Name: Induction chirurgicale simple de perte auditive conductrice avec vérification utilisant la visualisation dotoscope et la réponse comportementale de sursaut de clap dans le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Apprenez à induire une perte auditive conductrice chez le rat par ponction chirurgicale de la membrane tympanique, avec vérification par otoscope et test comportemental de sursaut au claquement. Ce protocole standardisé permet d'étudier les troubles auditifs humains.

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Ce travail a été soutenu en partie par le Hong Kong Research Grants Council, Early Career Scheme, Project #21201217 to C. L., pour le projet Brain mapping guided electrophysiology with applications in hearing and noise pollution research. Nous remercions le Posgrado en Ciencias Biomédicas, l'Instituto de Neurobiologa de l'Universidad Nacional Autànoma de México (UNAM), le Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACyT) México pour la Bourse supérieure 578458 à FAM Manno.

La présente étude et les procédures ont été approuvées par les comités d'éthique de la recherche animale de la City University de Hong Kong, de l'Université de Hong Kong et du Département de la santé de la Région administrative spéciale de Hong Kong.
1. Animaux
<ol><li>Utiliser des rats Sprague-Dawley (SD) de deux mois (N ' 90, 200-250 g). REMARQUE : Les rongeurs ont été fournis par l'unité des animaux de laboratoire accréditée de l'Université de Hong Kong.</li>
	<li>Maintenir les rats sous une température constante de 25 oC et une humidité de 60 à 70 % à l'Unité de recherche sur les animaux de laboratoire.</li>
	<li>Les rongeurs de maison dans les cycles de lumière/obscurité de 12/12-h avec accès à la nourriture et à l'eau potable, ad libitum.</li>
	<li>Acclimater les rongeurs à l'environnement du logement pendant au moins un jour avant la chirurgie de la LCH.</li>
	<li>Ramassez le rongeur par les éraflures et anesthésiez le rongeur avec un cocktail de kétamine et de xylazine (80-100 mg/kg : 5-10 mg/kg, respectivement) par injection intrapéritone (combiner 1,0 ml de kétamine avec 0,5 ml de xylazine comme concentration finale). REMARQUE : Utilisez une seringue de 1 ml avec une aiguille de 23 à 25 G. Injecter environ 0,2 ml par 100 g de poids corporel du rat pendant 30 min d'anesthésie.</li>
	<li>Effectuer le pincement de l'orteil pour vérifier la sensation de douleur et de corroborer l'anesthésie appropriée. Une réaction à la pince profonde d'orteil (par le retrait du membre postérieur) indique l'anesthésie insuffisante.</li>
</ol>2. Configuration chirurgicale
<ol><li>Stérilisez tous les équipements dans un stérilisateur de perles de verre autoclave ou chaud avant le début de la chirurgie. Nettoyer la zone chirurgicale avec 70% d'éthanol.</li>
	<li>Utilisez des gants en latex et une blouse de laboratoire avant de commencer l'intervention.</li>
	<li>Placez un drapé chirurgical stérile sur le banc propre (Figure 1A).</li>
	<li>Stériliser les micro-ciseaux et un otoscope avant la chirurgie pour minimiser l'infection de l'oreille (Figure 1B).</li>
	<li>Placez les micro-ciseaux et l'otoscope dans la zone stérile.</li>
	<li>Placez le rongeur dans le champ chirurgical et en alignement avec le chirurgien.</li>
	<li>Procéder à l'induction chirurgicale de la LCH.</li>
</ol>3. Induction chirurgicale de la perte auditive conductrice
<ol><li>Placez la queue et la tête du rongeur alignés dans une position encline, la tête la plus proche du chirurgien.</li>
	<li>Visualisez l'oreille gauche et droite du rongeur sous otoscope pour assurer la membrane tympanique saine (Figure 2a). Évaluer l'oreille droite et gauche de chaque rongeur pour vérifier l'état de santé avant l'induction de la LCH.</li>
	<li>Prenez l'hélice de l'oreille et étendez le canal auditif externe (c.-à-d. le canal auditif, le meatus auditif externe, le canal auditif ci-temps) pour faire obscurcir l'intérieur et noircir par la profondeur. Ici, le canal auditif est rendu perpendiculaire à la surface du TM. REMARQUE : Assurez-vous que le cannel auditif est directement parallèle maintenant et que le TM forme un angle droit avec l'axe d'insertion des micro-ciseaux. Il sera visualisé comme un tube noir sans lumière. Parfois, le canal auditif doit être incliné à un léger angle, à environ 15 degrés de la surface planaire du crâne. Cela garantit que la main du chirurgien est perpendiculaire à la surface du TM.</li>
