Name: Traitement intracerebroventriculaire avec resiniferatoxine et tests de douleur chez les souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Apprenez l'injection intracérébroventriculaire de resiniferatoxine chez la souris pour étudier la désensibilisation sélective de TRPV1 dans les régions supraspinales. Cette méthode permet d'explorer les mécanismes de modulation de la douleur en neuropharmacologie.

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Tous les protocoles expérimentaux utilisés ici ont été approuvés par le Comité des soins et de l’utilisation des animaux de l’Université de Musashino. Les souris mâles ddY (SLC, Shizuoka, Japon) ont été conservées pendant au moins 7 jours dans le cadre d’un cycle de 12 h de lumière/obscurité avant d’avoir des expériences avec de l’eau et des aliments ad libitum. Des souris de 5 ou 6 semaines ont été utilisées pour les expériences.
1. Préparation de médicaments
<ol><li>
Rtx REMARQUE : La solution RTX alcoolique peut causer de graves brûlures cutanées et des lésions oculaires. Assurez-vous d’utiliser des gants et des lunettes en caoutchouc pour vous protéger lors de la manipulation. Cette solution stock peut être utilisée pendant 6 mois.<ol>
<li>Ajouter 500 μL d’éthanol à 1 mg de RTX.</li>
		<li>Ajouter 500 μL de polyoxyéthylène (20) monooléate sorbitan à la solution ci-dessus et vortex bien.</li>
		<li>Ajouter 4 mL de solution saline physiologique au mélange et bien vortex.</li>
		<li>Aliquot 40 μL de la solution dans des tubes à vis de 1,5 m L et les stocker à -40 °C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Acétaminophène
	<ol>
<li>Ajouter une solution propylèneglycol de 20 % w/v à l’acétaminophène à une concentration de 30 mg/mL, et dissoudre avec un sonicateur. Puisque l’acétaminophène peut se précipiter à température ambiante plusieurs heures après la dissolution, préparer juste avant l’utilisation ou garder la solution au chaud jusqu’à ce qu’elle soit utilisée.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Injection sous-cutanée ou intracerebroventriculaire de RTX
<ol><li>Décongeler la solution en stock préparée en 1.1. ci-dessus et le diluer à 20 μg/mL dans le liquide céphalo-rachidien saline ou artificiel (ACSF) composé de (en mM): 119 NaCl, 2,5 KCl, 1 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 11 glucose, 1,3 MgSO4, 2,5 CaCl2 équilibré avec 95% O2 et 5% CO2 (pH 7.2).</li>
	<li>Anesthésiez les souris avec du sel de sodium pentobarbital (60 mg/kg, intrapéritoneally), et vérifiez la perte du réflexe de droit.</li>
	<li>Pour le traitement s.c., injectez rtx (20 μg/mL) dans l’arrière du cou à un volume de 0,1 mL/10 g de poids corporel. Pour le groupe témoin, injectez le véhicule (10 % d’éthanol, 10 % de polyoxyéthylène (20) de sorbitan monooléate et 80 % de solution saline) de la même manière.</li>
	<li>Pour le traitement i.c.v., injectez 5 μL de RTX (20 μg/mL) dans le ventricule latéral droit. Pour le groupe témoin, injectez le véhicule (10 % d’éthanol, 10 % de polyoxyéthylène (20) de sorbitan et 80 % d’ACSF) de la même manière.<ol>
<li>Passer une aiguille jetable de 27 G à travers un tube métallique (0,8 mm d’I.D.) pour exposer la pointe de 3,0 à 3,5 mm de l’aiguille (figure 1A).</li>
