Name: Un dosage de Gradient de température pour déterminer les préférences thermiques de larves de drosophile (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Découvrez un dosage de gradient thermique continu pour déterminer les préférences de température des larves de Drosophila melanogaster. Cette méthode robuste permet d'évaluer la somesthésie et les comportements thermiques en neurosciences.

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<ol><li>Fowler, M. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+TRP+channels+and+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila TRP channels and animal behavior.</a> Life Sci. 92, 394-403 (2013).</li>
<li>Palkar, R., Lippoldt, E. K., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of thermosensation in mammals.</a> Curr Opin Neurobiol. 34, 14-19 (2015).</li>
<li>Vriens, J., Nilius, B., Voets, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Peripheral thermosensation in mammals.</a> Nat Rev Neurosci. 15 (9), 573-589 (2014).</li>
<li>Rosenzweig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+ortholog+of+vertebrate+TRPA1+regulates+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The Drosophila ortholog of vertebrate TRPA1 regulates thermotaxis.</a> Genes Dev. 19, 419-424 (2005).</li>
<li>Kwon, Y., Shim, H. S., Wang, X., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+thermotactic+behavior+via+coupling+of+a+TRP+channel+to+a+phospholipase+C+signaling+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Control of thermotactic behavior via coupling of a TRP channel to a phospholipase C signaling cascade.</a> Nat Neurosci. 11, 871-873 (2008).</li>
<li>Kwon, Y., Shen, W. L., Shim, H. S., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+thermotactic+discrimination+between+the+optimal+and+slightly+cooler+temperatures+via+a+TRPV+channel+in+chordotonal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fine thermotactic discrimination between the optimal and slightly cooler temperatures via a TRPV channel in chordotonal neurons.</a> J Neurosci. 30 (31), 10465-10471 (2010).</li>
<li>Shen, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+rhodopsin+in+temperature+discrimination+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Function of rhodopsin in temperature discrimination in Drosophila.</a> Science. 331 (6022), 1333-1336 (2011).</li>
<li>Sokabe, T., Chen, H. S., Luo, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+switch+in+thermal+preference+in+Drosophila+larvae+depends+on+multiple+rhodopsins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A switch in thermal preference in Drosophila larvae depends on multiple rhodopsins.</a> Cell Rep. 17, 336-344 (2016).</li>
<li>Ni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ionotropic+Receptors+IR21a+and+IR25a+mediate+cool+sensing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">The Ionotropic Receptors IR21a and IR25a mediate cool sensing in Drosophila.</a> Elife. 5, 13254(2016).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigational+decision+making+in+Drosophila+thermotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Navigational decision making in Drosophila thermotaxis.</a> J Neurosci. 30 (12), 4261-4272 (2010).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+a+laboratory+handbook%22">Drosophila: a laboratory handbook</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2005).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Pour assurer le succès de ce protocole, il est important de prendre des mesures pour obtenir un nombre suffisant de larves à réaliser les expériences. Il s’agit d’alimentation avant les mouches en flacons pâte contenant de la levure pendant 2-3 jours afin d’améliorer la ponte. Les flacons doivent être placés dans un bac contenant des flacons d’eau et enfermé dans un sac en plastique transparent, qui maintient l’humidité de l’aliment et favorise les efficaces les larves tout en permettant une exposition à des cycles norma...

