Name: Méthode de Culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Apprenez la culture organotypique pour étudier le développement des yeux embryonnaires de poulet. Cette méthode permet d'observer les interactions entre la rétine neurale et l'épithélium pigmentaire rétinien sans effets létaux des composés.

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Les auteurs voudrais remercier Gregory Haller (Mount Saint Vincent University) pour son travail préliminaire à l’élaboration du protocole. Les auteurs tiens également à remercier Nicholas Jones (Mount Saint Vincent University) pour son expertise technique et d’assistance avec le tournage et la production de la portion audio/visuel du manuscrit. Daniel Andrews a été appuyée par le financement de l’Université Mount Saint Vincent et les Sciences naturelles et génie conseil recherche du Canada (CRSNG) le via une bourse de recherche de premier cycle. Tamara A. Franz-Odendaal est soutenue par une subvention à la découverte du CRSNG.

Remarque : Pour les stades de l’embryon, utiliser le Hamburger et Hamilton12 (HH) mise en scène de table.
1. embryon Incubation
<ol><li>Incuber les œufs de poule fécondés dans un incubateur stérile, contrôle de la température à 37 ° C ± 1 ° C et environ 40 % d’humidité.</li>
	<li>Tournez les oeufs 1 x par jour et laisser incuber à HH34 (fécondation après 8 jours).</li>
</ol>2. préparation et stérilisation du matériel
<ol><li>Pour 12 embryons, autoclave 2 L d’eau distillée, 1 L de solution saline à poussin 0,85 %, 12 pipettes en verre, 1 boîte de mouchoir en papier, 24 2,5 cm x 2,5 cm carrés de papier-filtre semi poreux et carrés de 24 2,5 cm x 2,5 cm de fil d’acier de maille avec les bords courbés vers le bas. Pour stériliser le matériel, autoclave à 121 ° C pendant au moins 15 min. Remarque : L’autoclavage des matériaux peut se faire à l’avance.</li>
	<li>Stériliser l’incubateur avec l’éthanol à 70 % en l’essuyant les côtés et étagères porte. Placer 2 récipients en plastique contenant autoclavés distillée à l’intérieur de l’incubateur à conserver l’humidité. Préchauffer l’incubateur de culture à 37 ° C ± 1 ° C et environ 40 % d’humidité. S’assurer que l’incubateur est complètement noir ; Si la porte est transparente, couvrez-la de papier d’aluminium.</li>
	<li>Réchauffer au préalable les 100 mL de milieu nutritif et 1 mL de pénicilline en les plaçant dans l’incubateur de culture.</li>
	<li>Couvrir l’espace de travail avec du papier essuie-tout et stériliser le banc en vaporisant avec l’éthanol à 70 %. Stériliser 2 paires de pinces, ciseaux de dissection, une lame de rasoir et une cuillère en plastique avec l’éthanol à 70 % de la même manière.</li>
	<li>Plats de Pétri stérile 100 mm lieu 12 et 24 boîtes de Pétri stériles 35 mm sur le banc pour utilisation. S’assurer que les plats restent dans un sachet stérile jusqu'à utilisation.</li>
</ol>3. préparation de l’embryon
NOTE : Partir de là, porter un masque de protection poussière pour éviter de contaminer les cultures. Une infection bactérienne ou fongique va ruiner la culture, et il y a un risque de s’étendre rapidement à toutes les cultures dans l’incubateur.