		<li>Désinfecter la tête de la souris avec 70% d’alcool, et tenir fermement les os squamosal de la souris avec les doigts (Figure 1B). NOTE: Faites attention aux positions des protubérances squamosales, puisque ces protubérances serviront de repères pour l’injection.</li>
		<li>Déplacez l’aiguille sur le cuir chevelu, et trouver la suture sagittale que la pointe de l’aiguille est accroché à la suture.</li>
		<li>Déplacez la pointe d’environ 1 mm vers la droite, puis déplacez la pointe rostrally, et trouver la suture coronale comme avec 2.4.3. (Figure 1B).</li>
		<li>Insérez l’aiguille lentement et verticalement, injectez la solution RTX en environ 10 secondes et maintenez-la pendant environ 10 secondes.</li>
		<li>Retirez l’aiguille lentement et retournez la souris dans sa cage. Les saignements sont généralement minimes ou absents. Si des saignements majeurs se produisent, l’utilisation d’une autre souris doit être envisagée.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Assignez les souris prétraitées comme sujets pour le test RTX ou le test de pression de la queue (étape 3 et 4, respectivement).</li>
</ol>3. Test RTX
REMARQUE : Les tests sont effectués entre 10h00 et 17h00. La salle d’essai est maintenue à 200 lux et 24-26 °C.
<ol><li>Une semaine après les prétraitements avec RTX (étape 2.), transférer les souris à la salle d’essai au moins 60 min avant de commencer le test.</li>
	<li>Pesez et placez chaque souris individuellement dans une cage en plexiglas (29,5 × 17,5 × 13,5 cm3 hauteur) au moins 30 min avant de commencer l’essai afin de lui permettre de s’acclimater à l’environnement. REMARQUE : L’ordre des tests doit être contrebalancé entre les groupes de prétraitement.</li>
	<li>Administrer l’acétaminophène (300 mg/kg) à la souris intraperitoneally 20 min avant le test.</li>
	<li>Tenez la souris lâchement dans un petit sac en tissu et insérez une aiguille de calibre 30 dans le talon de la patte arrière droite. Avancez l’aiguille sous-cutanéement jusqu’à proximité des plaquettes de marche et injectez 20 μL de solution RTX (0,05 μg/mL).</li>
	<li>Mesurer la période de léchage / comportement mordant dans la région de la patte affectée dans chaque bloc de 5 minutes.</li>
</ol>4. Essai de pression de queue
REMARQUE : Un compteur de pression de type Randall-Selitto est utilisé pour évaluer le seuil de nociception mécanique aiguë. Les tests sont effectués entre 10h00 et 17h00. La salle d’essai est maintenue à 200 lux et 24-26 °C.
<ol><li>Une semaine après les prétraitements avec RTX (étape 2.), transférer les souris à la salle d’essai, et peser et placer chaque souris individuellement dans une cage en plexiglas.</li>
	<li>Marquer les taches à 1,5 et 2,5 cm à partir de la base de la queue.</li>
	<li>Tenez la souris lâchement dans un petit sac en tissu, et appliquez la pression aux taches avec une sonde émoussée. REMARQUE : Une pression de coupure de 250 g est imposée pour éviter les dommages tissulaires.</li>
	<li>Déterminez la pression requise pour provoquer un comportement d’échappement (fouet, torsion et grincement de queue) et calculez le seuil nociceptif en faisant la moyenne de la pression déterminée aux deux endroits.</li>
	<li>Répétez les étapes 4.3. à 4.4. toutes les 15 minutes.</li>
	<li>Après avoir obtenu la ligne de base, administrer l’acétaminophène (300 mg/kg) à la souris intraperitoneally. Après l’administration, répétez les étapes 4.3. et 4,4 toutes les 15 minutes.</li>
</ol>

