Name: Une nouvelle Technique chirurgicale comme fondement pour In Vivo partielle génie hépatique chez le Rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 27 s
Description: Apprenez une technique chirurgicale novatrice pour la perfusion in vivo d'un lobe hépatique chez le rat. Cette méthode permet d'étudier l'ingénierie hépatique partielle avec survie à long terme.

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Les auteurs tiennent à remercier Jens Geiling de l’Institut d’anatomie I, hôpital universitaire de Jena, pour produire des schémas d’anatomie de foie de rat.

Le boîtier et toutes les procédures effectuées ont été conformément à la législation allemande de bien-être animal. Tous les instruments chirurgicaux, gaze et vêtements couvrant sont stérilisés à l’autoclave et préparé avant l’opération. Toutes les procédures sont effectuées dans des conditions stériles.
1. préparation du Rat pour l’intervention chirurgicale
<ol><li>Placez le rat dans une chambre à induction et anesthésier le rat avec l’isoflurane 4 % vaporisé et 100 % d’oxygène de 0,5 L/min pendant environ 3 min, jusqu'à ce que le rat est complètement anesthésié.</li>
	<li>Prenez le rat dans la chambre de l’induction et mesurer sa masse corporelle.</li>
	<li>Raser la fourrure de la région chirurgicale sur l’abdomen.</li>
	<li>Remettre les animaux dans la chambre de l’isoflurane pour un 2 min supplémentaire approfondir anesthésie.</li>
	<li>Placez le rat sur la table d’opération en décubitus dorsal.</li>
	<li>Fixer le masque d’anesthésie à la région de la bouche du rat et de garder l’animal anesthésié avec un débit de gaz en continu de 2 % vaporisé isoflurane et 100 % d’oxygène à un débit de 0,5 L/min.</li>
	<li>Fixer les branches avec des morceaux de ruban adhésif.</li>
	<li>Pommade de vétérinaire sur les deux yeux pour prévenir le dessèchement.</li>
	<li>Administrer la buprénorphine 0,05 mg/kg par voie sous-cutanée, à soulager la douleur au cours de la période d’exploitation.</li>
	<li>Désinfecter le champ opératoire de l’abdomen avec 3 tours de teinture d’iode suivie de 2 tours d’alcool à 70 %.</li>
	<li>Place stérilisés gaze autour de la zone où l’incision se fera seulement quitter le champ de l’opération de l’abdomen exposé.</li>
	<li>Procéder pour effectuer l’opération lorsque le réflexe de retrait d’orteil-pincement du rat est absent.</li>
</ol>2. laparotomie du Rat
<ol><li>Faire une incision peau et le muscle abdominale transverse à l’aide de ciseaux et un coagulateur électrique.</li>
	<li>Difficulté et tirez le processus xiphoïde vers la tête à l’aide d’une suture en polypropylène de 4-0. Remarque : Faites attention à soulever le processus xiphoïde verticalement pour mieux exposer le foie, mais procéder avec prudence pour éviter l’étouffement et restriction respiratoire sévère.</li>
	<li>Ouvrir la cavité péritonéale en tirant sur les deux côtés des parois abdominales vers la tête avec deux crochets sous-costal pour exposer le foie.</li>
	<li>Couvrir le duodénum et l’intestin grêle dans la cavité abdominale avec une gaze humide afin d’éviter le séchage.</li>
	<li>Soulevez le lobe gauche et droite médian à l’aide d’une gaze humide et de les tenir contre le thorax pour mieux exposer le hile du foie.</li>
	<li>Placez le rat sous un stéréomicroscope (grossissement X 8).</li>
	<li>Déposer quelques saline tiède dans l’abdomen et sur la surface du foie et des intestins tous plusieurs minutes, pour éviter le dessèchement pendant toute la procédure.</li>
</ol>3. création d’un Passage de Bypass dans le Lobe latéral gauche
<ol><li>Disséquer la veine gauche et il ligaturer avec une suture de soie de 6-0 à la base (Figure 2 a).</li>
	<li>Bloquer l’artère hépatique gauche, du canal biliaire gauche avec la veine médiane gauche et l’artère hépatique gauche médian médian gauche biliaires avec micro pinces afin d’éviter un écoulement du perfusat le lobe médian gauche (Figure 2 b).</li>
	<li>Séparer le lobe latéral gauche en coupant les ligaments environnants du lobe avec micro ciseaux.</li>
	<li>Bloquer la veine hépatique latérale gauche par serrage à la base du lobe latéral gauche avec micro pinces (Figure 2). Remarque : Veillez à ne pas serrer la veine gauche ainsi par erreur.</li>
	<li>Utiliser des serre-joints moustique à la ligature de la veine gauche et conserver la veine avec une tension correcte pour canulation plus tard.</li>
