Spectrométrie de masse de pulvérisation foliaire : Une Technique d’ionisation ambiant rapide pour évaluer directement les métabolites de tissus végétaux

La pulvérisation de feuilles MS est une méthode rapide d’analyse qualitative et semi-quantitative de tissus végétaux intacts qui a une grande variété d’applications. Le principal avantage de cette technique est que les tissus végétaux peuvent être analysés directement sans pratiquement aucune préparation d’échantillon. Bien que cette méthode fournisse de bonnes informations sur les alcaloïdes de mésembrine du sceletium, elle peut également être utilisée pour l’analyse de diverses autres espèces végétales et de produits chimiques exogènes tels que les pesticides.

Les personnes qui ne connaissent pas cette méthode peuvent la trouver difficile car il est nécessaire d’optimiser le protocole pour chaque espèce végétale, type de tissu et composé d’intérêt. Utilisez une source de nanopulvérisation modifiée pour la pulvérisation des feuilles MS.As aucun composant fluidique n’est nécessaire pour la pulvérisation des feuilles MS, modifiez la source en retirant la sonde de chromatographie liquide de la source. Le fil de spectrométrie de masse par pulvérisation de feuilles qui appliquera une tension au tissu végétal a une broche qui a été soudée au fil à une extrémité et une pince qui a été soudée à l’autre extrémité.

Si le système a été utilisé récemment, laissez-le refroidir au toucher avant de retirer toute source alternative dans le cône de balayage. Fixez ensuite la source de pulvérisation de feuilles nano MS. Enfin, créez un fichier de mélodie et un fichier de méthode comme décrit dans le protocole texte.

Portez toujours des gants et n’utilisez pas de tissus végétaux qui ont été manipulés à mains nues. Sinon, les ions contaminants tels que le polyéthylène glycol domineront les spectres. Apportez les tissus végétaux pour l’analyse dans la même pièce que le système de spectrométrie de masse pour permettre un échantillonnage rapide.

Pour les tissus végétaux qui n’ont pas une pointe naturellement pointue, utilisez une lame de rasoir sur une lame de verre pour couper une pointe effilée. Coupez les feuilles de Sceletium tortuosum 10 semaines après la germination en fines lamelles, chacune avec une extrémité effilée pour former une pointe. À l’aide d’une pince, sélectionnez délicatement le tissu végétal à l’extrémité qui sera serré.

En tenant le tissu avec une pince, transférez-le soigneusement dans la pince. Ajustez le bras flexible et le fil avec la pince pour positionner le tissu dans l’alignement de l’entrée MS. Reportez-vous au texte pour connaître la distance optimale de l’entrée d’ions pour chaque spectromètre de masse spécifique.

Si les premières tentatives produisent une faible intensité de signal, le tissu végétal peut être rapproché de l’entrée ionique. Chargez le fichier de méthode. Nommez le fichier de données et définissez l’emplacement de stockage du fichier.

Allumez ensuite le système MS en cliquant sur play et cliquez sur démarrer pour commencer à acquérir des données. Appliquez un solvant à l’aide d’une pipette avec une pointe de chargement de gel pour maximiser la distance entre la haute tension et les mains de l’utilisateur pour la protection. Acquérez des données tant que le signal persiste ou jusqu’à ce que les spectres adéquats aient été collectés, généralement de 30 à 60 secondes.

Arrêtez l’acquisition de données et mettez le système MS en pause. Après l’acquisition, retirez le mouchoir et lavez la pince avec du méthanol à 100 % dans une lingette non pelucheuse. Ouvrez le fichier de données et inspectez visuellement le chronogramme de masse maximale de base.

Vérifiez que l’intensité du signal est d’environ 10 à 500 millions. Créez un nouveau fichier de méthode avec une liste d’inclusion de M sur Z à quatre décimales. Cliquez sur listes globales et inclusion.

Sous Propriétés de PRM, sélectionnez l’énergie de fragmentation et d’autres paramètres MS en tandem. Pour obtenir les données MS en tandem pour les alcaloïdes de mésembrine, fragmentez les ions à 276,1583 M sur Z, 290,1742 M sur Z et 292,1897 M sur Z à une énergie de collision normalisée de 35. Ensuite, chargez le fichier de méthode MS en tandem et un fichier de données nommé.

Allumez le système MS et commencez à recueillir des données en ajoutant un solvant si nécessaire. Lorsque des spectres adéquats ont été collectés, généralement après 30 à 60 secondes, arrêtez l’acquisition. Effectuez l’analyse des données comme décrit dans le protocole texte.

Les résultats représentatifs du profilage métabolique de Sceletium tortuosum par pulvérisation de feuilles et ionisation positive sont présentés avec l’encart affichant 260 à 295 M sur Z.In cette étude, un total de neuf alcaloïdes de mésembrine ont été détectés par pulvérisation de feuilles MS et des identifications puditives ont été effectuées. Le chronogramme de masse du nombre total d’ions de pulvérisation de feuilles MS représente une expérience réussie de pulvérisation de feuilles MS où un signal stable a été maintenu pendant toute la durée de l’acquisition. Pour chaque pic, le chiffre du haut est le temps en minutes et le chiffre du bas est le M sur Z. Les spectres de masse en tandem ont été collectés par ionisation positive à partir d’une feuille coupée de Sceletium tortuosum avec pulvérisation de feuilles MS. Des identifications puditives des alcaloïdes ont été faites à partir d’une masse précise et d’une fragmentation de masse pour les isomères M de la mésembrine et de la mésembrénone M, la mésembrine et la mésembrine M dihydro.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’utiliser la pulvérisation de feuilles MS pour détecter les métabolites des plantes. La pulvérisation de feuilles MS a été utilisée pour détecter les composés endogènes ainsi que les composés exogènes tels que les pesticides.