<ol><li>Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction+of+transient+receptor+potential+vanilloid-1+to+the+peptidergic+subset+of+primary+afferent+neurons+follows+its+developmental+downregulation+in+nonpeptidergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons.</a> J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).</li>
<li>Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen, T. A., Levine, J. D., Julius, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+a+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+nociception+and+pain+sensation+in+mice+lacking+the+capsaicin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor.</a> Science. 288 (5464), New York, N.Y. 306-313 (2000).</li>
<li>Starowicz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+endovanilloid+facilitation+of+glutamate+release+in+brainstem+descending+antinociceptive+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tonic endovanilloid facilitation of glutamate release in brainstem descending antinociceptive pathways.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (50), 13739-13749 (2007).</li>
<li>Gavva, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vanilloid+receptor+TRPV1+is+tonically+activated+in+vivo+and+involved+in+body+temperature+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The vanilloid receptor TRPV1 is tonically activated in vivo and involved in body temperature regulation.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (13), 3366-3374 (2007).</li>
<li>Marsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+anxiety%2C+conditioned+fear%2C+and+hippocampal+long-term+potentiation+in+transient+receptor+potential+vanilloid+type+1+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduced anxiety, conditioned fear, and hippocampal long-term potentiation in transient receptor potential vanilloid type 1 receptor-deficient mice.</a> Journal of Neuroscience. 27 (4), 832-839 (2007).</li>
<li>Tzavara, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoids+activate+transient+receptor+potential+vanilloid+1+receptors+to+reduce+hyperdopaminergia-related+hyperactivity%3A+Therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoids activate transient receptor potential vanilloid 1 receptors to reduce hyperdopaminergia-related hyperactivity: Therapeutic implications.</a> Biological Psychiatry. 59 (6), 508-515 (2006).</li>
<li>Nazıroğlu, M., Övey, İS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+apoptosis+and+calcium+accumulation+through+TRPV1+channels+in+neurobiology+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of apoptosis and calcium accumulation through TRPV1 channels in neurobiology of epilepsy.</a> Neuroscience. 293, 55-66 (2015).</li>
<li>Mallet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+in+brain+is+involved+in+acetaminophen-induced+antinociception%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TRPV1 in brain is involved in acetaminophen-induced antinociception.</a> PloS one. 5 (9), 1-11 (2010).</li>
<li>Barrière, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+amide+hydrolase-dependent+generation+of+antinociceptive+drug+metabolites+acting+on+TRPV1+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Fatty acid amide hydrolase-dependent generation of antinociceptive drug metabolites acting on TRPV1 in the brain.</a> PloS one. 8 (8), e70690(2013).</li>
<li>Jancsó, G., Kiraly, E., Jancsó-Gábor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+induced+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically induced selective degeneration of chemosensitive primary sensory neurones.</a> Nature. 270 (5639), 741-743 (1977).</li>
<li>Szallasi, A., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+loss+in+rat+sensory+ganglia+associated+with+long+term+desensitization+to+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor loss in rat sensory ganglia associated with long term desensitization to resiniferatoxin.</a> Neuroscience Letters. 140 (1), 51-54 (1992).</li>
<li>Cavanaugh, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+subsets+of+unmyelinated+primary+sensory+fibers+mediate+behavioral+responses+to+noxious+thermal+and+mechanical+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Distinct subsets of unmyelinated primary sensory fibers mediate behavioral responses to noxious thermal and mechanical stimuli.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (22), 9075-9080 (2009).</li>
<li>Jeffry, J. A., Yu, S. Q., Sikand, P., Parihar, A., Evans, M. S., Premkumar, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+targeting+of+TRPV1+expressing+sensory+nerve+terminals+in+the+spinal+cord+for+long+lasting+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Selective targeting of TRPV1 expressing sensory nerve terminals in the spinal cord for long lasting analgesia.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7021(2009).</li>
<li>Jancsó, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracisternal+capsaicin%3A+selective+degeneration+of+chemosensitive+primary+sensory+afferents+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Intracisternal capsaicin: selective degeneration of chemosensitive primary sensory afferents in the adult rat.</a> Neuroscience letters. 27 (1), 41-45 (1981).</li>
<li>Gamse, R., Saria, A., Lundberg, J. M., Theodorsson-Norheim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neurochemical+changes+after+intracisternal+capsaicin+treatment+of+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neurochemical changes after intracisternal capsaicin treatment of the guinea pig.</a> Neuroscience Letters. 64 (3), 287-292 (1986).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular pain. 4, 43(2008).</li>
<li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> The Journal of clinical investigation. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li>
<li>Fukushima, A., Mamada, K., Iimura, A., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supraspinal-selective+TRPV1+desensitization+induced+by+intracerebroventricular+treatment+with+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Supraspinal-selective TRPV1 desensitization induced by intracerebroventricular treatment with resiniferatoxin.</a> Scientific reports. 7 (1), 12452(2017).</li>
<li>Haley, T. J., McCormick, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+effects+produced+by+intracerebral+injection+of+drugs+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology+and+chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse.</a> British journal of pharmacology and chemotherapy. 12 (1), 12-15 (1957).</li>
<li>Tjølsen, A., Berge, O. G., Hunskaar, S., Rosland, J. H., Hole, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formalin+test%3A+an+evaluation+of+the+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The formalin test: an evaluation of the method.</a> Pain. 51 (1), 5-17 (1992).</li>
<li>Ohsawa, M., Miyabe, Y., Katsu, H., Yamamoto, S., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+sensory+nerve+fiber+responsible+for+lysophosphatidic+acid-induced+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of the sensory nerve fiber responsible for lysophosphatidic acid-induced allodynia in mice.</a> Neuroscience. 247, 65-74 (2013).</li>
<li>Tanabe, M., Tokuda, Y., Takasu, K., Ono, K., Honda, M., Ono, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synthetic+TRH+analogue+taltirelin+exerts+modality-specific+antinociceptive+effects+via+distinct+descending+monoaminergic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The synthetic TRH analogue taltirelin exerts modality-specific antinociceptive effects via distinct descending monoaminergic systems.</a> British journal of pharmacology. 150 (4), 403-414 (2007).</li>
<li>Ono, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+in+sympathetic+nerve+activity+as+a+possible+mechanism+for+the+hypothermic+effect+of+oseltamivir%2C+an+anti-influenza+virus+drug%2C+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+%26+clinical+pharmacology+%26+toxicology%22%5BJournal%5D)">Reduction in sympathetic nerve activity as a possible mechanism for the hypothermic effect of oseltamivir, an anti-influenza virus drug, in normal mice.</a> Basic & clinical pharmacology & toxicology. 113 (1), 25-30 (2013).</li>
<li>Kauer, J. A., Gibson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hot+flash%3A+TRPV+channels+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Hot flash: TRPV channels in the brain.</a> Trends in neurosciences. 32 (4), 215-224 (2009).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont pas de conflits d’intérêts à déclarer