Thermotactisme est employé par des animaux mobiles pour sélectionner un environnement le plus favorable des conditions1,2,3. Si le climat est trop chaud ou froid, ce comportement est vital pour la survie. En outre, beaucoup d’animaux est sensibles aux très petites différences de température dans la gamme confortable et cherche un cadre avec une température idéale. Ceci est particulièrement important pour les organismes poïkilothermes tels que les mouches des fruits, qui équilibrer la température de leur corps avec l’environnement. Dosages pour surveiller les larve thermotactisme ont contribué à identifier et à clarifier les rôles de capteurs moléculaires comme Drosophila transitoire récepteurs potentiels (TRP) canaux4,5,6, rhodopsines7,8et ionotropiques récepteurs récepteurs (IRs)9, qui empreignent ces animaux avec des sensibilités de température sur différentes plages de températures.
Un test bilatéral choix fournit une approche pour étudier les préférences thermiques en larves6,7. Le test implique l’établissement de deux zones de températures distinctes et permet les animaux sélectionner un côté sur l’autre. Les résultats de tests à choix bidirectionnelle peuvent être robustes, surtout si les différences de température entre les deux options sont grandes. En outre, puisque chaque essai implique tabulating seulement deux groupes, les données peuvent être exprimées comme un indice simple de préférence. La facilité et la simplicité des tests de choix bidirectionnelle se prêtent également aux écrans de génétiques. Toutefois, une limitation majeure est que beaucoup d’expériences est tenus d’établir la température préférée des animaux sauvage ou mutants.
Un test de gradient offre la possibilité d’établir la température préférée en un seul essai8. De plus, contrairement à l’épreuve de choix bidirectionnelle, il permet l’évaluation de la distribution d’un groupe d’animaux, lorsqu’ils sont confrontés avec une gamme continue de températures. Un dosage dégradé utilise une boîte de Pétri et animaux et est bien adapté pour caractériser le comportement détaillé de chaque animal10. Toutefois, étant donné que les boîtes de Pétri sont ronds, les tailles des zones thermiques varient et sont progressivement plus petites selon la distance du centre. Par conséquent, cette configuration n’est pas idéale pour surveiller les sélections de température des populations d’animaux.
Un appareil de gradient thermique continu bien adaptée pour évaluer les préférences de température des groupes de larves emploie une arène rectangulaire et est décrite ici. L’appareil est simple à construire et à assembler. En outre, le gradient est linéaire et est flexible, car il peut être utilisé pour évaluer la thermotactisme plus grande température varie de 10 ° C à 42 ° C. Le test est rapide et simple à réaliser et donne des données reproductibles. En plus de signaler la température favorable des larves, il révèle les préférences de la population d’animaux sur un ensemble linéaire dans une expérience simple. En raison de ces avantages, c’est un excellent choix pour l’identification des gènes nécessaires à thermotactisme.