<ol><li>Crack ouvrir le œuf et transférer l’embryon à un 100 mm boîte de Pétri contenant du sérum physiologique poussin à 0,85 %. Stade de l’embryon selon les caractéristiques anatomiques décrites dans le Hamburger et Hamilton, mise en scène de directives12 et confirmer l’embryon est à HH34.</li>
	<li>Couper le cou et puis coupent la tête de l’embryon à la ligne médiane à l’aide d’une lame de rasoir stérilisée. À l’aide d’une pince stérile, enlever le cerveau. Le bec laisse intacte.</li>
</ol>4. culture Setup
<ol><li>2 place de la Pétri de 35 mm à l’intérieur d’une boîte de Pétri 100 mm.</li>
	<li>Placer un treillis en acier à l’intérieur de chaque boîte de Pétri 35 mm.</li>
	<li>À l’aide de pinces, transférer 1 des têtes coupées à un morceau de papier filtre semi poreux de 2,5 cm x 2,5 cm avec le œil vers le haut. S’assurer que le tissu est sécurisé et ne glisse pas éteint en l’inclinant légèrement.</li>
	<li>À l’aide de pinces, placer soigneusement les tissus de le œil et le filtre en papier sur le dessus de la maille de fil d’acier en 1 des boîtes de Pétri le 35 mm, créant une scène surélevée avec les tissus de le œil sur le dessus.</li>
	<li>Répétez les étapes 4.3 et 4.4 avec l’autre moitié de tête.</li>
	<li>À l’aide d’une pipette de verre stérile, ajouter avec précaution le milieu nutritif directement dans chaque boîte de Pétri 35 mm jusqu'à ce qu’il atteigne le niveau du papier-filtre. Ne pas immerger la moitié de la tête dans le milieu nutritif.</li>
	<li>Ajouter 50 µL de 10 000 U/mL de pénicilline-streptomycine dans le milieu nutritif dans chaque boîte de Pétri.</li>
	<li>Plier un morceau de papier de soie dans un petit carré et le placer à l’intérieur de la boîte de Pétri de 100 mm. Humidifier avec de l’eau distillée autoclavé.</li>
	<li>Placez la boîte de Pétri dans l’incubateur stérile, sombre à 37 ° C ± 1 ° C et environ 40 % d’humidité pendant 4 jours.</li>
	<li>Répétez les étapes 3 et 4 pour chaque embryon. Remarque : Le nombre d’embryons nécessaire dépendra de l’expérience spécifique ; Nous décrivons ici le protocole pour 12 embryons.</li>
</ol>5. culture entretien
<ol><li>Une fois par jour, remplir les contenants de plastique dans l’incubateur avec l’eau distillée froide, stérilisés à l’autoclave.</li>
	<li>Tous les jours, vérifier toutes les cultures pour des infections bactériennes ou fongiques. Cultures qui se sont désintégrées ou dans lequel le milieu a changé de couleur sont infectés. Jeter toutes les cultures qui sont infectés.</li>
</ol>6. fixation
<ol><li>Après mise en culture, sortir tous les plats de l’incubateur.</li>
	<li>À l’aide d’une paire de pinces, retirez délicatement le œil du papier filtre, prenant soin de ne pas pour déchirer le tissu.</li>
	<li>Fixer le tissu oculaire dans 4 % de paraformaldéhyde dans 1 x tampon phosphate salin pendant la nuit à 4 ° C ou 10 % de formol tamponné neutre durant la nuit à température ambiante.</li>
	<li>Stocker les tissus à 4 ° C en 1 x solution saline tamponnée au phosphate.</li>
</ol>