L’étape la plus critique de ces expériences est le succès de l’injection d’i.c.v. La technique d’injection i.c.v. utilisée ici est assez simple mais nécessite une certaine pratique. Avant les expériences, la pratique avec des colorants (p. ex. 0,5 % de bleu trypan en solution saline) est recommandée. Si l’injection est effectuée correctement, une marque d’aiguille doit être évidente sur la suture coronale et le colorant injecté doit être présent dans le ventricule contralatéral et le troisième ventricule. En outre, l’ins...

Les animaux reçoivent divers stimuli physiques et chimiques de leur environnement grâce à des capteurs sur les nerfs périphériques. Le récepteur transitoire potentiel vanilloid type 1 (TRPV1) est l’un des canaux thermosensibles, non sélectifs cation qui agissent comme capteurs de chaleur1,2, et l’activation et / ou la modulation de TRPV1 est connu pour être une étape clé pour la nociception dans les contextes normaux et inflammatoires3. Bien que le modèle d’expression globale soit controversé, l’expression de TRPV1 a également été suggérée dans les régions supraspinales, étant impliquée dans diverses activités de cerveau (y compris nociception4, thermorégulation5, anxiété6, trouble d’hyperactivité de déficit d’attention7, et épilepsie8). En outre, il a été récemment suggéré que l’acétaminophène, un analgésique largement utilisé, sert de médiateur à l’activation du TRPV1 central pour obtenir son action analgésique9,10.
L’administration d’un agoniste trpv1 excédentaire, y compris la capsaïcine et la résine (RTX) aux animaux conduit à la mort de neurones TRPV1 positifs et à une désensibilisation durable aux agonistesTRPV1 11,12. Combinée à l’application locale (intrathécal13,14, intracisternale15,16,17, et intraganglional18), cette approche d’ablation chimique a fourni une autre façon d’étudier les fonctions physiologiques de TRPV1. Nous avons récemment signalé que l’injection intracerebroventriculaire (c.c.v.) de RTX inhibe l’effet analgésique de l’acétaminophène chez les souris, suggérant la désensibilisation supraspinal-sélective trpv119. Dans ce manuscrit, nous présentons le protocole précis pour l’injection i.c.v. et les tests de douleur subséquents.
L’injection directe de médicaments dans les ventricules du cerveau permet d’étudier leurs effets centraux tout en minimisant les effets périphériques. La procédure d’injection i.c.v. présentée ici est une modification de la méthode rapportée par Haley et McCormick20. Cette méthode est simple impliquant l’insertion d’une aiguille d’injection dans les ventricules latéraux par la suture coronale et ne nécessite aucun équipement spécial ou des procédures chirurgicales pour la cannulation.
L’application locale périphérique des agonistes trpv1 évoque une sensation de douleur brûlante et une inflammation neurogénique. Les souris qui sont traitées systématiquement avec RTX, et les souris TRPV1-KO, sont insensibles à cette stimulation13. Nous avons effectué l’injection intraplantaire de RTX (test RTX) pour confirmer la préservation du TRPV1 périphérique dans RTX-i.c.v. Souris. Cette méthode est une modification du test de formaline classique21.
Il a été rapporté que les souris traitées systématiquement avec des souris RTX et TRPV1-KO montrent un seuil normal pour les stimuli mécaniques11,13,22. Ici, nous présentons une procédure pour le test de pression de la queue pour tester les changements dans l’effet analgésique de l’acétaminophène.
Toutes ces procédures sont orthodoxes et polyvalentes, et peuvent être appliquées à des études d’autres médicaments.