<table><tbody><tr><td>Appareil de dosage à gradient</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PolyScience 9106, Bain de circulation réfrigéré/chauffé 6L</td><td>Thomas Scientific</td><td>9106</td><td>Ce modèle n’est plus fabriqué. Les modèles de remplacement mis à jour incluent : 1186R00 et 1197U04 pour 120 V, 60 Hz, ou 1184L08 et 1197U04 pour 240 V, 50 Hz.</td></tr><tr><td>Plaque de dosage en aluminium (pour gradient unidirectionnel)</td><td></td><td></td><td>Taille extérieure : 14 x 10,1 x 0,9 cm, taille intérieure : 12,9 x 8,7 x 0,8 cm, anodisée noire.</td></tr><tr><td>Plaque en aluminium (pour gradient bidirectionnel)</td><td></td><td></td><td>25 x 22 x 0,2 cm, anodisée noire.</td></tr><tr>Bloc <td></td><td></td><td>d’aluminium Dimensions extérieures : 25,5 x 5 x 1,4 cm, les paramètres des canaux intérieurs sont illustrés à la figure 1D.</td><td></td></tr><tr><td>Connecteur pour blocs et tubes en aluminium</td><td>McMaster-Carr</td><td>91355K82</td><td></td></tr><tr><td>Tubes sanitaires en silicone Tygon</td><td>Tygon</td><td>57296</td><td>1/4 » ID x 3/8 » OD x 1/16 » mur</td></tr><tr><td>Nom</strong</td><td>>Entreprise<</td><td>>Numéro de catalogue</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Items et réactifs pour </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pestle</td><td>USA Scientific</td><td>17361</td><td>Pilon pour tubes de microcentrifugation de 1,5 mL</td></tr><tr><td>Thermomètre</td><td>Fluke</td><td>51II</td><td></td></tr><tr><td>Thermocouple</td><td>Fluke</td><td>K type</td><td></td></tr><tr><td>Couvercle universel pour microplaques</td><td>Corning</td><td>6980A77</td><td></td></tr><tr><td>Plat de 35 mm</td><td>Corning</td><td>9380D40</td><td></td></tr><tr><td>Ruban d’étiquetage (pour gradient bidirectionnel)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-951</td><td>Ruban d’étiquetage Fisherbrand 2 po x 14 yds</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>Préparer une solution à 1 %</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma</td><td>S0389-5KG</td><td>Préparer une solution à 18 % juste avant de commencer le test</td></tr><tr><td>Pinceau Fisher</td><td>Scientific</td><td>11860</td><td></td></tr><tr><td>Tubes</td> <td>à centrifuger de 50 mLDenville</td><td>C1062-P</td><td></td></tr><tr><td>Scoopula</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td></td></tr><tr><td>500 mL Flacon rond à col large</td><td>Pyrex</td><td>1395-500</td><td></td></tr><tr><td>Passoire à cellules (pore de 300 mm)</td><td>PluriSelect</td><td>43-50300</td><td>Optionnel pour le lavage des larves</td></tr><tr><td>Boîte en carton (plateau de flacons)</td><td>Genesee Scientific</td><td>FS32-124</td><td></td></tr><tr><td>Nom</td><td>Company</td><td>Numéro de catalogue</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Drosophila food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eau</td><td></td><td></td> distillée <td>22 400 mL</td></tr><tr><td>Semoule de maïs, jaune (à mailles extra fines, floquée) 20 kg</td><td>LabScientific Inc.</td><td>NC0535320</td><td>1 609 g</td></tr><tr><td>de levure de bière 100 lb</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN90331280</td><td>379 g</td></tr><tr><td>NutriSoy® ; Farine de soja (10 kg/unité)</td><td>Genesee Scientific</td><td>62-115</td><td>221 g</td></tr><tr><td>Drosophila Agar, type II (5 kg)</td><td>Genesee Scientific</td><td>66-103</td><td>190 g</td></tr><tr><td>Karo sirop de maïs léger</td><td>Karo</td><td></td><td>1 700 mL</td></tr><tr><td>4-hydroxybenzoate de méthyle (en suspension dans de l’éthanol à 200 degrés)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H5501-5KG</td><td>72 g/240 mL</td></tr><tr><td>Purée d’acide propionique. p.a.,>99,5 % (GC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81910-1 L</td><td>108 mL</td></tr><tr><td>Acide phosphorique&nbsp ; réactif ACS, &ge ; 85 % en poids dans H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>438081-500 mL</td><td>8,5 mL</td></tr></tbody></table>

un dosage de gradient de température pour déterminer les préférences thermiques de larves de drosophile

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Beaucoup d’animaux, y compris la drosophile, Drosophila melanogaster, est capables de discriminant les plus infimes différences dans la température ambiante, ce qui leur permet de tenter de découvrir leur paysage thermique préféré. Pour définir les préférences de température des larves sur une plage linéaire définie, nous avons développé une méthode utilisant un gradient de température. Pour établir un gradient directionnel unique, deux blocs d’aluminium sont connectés à des bains d’eau indépendants, dont chacun contrôle la température des blocs individuels. Les deux blocs défini les limites inférieures et supérieures du dégradé. Le gradient de température est établi en plaçant une plaque en aluminium enduit de gel d’agarose sur les deux blocs d’eau contrôlé afin que la plaque couvre la distance entre eux. Les extrémités de la plaque d’aluminium qui est définie sur le dessus des blocs d’eau définit les températures minimales et maximales, et les régions entre les deux blocs forment un dégradé linéaire de la température. Le test de gradient peut être appliqué à des larves de différents âges et peut être utilisé pour identifier des mutants qui présentent des phénotypes, comme ceux présentant des mutations affectant les gènes codant pour des canaux TRP et opsines, qui sont nécessaires pour la discrimination de température.

Afin d’établir une unique bidirectionnel de 18 ° C à 28 ° C dégradé, nous avons mis les températures des deux bains d’eau de 16,8 ° C et 31 ° C. On obtient les températures à 13 points en mesurant la température à 26 postes dans les parties supérieures et inférieures de 6 toutes les zones, les lignes de frontière entre les zones et les extrémités de la surface du gel d’agarose (Figure 2, 2E). La distribution de la température le long du gradi...

Nous présentons ici un protocole pour déterminer la température environnementale préférée des larves de drosophile à l’aide d’un gradient thermique continu.

