de chlorhexidine et l’alcool d’Isopropyl utilisant des gazes stériles.

Encore une fois, allez du centre à la périphérie, puis, draper le poulet. Commencez par ouvrir le drapé au-dessus du site chirurgical, puis faire une incision de la peau mi-ligne basse en forme de L avec un scalpel numéro trois, en commençant un centimètre câlin au sternum, et se terminant à un centimètre crânien à la cloicha. Ensuite, continuer l’incision en forme de L perpendiculaire à la première en faisant une deuxième incision à partir de l’extrémité câlin de la première incision et continuer cinq centimètres sur le côté gauche de l’abdomen en suivant la ligne du bassin.

Cette ouverture permettra une extraction facile des intestins. Ensuite, ouvrez le péritoine et les muscles abdominaux en utilisant le même modèle en forme de L pour accéder à la cavité abdominale. Les sacs d’air seront maintenant exposés et doivent être conservés humides à l’aide de gaze saline trempée.

Ensuite, insérez un crochet snook spay dans la cavité abdominale en suivant la paroi abdominale gauche et en travaillant le crochet autour des sacs d’air abdominal pour extraire les intestins. Ensuite, à l’aide de gaze sèche, continuer doucement extérioriser les intestins pour exposer le Jejunum. Étalez les intestins et gardez-les humides avec des pulvérisations fréquentes avec saline et en les couvrant de gaze trempée saline.

Il est important d’être très doux tout en prenant des intestins parce que la tension excessive peut rompre les vaisseaux mésentériques qui peuvent mener aux lésions ischémiques intestinales et compromettre considérablement le résultat de la procédure. Après avoir extériorisé les intestins, faire une série de boucles dans les intestins à partir du Jejunum. Chaque boucle peut être utilisée pour un traitement différent.

Dans le Jejunum proximal, placez une ligature simple avec un matériau absorbable synthétique polyglutamine multifilament tout en évitant la ligature des principaux vaisseaux mésentériques. Ensuite, placez une ligature distale à deux centimètres de la ligature proximale pour compléter la première boucle. Toutes les ligatures proximales et distales doivent être espacées d’environ deux centimètres.

Chaque paire de ligatures fait une boucle, qui est un segment hermétique. Ensuite, créez un interloop ou un segment d’intestin entre les boucles. Placez une ligature simple d’un demi-centimètre aborely à la ligature distale de la première boucle.

Cette ligature est au milieu de l’interloop et permettra de réduire la contamination croisée possible entre les boucles. Maintenant, continuer le modèle de créer une autre boucle d’un demi-centimètre aborely de la ligature interloop. Ici, neuf boucles et huit interloops sont créés couvrant 26 centimètres d’intestin.

Le nombre de boucles peut être ajusté au besoin. Ensuite, procéder à l’injection de souche de Clostridium perfringens dans les boucles. Dans le côté anti-mésentérique de la boucle, utilisez une aiguille de calibre 26 à un angle de 45 degrés pour injecter 0,2 millilitres de solution BHI, contenant un million d’unités de formation de colonies de bactéries dans la phase de croissance midlog.

Dans ce cas, avec neuf boucles, cinq souches différentes sont injectées en boucles alternées avec les boucles intermédiaires injectées avec le véhicule seul comme contrôles négatifs. Après l’injection des agents pathogènes, remplacer délicatement le tractus intestinal à la zone dorsale de la cavité abdominale sous les sacs d’air. Ensuite, fermez la cavité abdominale.

Suture le péritoine et les muscles abdominaux le long du bassin avec un motif de suture continue simple à l’aide d’un matériau absorbable synthétique polyglutamine multifilament. Continuer en suturant le péritoine et les muscles abdominaux du sternum à la cloiche à l’aide de sutures continues simples. Ensuite, suture de la peau à proximité à l’aide d’un matériau synthétique Polyglutamine Multifilament et un modèle continu simple.

D’abord, suture le long du bassin, puis suture du sternum à la cloiche. Après la fermeture des incisions, garder le poulet sous anesthésie générale avec une bonne utilisation des analgésiques pour minimiser la douleur animale pendant le temps d’infection. Poursuivre la surveillance anesthésique pour assurer un niveau d’anesthésie adéquat.

Après la quantité désirée de temps d’infection, comme sept heures dans la présente expérience, euthanasier l’oiseau et recueillir les tissus intestinaux. À l’aide d’un scalpel numéro trois, découper une section de boucle d’un demi à un centimètre. Ensuite, transférez la section à 10% Formalin pour la fixation du jour au lendemain et d’autres analyses histopathologiques.

Ensuite, utilisez la même lame de scalpel sur la même boucle pour découper le reste de la boucle et transférer ce tissu dans un tube microfusé pour isoler les bactéries. Répétez cette procédure pour chaque boucle à l’aide d’une nouvelle lame de scalpel à chaque fois. Sept heures après l’injection, une boucle intestinale injectée avec un milieu stérile de commande a une bordure intacte de brosse muqueuse sans nécrose.

La congestion légère dans les couches intestinales des segments n’est pas rare. Sept heures après l’injection avec l’agent pathogène Clostridium perfringens, les pointes de villosités sont érodées avec les sites d’entrée nécrotiques entourant les pointes. Et puis le matériel nécrotique entourant les villosités, il ya des grappes de grandes bactéries en forme de tige.

Parfois, la nécrose est due à une mauvaise exécution procédurale et peut être mal interprétée comme des lésions produites par des bactéries. Un signe révélateur est l’absence de bactéries dans la section histologique. En outre, les vaisseaux sanguins dans la couche musculaire sont sévèrement dilatés par l’accumulation de nombreux érythrocytes dégénératifs indiquant la congestion vasculaire.

Ceci a été provoqué par les vaisseaux sanguins mésentériques ligated qui ont probablement été ligated pour faire la tension physique excessive sur les intestins. Les boucles ischémiques peuvent être facilement identifiées au microscope pendant les procédures chirurgicales. Après une congestion vasculaire sévère quelques minutes après la ligature, la serosa sera bleu foncé au lieu de sa coloration rougeâtre rose normale.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de créer plusieurs boucles intestinales dans un modèle de poulet en plaçant des ligatures sur les intestins. Une fois maîtrisées, les interventions chirurgicales, à l’exclusion du temps d’infection, peuvent être effectuées en moins de trois heures, si elles sont effectuées correctement. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de garder le poulet sous anesthésie profonde pour contrôler la douleur et surveiller les signes vitaux pendant toutes les procédures, y compris la partie chirurgicale et après le temps d’infection.

Après cette procédure ou leurs méthodes comme l’isolement bactérien, et l’identification directe comme la détection des gènes par PCR peut être effectuée afin de répondre à des questions externes comme la récupération et l’identification de l’agent pathogène injecté initial. Après ce développement, cette technique a permis aux chercheurs dans le domaine de clostridium perfringens pathogénie d’explorer l’entérite nécrotique chez les poulets. N’oubliez pas que travailler avec des animaux vivants peut être extrêmement variable.

Et des précautions telles que la surveillance anesthésique continue du poulet doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.