<table><tbody><tr><td>Résinifératoxine</td><td>LKT Laboratories</td><td>R1774</td><td>utilisée pour les prétraitements s.c./i.c.v. et le test RTX</td></tr><tr><td>Acétaminophène</td><td>IWAKI SEIYAKU</td><td></td><td>offert par IWAKI SEIYAKU</td></tr><tr><td>Sel de sodium pentobarbital</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>P0776</td><td>utilisé pour l’anesthésie</td></tr><tr><td>Éthanol (99.5)</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>057-00456</td><td>utilisé pour dissoudre RTX</td></tr><tr><td>Polyoxyéthylène(20) Monooléate de sorbitan</td><td>Wako Pure Chemical Industries</td><td>161-21621</td><td>utilisé pour dissoudre RTX</td></tr><tr><td>25 &#956 ; L microseringue</td><td>Hamilton</td><td>1702LT</td><td>utilisée pour l’injection i.c.v.</td></tr><tr><td>100 &#956 ; Microseringue L</td><td>Hamilton</td><td>1710LT</td><td>utilisée pour l’injection intraplantaire</td></tr><tr><td>Aiguille jetable de calibre 26</td><td>TERUMO</td><td>NN-2613S</td><td>utilisée pour l’injection i.c.v.</td></tr><tr><td>Aiguille jetable de calibre 30</td><td>NIPRO</td><td>01134</td><td>utilisée pour l’injection intraplantaire</td></tr><tr><td>Manomètre</td><td>Ugo Basile</td><td>Analgésique Type 7200</td><td>utilisé pour le test de pression de queue</td></tr></tbody></table>

traitement intracerebroventriculaire avec resiniferatoxine et tests de douleur chez les souris