<ol><li>Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18855894">Towards understanding the development of scleral ossicles in the chicken, Gallus gallus.</a> Developmental Dynamics. 237 (11), 3240-3251 (2008).</li>
<li>Scholey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+motor+proteins+in+echinoderm+embryos%3A+an+argument+in+support+of+antibody+inhibition+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motility+and+the+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Functions of motor proteins in echinoderm embryos: an argument in support of antibody inhibition experiments.</a> Cell Motility and the Cytoskeleton. 39 (4), 257-260 (1998).</li>
<li>Horakova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+FGFR+inhibitors+on+chicken+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Effect of FGFR inhibitors on chicken limb development.</a> Development, Growth & Differentiation. 56 (8), 555-572 (2014).</li>
<li>Gerlach, G. F., Morales, E. E., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbead+Implantation+in+the+Zebrafish+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo.</a> Journal of Visualized Experiments. (101), e52943(2015).</li>
<li>Luz-Madrigal, A., Grajales-Esquivel, E., Del Rio-Tsonis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroporation+of+Embryonic+Chick+Eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Electroporation of Embryonic Chick Eyes.</a> Bio-protocol. 5 (12), e1498(2015).</li>
<li>Roach, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+organ+culture+of+embryonic+chick+femora%3A+a+system+for+investigating+bone+and+cartilage+formation+at+an+intermediate+level+of+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Long-term organ culture of embryonic chick femora: a system for investigating bone and cartilage formation at an intermediate level of organization.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 5 (1), 85-100 (1990).</li>
<li>Jung, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+inhibitory+action+of+BMPs+and+their+relationships+with+activators+in+feather+formation%3A+implications+for+periodic+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Local inhibitory action of BMPs and their relationships with activators in feather formation: implications for periodic patterning.</a> Developmental Biology. 196 (1), 11-23 (1998).</li>
<li>McKinnell, I. W., Turmaine, M., Patel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonic+Hedgehog+functions+by+localizing+the+region+of+proliferation+in+early+developing+feather+buds%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Sonic Hedgehog functions by localizing the region of proliferation in early developing feather buds.</a> Developmental Biology. 272 (1), 76-88 (2004).</li>
<li>Smith, E. L., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+take+on+an+old+story%3A+chick+limb+organ+culture+for+skeletal+niche+development+and+regenerative+medicine+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cells+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">A new take on an old story: chick limb organ culture for skeletal niche development and regenerative medicine evaluation.</a> European Cells & Materials. 26, 91-106 (2013).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Spermatogenesis+in+Explanted+Adult+Mouse+Testis+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In Vitro Spermatogenesis in Explanted Adult Mouse Testis Tissues.</a> PLoS One. 10 (6), e0130171(2015).</li>
<li>Ochoa-Villarreal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+cell+culture+strategies+for+the+production+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22BMB+Reports%22%5BJournal%5D)">Plant cell culture strategies for the production of natural products.</a> BMB Reports. 49 (3), 149-158 (2016).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).</li>
<li>Yu, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4380223/">The developmental biology of feather follicles.</a> The International Journal of Developmental Biology. 48 (0), 181-191 (2004).</li>
<li>Jabalee, J., Hillier, S., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+investigation+of+cellular+dynamics+during+the+development+of+intramembranous+bones%3A+the+scleral+ossicles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">An investigation of cellular dynamics during the development of intramembranous bones: the scleral ossicles.</a> Journal of Anatomy. 223 (4), 311-320 (2013).</li>
<li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental Cell Research. 16 (1), 118-147 (1959).</li>
<li>Pinto, C. B., Hall, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+an+understanding+of+the+epithelial+requirement+for+osteogenesis+in+scleral+mesenchyme+of+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Zoology%22%5BJournal%5D)">Toward an understanding of the epithelial requirement for osteogenesis in scleral mesenchyme of the embryonic chick.</a> Journal of Experimental Zoology. 259 (1), 92-108 (1991).</li>
<li>Mbiene, J. P., MacCallum, D. K., Mistretta, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+cultures+of+embryonic+rat+tongue+support+tongue+and+gustatory+papilla+morphogenesis+in+vitro+without+intact+sensory+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Organ cultures of embryonic rat tongue support tongue and gustatory papilla morphogenesis in vitro without intact sensory ganglia.</a> Journal of Comparative Neurology. 377 (3), 324-340 (1997).</li>
<li>Cloney, K., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+ex-ovo+culturing+of+chick+embryos+to+advanced+stages+of+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Optimized ex-ovo culturing of chick embryos to advanced stages of development.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), e52129(2015).</li>
<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), e306(2007).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ce protocole utilise des tissus établie des techniques de culture pour atteindre la croissance d’un oeil de poulet embryonnaire jour 8 (HH34) in vitro pendant 4 jours. Cette méthode de mise en réseau-culture a été initialement décrite par Trowell15. Nous avons optimisé un protocole de Pinto et Hall 1991 étude16 utilisant une membrane semi poreuse avec le réseau pour étudier les signaux inductifs entre les couches de tissus séparés des yeux embryonnaires de poulet<s...