	<li>Avec précaution, faites une incision dans la paroi avant de la veine gauche il perforera avec un cathéter d’aiguille-logement 24-G ( Figure 3 a). Remarque : Pour créer une voie de contournement, points d’accès vasculaire sur la gauche de la veine porte et la veine hépatique gauche sont nécessaires. Pour cette étape, il est préférable de créer l’accès vasculaire en perforant les vaisseaux avec une aiguille, plutôt que de faire une incision plus large à l’aide de ciseaux. Cela réduit le risque de saignement et plus tard de la sténose.</li>
	<li>Retirer le cathéter et prendre l’aiguille sur le cathéter pour obtenir un cathéter sans aiguille 24-G.</li>
	<li>Raccorder le cathéter sur un tube de perfusion, de qui l’autre extrémité se connecte à une seringue de 20 mL à 15 mL de 40 U/mL une solution sur une pompe à perfusion héparinée.</li>
	<li>Tourner sur la pompe pour perfusant le tube pour expulser l’air du tube et le cathéter sans aiguille.</li>
	<li>Éteindre la pompe à perfusion.</li>
	<li>Encore une fois, insérer le cathéter sans aiguille dans la veine gauche via l’incision percée sur la veine (Figure 3 b). Remarque : En raison du fait, il y a très peu d’espace pour la fixation du cathéter, il n’est pas fixée à ce stade. Par conséquent, le chirurgien doit faire attention d’éviter le déplacement de la sonde canulée.</li>
	<li>Faites une autre incision à la bordure de la région exposée de la veine hépatique latérale gauche il perforera avec un cathéter d’aiguille-logement 22 - ou 24-G (Figure 3). Remarque : Il est recommandé que le cathéter à être légèrement plus petite que le navire.</li>
	<li>Retirer le cathéter et prendre l’aiguille sur le cathéter pour obtenir un cathéter sans aiguille 22-G.</li>
	<li>Tourner sur la pompe à perfusion perfuse sérum physiologique hépariné dans le lobe latéral gauche via le cathéter 24-G canulé sans aiguille de la veine gauche à un débit de 0,5 mL/min.</li>
	<li>Gaze sèche permet d’absorber les out-écoulement fluide des déchets autour de la zone d’incision de la veine hépatique latérale gauche.</li>
	<li>Cathétériser la veine hépatique latéral gauche par l’incision de perforation de la veine avec le cathéter sans aiguille 22 G, pour générer une sortie fluide pour minimiser la contamination intra-abdominale (Figure 3D). Remarque : Il est techniquement difficile de fixer la sonde canulée au lobe du foie. Par conséquent, le chirurgien doit faire attention afin d’éviter le déplacement du cathéter. Sinon, sans cathétérisme de la veine hépatique latérale gauche avec un cathéter, déchets liquides aussi peut être absorbé à la région de l’incision de la veine qu’avec une gaze sèche.</li>
	<li>Garder perfusant le lobe latéral gauche avec du sérum physiologique hépariné pendant environ 20 min (groupe 1) et ensuite seulement avec du sérum physiologique pour 2 h, 3 h ou 4 h (groupe 2, groupe 3 et groupe 4, respectivement).</li>
	<li>Arrêter la pompe pour arrêter la perfusion.</li>
</ol>4. physiologique Reperfusion du Lobe latéral gauche
<ol><li>Enlever les deux cathéters de la gauche de la veine porte et la veine hépatique latérale gauche.</li>
	<li>Refermer l’incision de la veine gauche avec une suture de polyamide 11-0.</li>
	<li>Refermer l’incision de la veine hépatique latérale gauche avec une suture de polyamide 11-0 aussi bien.</li>
	<li>Déconnectez toujours la veine hépatique latérale gauche.</li>
	<li>Déconnectez toujours la veine médiane gauche et gauche voie biliaire principale artère hépatique gauche.</li>
	<li>Couper la ligature sur la veine gauche de rouvrir la veine.</li>
</ol>5. fermeture de la paroi abdominale
<ol><li>Fermer la couche musculaire de la paroi abdominale en suturant interrompu par une suture résorbable polyglactin 910 de 4-0.</li>
	<li>Fermer la couche de la peau de la paroi abdominale en suturant interrompu par une suture résorbable polydioxanone de 4-0.</li>
	<li>Après la fermeture de l’abdomen, désinfecter l’incision de la peau avec de l’alcool 70 %.</li>
</ol>6. postopératoire traitement du Rat
<ol><li>Placez l’animal sur un coussin chauffant pour réanimation pendant environ 10 min et puis le mettre dans une nouvelle cage.</li>
	<li>Administrer la buprénorphine 0,05 mg/kg par voie sous-cutanée de 2 x par jour pour un d 3 consécutive après l’opération libérer la douleur.</li>
</ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