Intracerebroventricular Treatment with Resiniferatoxin and Pain Tests in Mice

Le récepteur transitoire potentiel vanilloid type 1 (TRPV1), un canal thermosensible de cation, est connu pour déclencher la douleur dans les nerfs périphériques. En plus de sa fonction périphérique, sa participation aux fonctions cérébrales a également été suggérée. La resiniferatoxine (RTX), un agoniste ultrapotent TRPV1, a été connue pour induire la désensibilisation à long terme de TRPV1, et cette désensibilisation a été une approche alternative pour étudier la pertinence physiologique des cellules exprimant TRPV1. Ici, nous décrivons un protocole pour le traitement intracerebroventriculaire (c.c.v.) avec RTX chez les souris. Les procédures sont décrites pour tester la nociception à la stimulation périphérique TRPV1 (essai RTX) et la stimulation mécanique (test de pression de la queue) puis suivent. Bien que les réponses nociceptives des souris qui avaient été administrées RTX i.c.v. étaient comparables à celles des groupes témoins, les souris administrées par RTX-i.c.v.étaient insensibles à l’effet analgésique de l’acétaminophène, ce qui suggère que le traitement i.c.v. RTX peut induire une désensibilisation supraspinal-sélective TRPV1. Ce modèle de souris peut être utilisé comme un système expérimental pratique pour étudier le rôle de TRPV1 dans la fonction cérébrale/supraspinale. Ces techniques peuvent également être appliquées à des études des actions centrales d’autres médicaments.

Les souris traitées par c.c.v. ne présentent aucune anomalie apparente dans leur apparence, leurs activités spontanées, leur poids corporel19 et leur température corporelle (groupe traité par le véhicule, 38,4 ± 0,3 °C, n = 6; Groupe traité par RTX, 38,7 ± 0,2 °C, n = 6).
Figure 2A-B montre la réactivité des souris traitées par s.c.- ou c.c.v. à l’injection i...

Le récepteur transitoire potentiel de type 1 (TRPV1) dans la région supraspinale a été suggéré pour jouer certains rôles dans la fonction cérébrale. Décrit ici est un protocole pour l’injection intracerebroventriculaire de resiniferatoxin pour la désensibilisation supraspinale TRPV1 chez les souris. Des procédures pour certains tests de douleur sont également présentées.

Traitement intracerebroventriculaire avec resiniferatoxine et tests de douleur chez les souris

The transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1), a thermosensitive cation channel, is known to trigger pain in the peripheral nerves. In ...

L’objectif global de ce prétraitement est de générer des souris et que les canaux TRPV1 sont désensibilisés aux régions supraspinales. Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine neuropharmacologique. Le principal avantage de cette technique est que la désensibilisation sélective supraspinale TRPV1 peut être induite d’une manière assez simple.Pour commencer cette procédure, anesthésier une souris avec du sodium pentobarbital intraperitoneally et vérifier la perte de réflexe de droitage. Pour un traitement sous-cutané, injecter rtx à 20 microgrammes par millilitre dans l’arrière du cou à un volume de 0,1 millilitre par 10 grammes de poids corporel. Pour le groupe témoin, injectez le véhicule de la même manière.Passez une aiguille jetables de calibre 27 à travers un tube métallique pour exposer la pointe de 3 à 3,5 millimètres de l’aiguille. Ensuite, maintenez fermement les os squamosal de la souris avec les doigts. Déplacez l’aiguille latéralement sur le cuir chevelu et de trouver la suture sagittale que la pointe de l’aiguille est accroché sur la suture.Déplacez la pointe d’environ un millimètre vers la droite, puis déplacez la pointe de façon rostrale po

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Cette vidéo présente une méthode permettant d’établir un modèle de neuropathie à petites fibres chez la souris à l’aide de l’agoniste TRPV1 résinifératoxine (RTX). Il décrit les étapes impliquées dans l’administration de RTX à des souris et explique comment RTX induit la mort neuronale dans des neurones sensoriels de petit diamètre, établissant ainsi le modèle de neuropathie.

Établissement d’un modèle murin de neuropathie des petites fibres à l’aide de la résinifératoxine

Source : Fukushima, A., et al. Traitement intracérébroventriculaire avec de la résinifératoxine et tests de douleur chez la souris. J. Vis. Exp. (2020)Cette vidéo montre la procédure d’injection intra-ventriculaire de résinifératoxine chez la souris pour désensibiliser les récepteurs TRPV1 dans le cerveau.

