Fréquente la queue-extrémité prélèvements chez les souris pour l’évaluation de la sécrétion de l’Hormone lutéinisante Pulsatile

L’objectif global des prélèvements sanguins fréquents à l’extrémité de la queue est d’obtenir des échantillons de sang total pour la mesure de la sécrétion d’hormone lutéinisante pulsatile appelée LH chez les souris éveillées, non anesthétisées et au comportement normal. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neuroendochrinologie reproductrice en fournissant un protocole fiable pour évaluer la sécrétion pulsatile d’hormone lutéinisante chez la souris. Le principal avantage de cette technique est qu’une manipulation et une accoutumance fréquentes garantiront des mesures d’impulsion d’hormone lutéinisante robustes et fiables après des traitements expérimentaux aigus ou chroniques.

Pendant les cinq semaines précédant le prélèvement sanguin, manipulez les souris tous les jours du lundi au vendredi. Au cours des deux dernières semaines, manipulez également les souris le samedi et le dimanche. Effectuez le régime de manipulation des souris dans une enceinte de biosécurité.

Sortez la première souris de sa cage et placez-la sur une surface appropriée à l’intérieur de l’armoire. Retenez doucement la souris sur cette surface en tenant la base de sa queue. Ensuite, avec l’autre main, caressez fermement la surface ventrale de la queue de la base à la pointe.

Faites cela six fois au total, puis remettez la souris dans sa cage. Il s’agit d’un kit de manipulation. Attendez maintenant six minutes et effectuez une autre série de manipulations.

En continuant ce schéma avec des intervalles entre les ensembles, effectuez quatre séries de manipulation par session de manipulation. Au total, cela donne vingt-quatre coups de queue par session. Si les traitements expérimentaux pendant la période d’échantillonnage incluent des méthodes de manipulation supplémentaires telles que l’égratignage ou une injection intrapéritonéale, acclimatez également les souris à une telle activité de manipulation pendant les séances de manipulation.

Deux semaines avant le jour prévu de la collecte de sang, logez les souris par paires afin de minimiser leur perturbation pendant la période d’échantillonnage. Pour les collectes de sang, préparez des microtubes à centrifuger de 0,6 millilitre pour le stockage du sang. Étiquetez les tubes et, pour les prélèvements sanguins de trois microlitres, aliquote cinquante-sept microlitres de tampon ACES dans chaque tube.

Une fois préparés, stockez les tubes à quatre degrés Celsius. À l’armoire de biosécurité, préparez les articles suivants : des pointes de pipette, une poubelle, une minuterie, un journal d’expérience, un seau à glace contenant les tubes de prélèvement de sang, des ciseaux tranchants et stériles, un marqueur permanent et une petite gaze. Quarante-cinq minutes avant de commencer la collecte de sang, sortez la première souris de sa cage et placez-la sur une surface adaptée.

Marquez ensuite la queue pour identifier rapidement cette souris de son partenaire en cage. Utilisez maintenant des ciseaux pour retirer un à deux millimètres du bout de la queue. Après avoir coupé cette queue, caressez soigneusement la queue jusqu’à ce qu’une gouttelette de sang se forme à l’extrémité.

Ensuite, récupérez trois microlitres de sang et jetez le sang et la pointe dans la poubelle. Ensuite, assurez-vous que le flux sanguin s’est arrêté. Si nécessaire, appliquez une légère pression avec de la gaze stérile.

Remettez ensuite la souris dans sa cage pendant six minutes. Maintenant, à des intervalles de six minutes sur quarante-cinq minutes, caressez fermement la queue pour prélever des échantillons de sang supplémentaires sur la souris. Si aucune gouttelette de sang ne se forme, tamponnez la queue avec un tampon de gaze imbibé de solution saline pour aider à éliminer le caillot sanguin.

Pendant la période de pré-échantillonnage, jeter toutes les aliquotes de sang. Après quarante-cinq minutes, commencez la période d’échantillonnage. Lors du prélèvement d’échantillons, transférez trois microlitres de sang dans un tube de prélèvement, mélangez le tube par inversion et remettez-le sur de la glace.

Procédez maintenant à l’échantillonnage aussi longtemps que nécessaire. Une fois terminés, euthanasiez les souris ou assurez-vous que le flux sanguin de leur queue s’est complètement arrêté, puis fournissez aux souris une cage propre. Ensuite, transférez les échantillons de sang dans une boîte de stockage et stockez-les à moins vingt degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils puissent être analysés.

L’hormone lutéinisante ou LH a été mesurée dans des échantillons de sang fréquents afin de déterminer la réponse à un défi de stress psychosocial aigu. Six souris femelles adultes C57 noires ont été ovariectomisées et des échantillons de sang ont été prélevés pendant quatre-vingt-dix minutes pour établir une base de référence de sécrétion pulsatile de LH avant le traitement. Pour le traitement du stress, pendant les quatre-vingt-dix minutes d’échantillonnage, les animaux de laboratoire ont été placés dans des dispositifs de contention des rongeurs et déplacés dans une nouvelle cage, tandis que les témoins sont restés dans leurs cages d’origine et n’ont pas été retenus.

L’analyse a montré que les animaux témoins avaient des impulsions LH claires et non ambiguës tout au long de la période d’échantillonnage. En revanche, le stress psychosocial de la contention a rapidement et sans ambiguïté supprimé la sécrétion pulsatile de LH dans le groupe expérimental. Lorsque vous vous préparez à utiliser cette technique, il est important de se rappeler de minimiser les perturbations environnementales telles que le bruit ou les interruptions par d’autres chercheurs qui pourraient stresser les souris et interrompre la sécrétion pulsatile de LH

Depuis sa mise au point par le Dr Stein et d’autres membres du laboratoire Chen, cette technique a commencé à ouvrir la voie aux chercheurs dans le domaine de la neuroendocrinologie pour explorer la régulation du pouls LH chez une espèce où des outils moléculaires et génétiques complexes sont pratiques et disponibles.