L’embryonnaire poulet (Gallus gallus) est un organisme d’excellent modèle couramment utilisé dans le domaine de la biologie. Sa période d’incubation est d’environ 21 jours et beaucoup d’oeufs peut être incubés simultanément, rendant les expérimentation rapide et efficace. Peut-être plus important encore, l’embryon est également facilement manipulé, permettant l’étude approfondie des principaux processus de développement et des gènes et des protéines qui animent ces processus.
L’oeil de l’embryon de poulet est un organe complexe qui se développe par l’interaction d’un certain nombre de différents tissus semblables à beaucoup d’autres systèmes de corps. Cette méthode permet l’étude de l’évolution de ces tissus, en particulier à un stade avancé de développement. Par exemple, la rétine multicouche peut être particulièrement intéressante pour ceux qui étudient le développement du système nerveux. Des méthodes alternatives qui permettent l’étude des autres tissus de l’oeil comme la cornée, le corps vitréennes, la lentille, la sclérotique et les paupières sont bénéfiques pour les chercheurs. L’oeil embryonnaire de poulet contient également une série d’os plats, les osselets sclérales, qui peuvent servir de modèle pour l’étude des os intramembranaires induction et l’ossification en vertébrés1.
Actuellement, il existe un certain nombre de méthodes utilisées pour étudier le développement embryonnaire. Microinjections d’anticorps inhibiteurs ou autres molécules inhibitrices de la2,3, implanté chirurgicalement des microbilles imbibé d’inhibiteur4et électroporation5 sont toutes des méthodes pouvant servir à des gènes régulent ou protéines d’intérêt dans un embryon. Des méthodes similaires sont utilisés pour réguler positivement les protéines. Ces méthodes ne sont pas sans leurs limites. Par exemple, lors de l’utilisation de produits chimiques pour modifier le développement embryonnaire, l’effet létal sur l’embryon doit être évalué, et cela limite l’utilisation des méthodes susmentionnées pour les sites localisés d’application à des doses suffisamment bas pour assurer la survie de la embryon.
Culture de tissus in vitro a été utilisée dans un large éventail d’organismes pour étudier le développement et peut être utilisé pour contourner les limitations susmentionnées. Par exemple, les fémurs6et plume bourgeons7,8branches9 du poulet ont tous étudiés à l’aide de tissus cultivant des méthodes, comme ont les testicules des souris10 et les racines et les tiges des plantes11. Ces méthodes accordent aux scientifiques un degré élevé de contrôle sur le développement des tissus, comme la possibilité de varier la température et de modifier la disponibilité des nutriments. L’isolement des tissus de l’embryon entier rend également beaucoup moins sensibles à l’effet létal des produits chimiques, permettant ainsi à des études de manipulation à l’échelle mondiale à des concentrations plus élevées. Un autre avantage notable de la mise en culture in vitro est la préservation de l’environnement cellulaire du tissu ; l’arrangement des tissus reste relativement inchangée, ce qui permet d’étudier les interactions entre les différents tissus types9. Ainsi, in vitro culture ouvre portes supplémentaires expérimentale approches non disponible dans des modèles in vivo ou in ovo .
Actuellement, il est particulièrement difficile d’étudier l’évolution de le œil de poulet embryonnaire à l’aide de produits chimiques. Un certain nombre de membranes extra-embryonnaires couvre l’embryon, rendant difficile l’application de microbilles ou produits chimiques ; l’embryon est également très active dans l’oeuf comme elle vieillit, ce qui complique une méthode déjà difficile. Ce protocole permet un accès facile à le œil et des tissus entourant, en éliminant ces obstacles, tout en offrant de nouvelles possibilités d’examiner les processus de développement intérieur de le œil. Ce protocole a été créé pour étudier l’induction des osselets sclérales intérieur de l’oeil embryonnaire.