Traitement intracérébroventriculaire à la résinifératoxine pour la désensibilisation au TRPV1 dans le cerveau de la souris

Source : Martinez, E., et al. Pharmacothérapie intracrânienne et dosages de la douleur chez les rongeurs. J. Vis. Exp. (2019).Cette vidéo montre l’administration intracrânienne d’un médicament analgésique chez un rat anesthésié avec une canule guide préimplantée dans le cortex préfrontal. Un analgésique supplémentaire est co-administré par voie intrapéritonéale. Après la guérison, la réponse à la douleur thermique du rat est évaluée à l’aide de l’appareil de Hargreave, où la latence de retrait...

Effet synergique de l’administration intracrânienne et intrapéritonéale d’analgésiques sur la réponse thermique à la douleur chez un rat

Nous présentons un protocole pour mesurer l’absorption de la [14C]-iodoantipyrine (IAP) et évaluer l’activation des substrats neuronaux impliqués dans la douleur centrale post-AVC (CPSP) dans un modèle de rongeur.

Mesures autoradiographiques de [<sup&gt; 14</sup&gt; C] -Iodoantipyrine dans le cerveau de rat Après post-AVC Central Douleur

Cette étude établit un modèle expérimental de neuropathie pure petites fibres avec résinifératoxine (RTX). Une dose unique de RTX (50 µg/kg) est optimal pour l’élaboration d’un modèle de neuropathie des petites fibres qui imite les caractéristiques des patients et pourrait aider à enquêter sur la signification moléculaire nociceptif qui sous-tendent la douleur neuropathique.

Établir un modèle de souris d’une neuropathie Pure petites fibres avec l’agoniste Ultrapotent de Transient Receptor potentiels Vanilloid Type 1

Dans cet article nous fournir des détails pour les méthodes de production et de contrôle de la qualité d’une protéine de fusion recombinantes IL4-10. Nous montrons aussi comment tester l’efficacité de cette protéine afin de résoudre la douleur dans un modèle murin de la douleur inflammatoire.

Développement de protéines recombinantes pour traiter la douleur chronique

Nous présentons ici un protocole pour effectuer des expériences pharmacologiques intracrâniennes suivies de tests de comportement de la douleur chez les rongeurs. Ce protocole permet aux chercheurs de livrer des cibles moléculaires et cellulaires du cerveau, des agents pharmacologiques dans le traitement de la douleur.

Pharmacothérapie intracrânienne et dosages de la douleur chez les rongeurs

Le symptôme le plus notable de la migraine est une douleur intense à la tête, et on suppose que cela est médié par des neurones sensoriels innervant les méninges. Ici, nous présentons une méthode pour appliquer localement des substances à la dure-mère d’une manière peu invasive tout en utilisant l’hypersensibilité faciale comme sortie.

Stimulation durale et test de von Frey périorbitaire chez la souris en tant que modèle préclinique de maux de tête

La ligature partielle du nerf sciatique induit une douleur neuropathique chronique de longue durée, caractérisée par des réponses exagérées aux stimuli thermiques et mécaniques. Ce modèle murin de douleur neuropathique est couramment utilisé pour étudier des thérapies innovantes pour la gestion de la douleur. Cet article décrit en détail l’intervention chirurgicale pour améliorer la standardisation et la reproductibilité.

Ligature partielle du nerf sciatique : un modèle murin de douleur neuropathique chronique pour étudier l’effet antinociceptif de nouvelles thérapies

Les vermicelles et des tests de dextérité Manipulation Capellini patte profiter de la tendance naturelle des rongeurs à manipuler les aliments en utilisant patte habile et mouvements chiffres. Les animaux sont filmés pendant la manipulation des brins courts de pâtes sèches non cuits. Lente lecture vidéo permet le mouvement pour la quantification des ajustements patte.

Les vermicelles et tests de manipulation Capellini: Simple mesures quantitatives de la fonction patte habile dans les rats et les souris

Apprenez l'injection intracérébroventriculaire de resiniferatoxine chez la souris pour étudier la désensibilisation sélective de TRPV1 dans les régions supraspinales. Cette méthode permet d'explorer les mécanismes de modulation de la douleur en neuropharmacologie.

Traitement intracerebroventriculaire avec resiniferatoxine et tests de douleur chez les souris

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