En bloquant et canulant la veine gauche avec un cathéter comme une admission de fluide et la veine hépatique latérale gauche avec un autre cathéter comme une sortie du fluide, nous avons généré avec succès un pontage fluide in vivo dans le lobe latéral gauche, indiquant que Bien que la technique est très difficile en raison de la petite taille des navires pour la canulation et un haut risque de provoquer des saignements, c’est faisable. Même les rats traverse une période de longue perfusion de 4 heures a survécu...

Les indications pour les transplantations sont sans cesse en expansion. En revanche, taux de don d’organe et de la qualité globale des organes sont en déclin, menant à une demande croissante pour des greffes. Le nombre de candidats ajoutés à la liste d’attente de transplantation du foie a continué d’augmenter (par exemple, aux États-Unis, 11 340 patients ont été ajoutés en 2016, contre 10 636 en 2015)1. Malgré des efforts considérables, le nombre d’organes disponibles ne satisfait pas les besoins cliniques. En raison de l’augmentation de l’incidence des maladies du foie, de nombreux patients atteints meurent de maladies du foie terminale sur la liste d’attente de greffe devant un organe du donneur devient disponible. Pour répondre à l’énorme demande pour les greffes de donneur du foie, des approches alternatives à l’aide de tissu hépatique principes d’ingénierie sont actuellement activement poursuivi2. De nos jours, une technique biologique nouvellement développée d’ingénierie du foie pourrait potentiellement surmonté cette pénurie.
Génie du foie consiste en deux étapes : la génération d’un échafaud acellulaire, suivie d’un repeuplement de l’échafaudage. Pour obtenir un échafaudage foie acellulaire biologique, le foie explanté est perfusé par le système vasculaire avec des détergents ioniques et non ioniques, qui peut enlever le matériel cellulaire du foie. Dans la plupart des études antérieures, un échafaudage de foie acellulaire biologique a été réalisé par perfusion du foie avec une combinaison de dodécyl sulfate de sodium et TritonX100. En conséquence, toutes les cellules ont été retirés, alors que la structure de la matrice extracellulaire a été maintenue. Les échafaudages de l’orgue ont été redéfinis avec cellules matures, hépatocellulaire, ainsi que des lignées de cellules endothéliales et des hépatocytes primaires avec ou sans l’application simultanée des cellules endothéliales ou les cellules souches mésenchymateuses (CSM). La plupart traitant de chercheurs ex vivo foie génie3,4,5,6,7,8,9,10, 11,12,13,14. Toutefois, dans la plupart des études précédentes, seulement de petits morceaux de cubes d’échafaudage repeuplements ont été transplantées dans sites d’implantation hétérotopique différents. Dans quelques études, échafaudages regarnis partielles ont été transplantés comme une greffe auxiliaire. Cependant, la durée maximale de survie signalés était seulement 72 h8,14. Autant que nous le savons, orthotopic transplantation d’un greffon hépatique complet repeuplements a non encore réalisée et publié sur. La fonction à long terme et la transplantation d’organes techniques sont encore à leurs balbutiements. Par conséquent, une approche alternative à l' ex vivo foie ingénierie est nécessaire.
In vivo du foie génie peut représenter une alternative à étudier hépatique repeuplement dans des conditions physiologiques. Les avantages du génie d' in vivo du foie par rapport à l' ex vivo foie ingénierie sont multiples. L' in vivo repeuplée échafaud hépatique partielle est soumise à la perfusion sanguine physiologique avec la bonne température, suffisamment d’oxygène, des nutriments et facteurs de croissance contrairement aux ex vivo perfusion avec milieu de culture artificiel. En outre, le foie normal partiel restant maintient la fonction hépatique, ce qui permet principalement de survie à long terme. Une greffe du foie implanté ex vivo engineered étant toujours incapable de supporter la survie à long terme des animaux d’expérimentation par sa fonction hépatique8, nous envisageons que in vivo partielle du foie engineeringwould au bout du compte devenir un modèle prometteur pour une étude plus approfondie l’évolution des foies machinés avec les observations de survie plus longues que les ex vivo.
Récemment, un groupe de recherche (Pan et ses collègues) a présenté, pour la première fois, une technique in vivo foie15d’ingénierie. Ils ont atteint la perfusion isolée du lobe droit inférieur du foie chez les rats vivant en dépit des défis techniques et anatomiques. Ils ont signalé les premiers résultats peropératoires de repeuplement d’in vivo à l’aide d’une lignée de cellules de primaires d’hépatocytes de rat. Toutefois, le modèle de perfusion chirurgicale en vivo de Pan et al. présente des inconvénients. Ils ont atteint perfusion simple lobe du foie chez les rats au détriment de bloquer complètement la veine porte et la veine cave inférieure, qui peut causer de graves dommages à l’animal. Les rats expérimentaux ont été sacrifiés après seulement 6 heures de temps d’observation peropératoire. Par conséquent, la technique de perfusion in vivo lobe hépatique doit être amélioration pour atteindre la survie postopératoire.
Nous avons développé un modèle de survie roman pour perfusion in vivo lobe du foie, basé sur des études antérieures de l’anatomie hépatique de rat16, la technique de canulation de veine pour la surveillance hémodynamique dans les souris17et du foie bio-ingénierie 18 , 19. les principales étapes de la procédure sont illustrées à la Figure 1 a - 1E.
Cette technique consiste à ceux qui veulent utiliser ce modèle de perfusion expérimentale in vivo pour la recherche fondamentale sur le traitement de l’orgue partielle en infusion avec des médicaments, en vivo DÉCELLULARISATION comme une résection chimique pour les maladies de l’organe (par exemple , cancer du foie), culture in vivo de cellules dans une matrice DECELLULARISE comparant ex vivo bidimensionnelles et tridimensionnelles cell culture systèmes20,21,22,23 , 24 , 25 , 26et in vivo du foie ingénierie par DÉCELLULARISATION et repeuplement.