<table><tbody><tr><td>Boîtes de Pétri pour culture cellulaire de 35 mm</td> Boîte de culture tissulaire <td>Corning</td><td>353001</td><td>facile à saisir, polystyrène, non pyrogène</td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri pour culture cellulaire de 100 mm</td> Boîte <td>de culture tissulaire Corning</td><td>353003, polystyrène, papier mouchoir en</td><td></td></tr><tr><td>papier</td><td>apyrogène Kimtech</td><td>34155</td><td>Essuie-glaces de la marque Kimtech Science, 280 par carton</td></tr><tr><td>treillis métallique</td><td>n/a</td> n<td>/a</td><td>treillis métallique en acier inoxydable (taille de la grille 0,7 mm)</td></tr><tr><td>pipettes en verre jetables</td><td>VWR</td><td>14673-010</td><td>Verre borosilicaté jetable 5 3/4"</td></tr><tr><td>milieu nutritif</td><td>Gibco</td><td>12591-038</td><td>Fitton-Jackson Modification, [+] L-glutamine avec rouge de phénol (BGJB)</td></tr><tr><td>pénicilline-streptomycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458</td><td>10000 unités/mL pénicilline streptomycine solution filtre stabilisé</td></tr><tr><td> papier</td><td>Whatman</td><td>1454 090</td><td>papier filtre semi-poreux 90mm</td></tr><tr><td>œufs de poule fécondés</td><td>Dalhousie University Agricultural College</td><td>n/a</td><td>peut être obtenu auprès de fermes locales</td></tr><tr><td>chlorure de sodium (NaCl)</td><td>EMD</td><td>SX0420-3</td><td>cristaux de chlorure de sodium, qualité réactif</td></tr><tr><td>1 L bouteille en verre</td><td>VWR</td><td>89000-240</td><td>1 L bouteille en verre autoclavable en pyrex</td></tr><tr><td>éthanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82011</td><td>70 % de biologie moléculaire Récipients</td></tr><tr><td>tupperware</td><td>n/a</td><td>n/a n/a</td><td>achetés en magasin et stérilisés avec EtOH</td></tr><tr><td>lames de rasoir jetables</td><td>VWR</td><td>55411-050</td><td>lames de rasoir industriel à simple tranchant (acier au carbone chirurgical)</td></tr><tr><td>cuillères en plastique</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>achetées en magasin et stérilisées avec masque anti-poussière EtOH</td></tr><tr><td></td><td>3M</td><td>n/a</td><td>3M 8500 Comfort Mask</td></tr><tr><td>paraformaldéhyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>paraformaldéhyde, qualité réactif, formalin cristallin</td></tr><tr><td>tamponné neutre</td><td>Fisher Scientific</td><td>72210</td><td>10 %</td></tr> neutre phosphate de formalin <tr><td>tamponné salin (PBS)</td><td>n/a</td><td>n/a n/a</td><td>Saline tamponnée au phosphate 10X pH 7,4 (137mM NaCl, 2,5mM KCl, 4,3mM Na2HPO4, 1,4mM KH2PO4)</td></tr><tr><td>15 ml tubes faucon</td><td>VWR</td><td>21008-216</td><td>tubes à centrifuger préstérilisés</td></tr><tr><td>pince</td><td>FST</td><td>n/a</td><td>pince fine</td></tr><tr><td>sérum salin pour poussins&nbsp ;</td><td>n/a</td><td>n/a&nbsp ;</td><td>0,85 % de NaCl</td></tr><tr><td>papier d’aluminium</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>essuie-tout</td> du commerce <td>n/a</td> n<td>/a</td> acheté <td>en magasin</td></tr></tbody></table>