Un dosage de Gradient de température pour déterminer les préférences thermiques de larves de drosophile

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

Cette méthode peut être utilisée pour répondre à une question clé dans le domaine de la somatosensation, le mécanisme par lequel un animal, comme la drosophila melanogaster, sélectionne sa température environnementale préférée. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet d’établir la température préférée du groupe de larves en un seul essai lorsqu’elle est confrontée à une gamme continue de températures. En plus de donner un aperçu des préférences de température des larves de drosophile, la plaque impress peut également être adaptée pour être utilisée avec d’autres organismes modèles tels que le ver C elegans.Tout d’abord, faites de la pâte de levure pour préparer des flacons pour un croisement. Mélangez des granulés de levure dans de l’eau distillée et broyez-les en une pâte avec un pilon. Ensuite, ajoutez une noisette de pâte de levure près des parois internes des flacons de drosophile standard juste au-dessus de la surface de l’aliment.Pour produire les larves, prélevez 12 à 35 femelles et jusqu’à la moitié du nombre de mâles, mais pas plus de 10 mâles. Combinez ces groupes dans le flacon contenant de la pâte de levure. Chargez les flacons préparés dans un platea

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Dans cet article, nous démontrons essais pour étudier la nociception...

Méthodes locales et globales de l&#39;évaluation de nociception thermique dans<em&gt; Drosophila</em&gt; Les larves

Cette vidéo décrit le test de préférence gustative, une méthode comportementale utilisée pour mesurer l'attraction ou l'évitement envers les solutions colorées qui ont un goût différent en évaluant la coloration abdominale de la mouche après l'ingestion de la substance préférée. Le protocole présenté illustre la procédure utilisée pour mesurer la préférence des mouches pour les solutions de concentrations variables en saccharose.

Dosage de la préférence gustative : une méthode pour mesurer le comportement alimentaire chez la drosophile

Les larves de drosophile ont des neurones sensoriels dédiés – les nocicepteurs – dont la réponse à des stimuli thermiques potentiellement nocifs déclenche des comportements aversifs – ou dits « nocifensifs » chez l’animal. Cette vidéo décrit une méthode d’évaluation de la nociception thermique en enregistrant le comportement larvaire en réponse à l’application locale d’une sonde de chaleur sur la cuticule. Cette méthode est donc appelée dosage par sonde thermique locale.

Dosage local par sonde thermique : une méthode pour évaluer la nociception des températures élevées chez les larves de drosophile

Les mouches des fruits de la drosophile peuvent distinguer de petits changements de température et donc sélectionner des environnements avec des conditions thermiques favorables. Cette vidéo décrit un test comportemental qui teste la préférence de température des larves de drosophile sur un gradient thermique linéaire.

Essai de gradient de température : une méthode pour tester la préférence de température chez les larves de drosophile

Nous avons récemment identifié une nouvelle drosophile circadienne, le rythme de préférence de température (TPR), dans lequel la température préférée chez les mouches augmente pendant la journée et tombe pendant la nuit. TPR est régulé indépendamment d’une autre sortie circadienne, l’activité locomoteur. Nous décrivons ici la conception et l’analyse de TPR chez la drosophile.

Conception et analyse du comportement de préférence de température et de son rythme circadien chez la drosophile

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Mesure de larves activité dans le<em&gt; Drosophila</em&gt; Moniteur d&#39;activité

Ici , nous démontrons un essai de roman pour étudier nociception froid chez les larves de drosophile. Ce test utilise une sonde à effet Peltier sur mesure intégrée capable d'appliquer un stimulus froid délétère focale et se traduit par des comportements quantifiables à froid spécifiques. Cette technique permettra en outre la dissection moléculaire et cellulaire de nociception froid.

Nouveau test pour froid dans nociception<em&gt; drosophile</em&gt; larves

Nous présentons ici un protocole pour déterminer automatiquement la performance locomotrice de la drosophile aux changements de température à l’aide d’une arène programmable à température contrôlée qui produit des changements de température rapide et précis dans le temps et l’espace.

Une méthode automatisée pour déterminer la Performance de la drosophile en réponse aux changements de température dans l’espace et le temps

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Détermination de la préférence de température des moustiques et autres ectothermes

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