<table><tbody><tr><td>Pompe de</td><td></td><td></td><td></td>perfusion</tr><tr><td>Perfusor VI</td><td>B. Braun, Melsungen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Catheter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Versatus-W&nbsp ; Cathéter</td><td>Terumo</td><td>SR+DU2419PX</td><td>24G, 0.74&fois ; 19mm</td></tr><tr><td>Versatus-W&nbsp ; Cathéter</td><td>Terumo</td><td>SR+DU2225PX</td><td>22G, 0.9&fois ; 25mm</td></tr><tr>micro instrument <td></td><td></td><td></td><td>chirurgical</td></tr><tr><td>micro ciseaux</td><td>F&middot ; S&middot ; L</td><td>N° 14058-09</td><td></td></tr><tr><td>micro serrefine</td><td>F&middot ; S&middot ; L</td><td>No.18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinces applicatrices</td><td>F&middot ; S&middot ; L</td><td>N° 18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro-pince droite</td><td>F&middot ; S&middot ; L</td><td>N° 00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Micro-pince incurvée</td><td>F&middot ; S&middot ; L</td><td>N° 00649-11</td><td></td></tr><tr><td>micro porte-aiguille</td><td>F&middot ; S&middot ; L</td><td>n° 12061-01</td><td></td></tr><tr>instruments <td></td><td></td><td></td><td>chirurgicaux</td></tr><tr><td>généraux sciseaux standard</td><td>F&middot ; S&middot ; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>pince anti-moustiques</td><td>F&middot ; S&middot ; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>pince dentelée</td><td>F&middot ; S&middot ; </td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pince dentée</td><td>en L F&middot ; S&middot ; </td><td></td><td></td>L</tr><tr><td>porte-aiguille</td><td>F&middot ; S&middot ; </td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suture</td><td></td><td></td><td></td></tr> en L <tr><td>4-0</td><td>éthicon</td><td></td><td></td>prolène</tr><tr><td>4-0 ETHICON*II</td><td>éthicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0</td><td>éthicon</td><td></td><td></td>de soie</tr><tr><td>11-0 polyamide</td><td>éthiconique</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

une nouvelle technique chirurgicale comme fondement pour in vivo partielle génie hépatique chez le rat