méthode de culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Le poulet embryonnaire est couramment utilisé comme un organisme modèle fiable pour le développement des vertébrés. Son accessibilité et son incubation courte période le rend idéal pour l’expérimentation. Actuellement, l’étude de ces voies de développement de l’embryon de poulet est réalisée en appliquant des inhibiteurs et des médicaments à des sites localisés et à de faibles concentrations en utilisant une variété de méthodes. Culture de tissus in vitro est une technique qui permet l’étude des tissus séparés de l’organisme hôte, tout en contournant en même temps beaucoup de limitations physiques présentes lorsque vous travaillez avec des embryons entiers, tels que la susceptibilité des embryons doses élevées de produits chimiques potentiellement mortels. Nous présentons ici un organotypique cultivant protocole pour cultiver le poulet embryonnaire demi tête in vitro, qui présente de nouvelles opportunités pour l’examen des processus de développement au-delà des méthodes actuellement établies.

En utilisant cette méthode, un oeil embryonnaire de poulet peut être cultivé de jour 8 de son développement (HH34) in vitro pendant 4 jours. Quatre jours de in ovo développement correspond à HH38.
Cette méthode de culture soutient le développement des bourgeons de plumes autour de le œil et des paupières (Figure 1 b). Ces bourgeons de plumes ne sont pas présents dans ovo à...

Nous présentons ici un organotypique cultivant protocole pour cultiver des organes embryonnaires de poulet in vitro. En utilisant cette méthode, le développement des tissus embryonnaires de poulet peut être étudié, tout en conservant un haut degré de contrôle sur le milieu de culture.

Méthode de Culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

L’objectif global de ce protocole est de fournir un accès aux yeux de poulet embryonnaires dans un cadre in vitro afin de permettre une étude approfondie des voies de développement complexes dans l’embryon. Chez le poulet embryonnaire, l’étude de l’œil est souvent difficile, en raison du développement des paupières, du mouvement de l’embryon et de la croissance de tissus embryonnaires supplémentaires. Des composés tels que les médicaments et les inhibiteurs peuvent également avoir des effets létaux sur l’embryon, ce qui rend difficile l’utilisation de ces composés pour moduler les voies génétiques.Les progrès de la culture tissulaire in vitro ont permis aux scientifiques d’isoler ces tissus et d’éliminer bon nombre de ces barrières susmentionnées. Notre protocole est avantageux en ce sens qu’il nous permet d’étudier l’œil dans son ensemble, y compris tous les tissus qui ont le potentiel d’interagir au cours du développement, tels que la rétine neurale et l’épithélium pigmenté rétinien. Commencez par autoclaver les matériaux pour vous assurer que toutes les solutions et tous les équipements sont stériles avant la procédure.Pour ce faire, autoclavez deux litres d’eau distillée et un

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Nous décrivons ici des protocoles pour trois types de cultures d’explants de peau embryonnaire aviaire qui peuvent être utilisés pour examiner les interactions tissulaires, le film timelapse d’imagerie 4D (3D plus temps), la perturbation globale ou locale de la fonction moléculaire et la caractérisation de la biologie des systèmes.

Utilisation d’explants de peau aviaire pour étudier la structuration et l’organogenèse des tissus

Ici, nous présentons un protocole pour greffer des organoïdes cérébraux humains à plusieurs stades de maturation dans la membrane chorioallantoïdienne (CAM) du poulet. Les organoïdes cérébraux ont été cultivés selon des protocoles standardisés non guidés.

Modélisation précoce non guidée de la niche neurovasculaire organoïde du cerveau humain dans la membrane chorioallantoïde permissive de l’embryon de poussin

Apprenez la culture organotypique pour étudier le développement des yeux embryonnaires de poulet. Cette méthode permet d'observer les interactions entre la rétine neurale et l'épithélium pigmentaire rétinien sans effets létaux des composés.

Méthode de Culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet

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