Haute résolution comparaison des fréquences de la conjugaison bactérienne

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la microbiologie sur la fréquence à quelle fréquence l’ADN plasmide peut se propager parmi différentes bactéries. Le principal avantage de cette technique est qu’en réduisant l’arrière-plan, nous pouvons détecter de petites différences dans la fréquence de conjugaison avec une haute résolution. Kosuke Yanagiya, un étudiant diplômé de mon laboratoire, démontrera la procédure.

Pour calculer la fréquence de conjugaison par le nombre le plus probable, filtrez le compagnon d’un millilitre d’une culture de donneur de nuit avec un millilitre d’une culture de destinataire de nuit pendant 45 minutes à 30 degrés Celsius, comme juste démontré. Pendant que la co-culture est en incubation, diluer en série les cultures originales du donneur et du receveur pour le placage en triplicate sur le bouillon luria donneur, ou LB, plus la kanamycine, ou le receveur LB plus plaques de gentamycine pour une culture de deux jours à 30 degrés Celsius. À la fin de l’incubation, resuspendez la culture sur le filtre dans le LB stérile contenant la kanamycine et la gentamycine pour la dilution périodique dans une plaque de culture cellulaire de 96 puits dans le quadruplicate.