A Novel Surgical Technique As a Foundation for In Vivo Partial Liver Engineering in Rat

Génie de l’orgue est une stratégie novatrice pour générer des substituts d’orgue du foie qui peuvent potentiellement être utilisés en transplantation. Récemment, in vivo du foie ingénierie, y compris en vivo DÉCELLULARISATION orgue suivie de repeuplement, est apparue comme une approche prometteuse sur ex vivo du foie de génie. Cependant, la survie postopératoire n’a pas été atteint. Le but de cette étude est de développer une nouvelle technique chirurgicale de la perfusion lobe hépatique sélective in vivo chez le rat comme condition préalable pour l’ingénierie de in vivo du foie. Nous générons une dérivation du circuit qu’à travers le lobe latéral gauche. Ensuite, le lobe latéral gauche est perfusé avec du sérum physiologique hépariné. L’expérience est réalisée avec 4 groupes (n = 3 rats par groupe) issu des fois différentes de perfusion de 20 min, 2 h, 3 h et 4 h. survie, ainsi que le changement macroscopiquement visible de couleur et l’absence déterminée sur le plan histologique des cellules sanguines dans le espace porte et les sinusoïdes, est considérée comme un indicateur pour un établissement de modèle de réussite. Après la perfusion sélective du lobe latéral gauche, nous observons que le lobe latéral gauche, tourné en effet, du rouge au jaune pâle. Dans une évaluation histologique, aucune cellule de sang ne sont visibles dans la branche de la veine porte et la veine centrale les sinusoïdes. Le lobe latéral gauche devient rouge après avoir rouvert les navires bloqués. 12/12 rats ont survécu la procédure pendant plus d’une semaine. Nous sommes les premiers à signaler un modèle chirurgical pour in vivo de perfusion simple lobe hépatique avec une période de survie longue de plus d’une semaine. À la différence du rapport publié antérieurement, l’avantage le plus important de la technique présentée ici est que la perfusion de 70 % du foie est maintenue tout au long de la procédure dans son ensemble. La mise en place de cette technique fournit une base pour in vivo partielle génie du foie chez les rats, dont DÉCELLULARISATION et recellularization.

Douze hommes (âgés de 12 - 13 semaines) rats Lewis ont été utilisées pour évaluer l’effet de la perfusion de lobe hépatique sélective. L’expérience a été réalisée en quatre groupes (n = 3 rats par groupe). En perfusion différents périodes de 20 minutes, 2 heures, 3 heures et 4 heures, suivant les étapes décrites ci-dessus, nous avons atteint in vivo la perfusion simple lobe.
In Vivo <s...

Nous établissons une nouvelle technique chirurgicale pour un modèle de perfusion in vivo seul lobe de foie de rat comme une condition sine qua non pour étudier plus en vivo foie partielle d’ingénierie à l’avenir.

Une nouvelle Technique chirurgicale comme fondement pour In Vivo partielle génie hépatique chez le Rat

Organ engineering is a novel strategy to generate liver organ substitutes that can potentially be used in transplantation. Recently, in vivo liver ...

Au cours des dernières années, l’ingénierie hépatique est devenue un sujet d’actualité dans le monde entier en raison de son potentiel de générer des greffes de foie capables de greffe. Toutefois, la fonction viable à long terme et la transplantation d’organes artificiels sont encore une vision de l’avenir. Récemment, la profusion in vivo du lobe du foie est devenue une stratégie prometteuse pour commencer l’ingénierie hépatique.Un avantage majeur de cette technique est que l’échafaudage partiel in vivo de foie a soumis la profusion scatologique de sang. Ceci fournit à l’échafaudage la température appropriée, l’oxygène suffisant, les éléments nutritifs et les facteurs de croissance en contraste à la profusion ex vivo avec le milieu artificiel de culture. Un autre avantage est que le foie restant maintient la fonction hépatique et permet ainsi principalement la survie à long terme.Cependant, le modèle in vivo de profusion de lobe unique est techniquement difficile et la survie postopératoire n’a pas encore été réalisée. Ici, nous allons présenter un autre modèle chirurgical avec la survie à long terme comme base pour d’autres in vivo ingénierie lobe du foie unique. Avant de démontrer le modèle chirurgical, nous aimerions donner une brève introduction à l’anatomie du foie de rat.Pour établir notre modèle unique de profusion de lobe de foie nous avons choisi le lobe latéral gauche. C’est le seul lobe du foie avec un approvisionnement vasculaire distinct et le drainage permettant de créer un pontage. Il s’agit d’une reconstruction 3D du système veineux portail chez le rat.Nous nous concentrons ici sur la veine du portail gauche qui servira plus tard d’entrée fluide. Il s’agit d’une reconstruction 3D du système veineux hépatique chez le rat. Ici, nous nous concentrons sur la veine hépatique latérale gauche qui servira plus tard de sortie fluide.Cette illustration de l’anatomie vasculaire de foie accentue les points d’accès vasculaires utilisés pour dehors le modèle partiel de perfusion. Cette animation illustre le schéma de génération du modèle in vivo gauche de perfusion latérale de lobe de foie. Afin d’établir le modèle chirurgical, nous allons générer une déviation de circuit dans le lobe latéral gauche.À cette fin nous devons bloquer les vaisseaux suivants la veine gauche de portail, l’artère hépatique gauche, le canal biliaire gauche, la veine protale médiane gauche, l’artère hépatique et le conduit biliaire, et la veine hépatique latérale gauche. Ensuite, nous devons cannuler la veine du portail gauche avec un cathéter de 24 gages. Ensuite, la veine hépatique latérale gauche est cannulée à l’aide d’un cathéter de 22 gages.Ensuite, le cathéter dans la veine du portail gauche est relié à une pompe de perfusion. La gaze sèche est placée à la sortie du cathéter dans la veine hépatique latérale gauche pour absorber le liquide de déchets. De cette façon, un contournement est créé.Puis le lobe latéral gauche perfusé avec saline héparinisée à un débit de 0,5 millilitres par minute. La perfusion physiologique au lobe latéral gauche est rétablie après la réouverture des vaisseaux bloqués. Maintenant, le modèle de perfusion chirurgicale est établi.Toutes les procédures démontrées dans cette vidéo ont été évaluées et approuvées par les autorités locales. Le champ d’opération de l’abdomen est désinfecté avec trois tours de teinture d’iode suivis de deux tours de 70% d’alcool. La gaze stérile est placée sur l’abdomen, ne laissant que le champ d’opération exposé.Une incision transversale est pratiquée sur la paroi abdominale du rat. Une suture prolène 4-0 est utilisée pour fixer le processus xiphoïde et le tirer vers la tête. Les deux côtés des parois abdominales supérieures sont rétractés à l’aide de deux crochets subcoastal pour atteindre la pleine exposition de l’organe.Ensuite, nous pouvons voir les lobes du foie. Voici le lobe latéral gauche qui est utilisé pour la perfusion sélective. Nous couvrons le du duodénoum et l’intestin grêle dans la cavité abdominale avec la gaze humidifié à la sécheresse ovoïde.Nous exposons le hilum du foie en soulevant les lobes médians avec de la gaze humidifié. Le rat est placé sous un microscope stérile. Nous disséquer la veine du portail gauche.Nous avons ensuite ligate la veine protale gauche avec une suture de soie 6-0. L’artère hépatique gauche, le canal biliaire gauche, aussi bien que la veine médiane gauche de portail, l’artère hépatique médiane gauche, et le canal biliaire médian gauche sont bloqués utilisant des micro-pinces. Nous blocons la veine hépatique latérale gauche avec des micro-pinces à la base du lobe latéral gauche.Pour créer l’entrée fluide, la tige de la veine portail est perforée d’un cathéter d’habitation à aiguille de 24 gages. Mais le cathéter n’est pas inséré. Nous enlevons ensuite l’aiguille du cathéter et connectons le cathéter à une pompe à perfusion.Pour expulser l’air du tube et du cathéter, nous infusons avec de la solution saline héparinée pendant une minute. Nous éteigneons ensuite la pompe. Ensuite, le cathéter sans aiguille, qui est maintenant relié à la pompe de perfusion, est inséré dans la veine du portail gauche.De cette façon, nous minimisons les manipulations du vaisseau cannulé. Voici une région exposée de la veine hépatique latérale gauche que nous allons cannuler de la même manière. D’abord nous créons un trou de drainage dans la veine hépatique latérale gauche en la ponctuant avec un cathéter d’habitation d’aiguille de 22 gages ou de 24 gages.Nous recommandons que le cathéter soit légèrement plus petit que le navire. Nous commençons alors à parcourir le lobe latéral gauche avec saline héparinisée à un débit de 0,5 millilitres par minute. Le liquide de déchets qui coule est absorbé par la gaze.Pour minimiser la contamination intraabdominale par le liquide usé, nous réinserons le cathéter sans aiguille dans la veine hépatique latérale gauche. Ainsi, la veine hépatique latérale gauche cannulée sert de sortie fluide. Nous continuons à perfuser le lobe latéral gauche avec la solution saline héparinisée.Le liquide sanglant peut être vu dégoulinant de la sortie. La flèche indique que le lobe latéral gauche est devenu jaune pendant la perfusion avec la solution saline héparinisée. À la fin de la perfusion, les cathéters sont retirés des navires.L’ouverture de drainage sur la veine hépatique latérale gauche est fermée avec une suture pollumite simple de 11-0. L’ouverture de l’entrée sur la veine du portail gauche est fermée avec une suture pollumite 11-0 ainsi. La perfusion de re commence par le retour du cava suprahépatique de vena après avoir enlevé la pince sur la veine hépatique latérale gauche.La perfusion physiologique est encore restaurée après avoir enlevé la pince de l’artère hépatique gauche et du canal biliaire, ainsi que les structures vasculaires médianes gauches. La perfusion complète est réalisée après la réouverture de la veine du portail gauche, comme l’indique un changement de couleur en rouge foncé. Perfusion du lobe gauche plus tard.La flèche blanche de cette image indique que le lobe du foie cible a en effet été perfusé sélectivement. Ici, les flèches blanches montrent que les lobes restants, qui représentent environ 70% du foie conservé perfusion physiologique tout au long de la procédure. Re perfusion du lobe latéral gauche.Ici, la flèche rouge indique que le lobe latéral gauche est physiologiquement réinfusé après la réouverture des vaisseaux bloqués. La flèche bleue montre que le lobe médian gauche a soutenu l’ischémie. Le lobe latéral gauche sélectivement perfusé a été histologiquement examiné utilisant la coloration de H E.La figure A montre que dans le lobe latéral gauche perfusé, aucune cellule sanguine n’est détectable dans la branche de la veine portail et les sinusoïdes. Comme prévu, les globules rouges sont visibles dans la branche de l’artère hépatique. Dans la figure B, le lobe caudate inférieur sert de contrôle.Les cellules sanguines sont clairement visibles et les branches de la veine protale et de l’artère hépatique ainsi que les sinusoïdes. La figure C démontre que dans le lobe latéral gauche perfusé, il n’y a pas de cellules sanguines visibles dans la veine centrale. En revanche, la figure D démontre que dans le contrôle inférieur cellules sanguines du lobe caudate sont visibles dans la veine centrale.Nous avons atteint un taux de survie de 100% sur une semaine dans 12 procédures consécutives. Nous avons comparé notre modèle in vivo de perfusion de lobe de foie avec le modèle de Pan et des collègues. Les principales différences dans la méthodologie et les résultats entre Pan et notre groupe sont: ils ont choisi le lobe inférieur droit tandis que nous avons choisi le lobe latéral gauche comme lobe du foie cible; ils ont bloqué vena cava et veine portail principal conduisant à l’hypertension portail.En revanche, nous avons maintenu la perfusion portail de 70% du foie; ils ont sacrifié les rats interopératoirement tandis que notre taux de survie d’une semaine est de 100%Les avantages de notre nouveau modèle chirurgical sont: que c’est techniquement difficile mais faisable;et qu’il est bien toléré comme démontré par le taux de survie de 100%.. Cependant une limitation est que le lobe médian gauche a soutenu l’ischémie due au blocage de la veine de portail. Les applications potentielles de notre technique incluent : qui est peut être employée pour le traitement partiel in vivo d’organe par perfusion avec des drogues ;in-vivo la décellularisation partielle d’organe comme résection chimique ;système de culture cellulaire in vivo par rapport à l’ex-vivo;et l’ingénierie hépatique in vivo.

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