	<li>Introduire les micro-ciseaux au centre du canal auditif en prêtant attention à ne pas écrémer ou entailler le tissu du canal auditif et procéder légèrement, à environ 5 mm du centre de l'obscurité, poussant vers l'avant doucement à travers le centre de la TM. REMARQUE : La ponction TM peut être confirmée par un bruit de bruit lorsque les pointes de micro-ciseaux perforent le TM. Le bruit éclatant peut être entendu à environ 2 min 52 s dans la vidéo. Ce n'est pas un son de ciseaux; c'est un bruit de perforation TM. Comme mesuré post-analyse, le "pop" est d'environ 20 dB SPL plus grand que le son de fond tel qu'enregistré par un microphone à haute fréquence. Il n'est pas nécessaire de vérifier le son "pop" dans cette mesure, la visualisation otoscope est suffisante. L'enquêteur peut avoir besoin de s'assurer qu'un « pop » est entendu au cours de chaque procédure de l'IlL.</li>
	<li>Ouvrez immédiatement les micro-ciseaux à ressort et tournez trois fois après avoir perforé le TM pour assurer le déplacement de la tête du malleus loin du TM (seulement si le déplacement du malleus est souhaité).</li>
	<li>Retirez les micro-ciseaux et placez le rongeur sous l'otoscope pour la visualisation. REMARQUE : Il est important de noter qu'aucun saignement significatif ne devrait se produire après l'intervention chirurgicale. Euthanasier le rongeur et ne pas procéder à une évaluation comportementale en cas de saignement.</li>
	<li>Induire la LCH bilatérale en procédant comme ci-dessus dans l'oreille opposée.</li>
</ol>4. Visualisation d'otoscope
<ol><li>Confirmer une chirurgie réussie de lUNE avec un otoscope utilisant un spéculum de petit diamètre pour visualiser l'oreille moyenne de rongeur.</li>
	<li>Évaluer chaque rongeur avant et après l'intervention chirurgicale de la LCH sous l'otoscope. Assurer la confirmation de la MT normale (figure 2a) et endommagée TM après l'induction de la LCH (figure 2b).</li>
	<li>
Soins postopératoires pour le rongeur
	<ol>
<li>Placez le rongeur dans la cage de la maison sous une lampe chaude.</li>
		<li>Observez l'induction du rongeur après la LCH jusqu'à ce que le rongeur lui-même ait droit.</li>
		<li>Injectez le rongeur avec du sérum de glucose (dextrose/saline) pour retrouver conscience et placer le rongeur dans la cage domestique pour la récupération. REMARQUE : Utilisez une aiguille de 23 G mlas avec une seringue de 10 ml pour injecter 5 ml de salin après une chirurgie de la LCH.</li>
		<li>Injecter le rongeur par intramusculaire avec enréofloxacine antibactérienne 0,05 mg/kg deux fois au cours de la période de récupération de 24 h.</li>
		<li>Observez régulièrement le rongeur pour un comportement de douleur ou des symptômes après la chirurgie.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Évaluation comportementale (validation de l'induction de la LCH) - réponse de sursaut de clap
<ol><li>Corroborer CHL (après confirmation d'otoscope) 24 h post-chirurgie avec l'évaluation comportementale se composant du clap-startle-test.</li>
	<li>Placez le rat induit par la LCH à côté d'un rat normal dans deux cages adjacentes séparées.</li>
	<li>Placez les rongeurs dans une pièce silencieuse.</li>
	<li>Tenez-vous à environ 0,5 m des rongeurs et continuez à applaudir dans des durées également espacées à plusieurs reprises (5 claps ont été choisis et espacés sur 1 seconde). REMARQUE : Le sursaut de clap produit par le clap de main mesuré 40 dB SPL plus grand que le bruit de fond tel qu'enregistré par un microphone à haute fréquence.</li>
</ol>

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</ol>

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d'intérêts financier ou non financier.

Nous décrivons une induction chirurgicale simple de CHL avec la vérification utilisant la visualisation d'otoscope et la réponse comportementale de sursaut de clap dans le rat. Ici nous démontrons la méthode sur le rat et précédemment cette méthode a été appliquée aux gerbilles et aux souris. La méthode peut facilement être adoptée à d'autres rongeurs. L'induction de la LCH permet l'étude d'une forme subtile de perte auditive qui se manifeste par des altérations corticales auditives et des résultats comportementaux psych...

La prévalence de la perte auditive chez les enfants et les adultes est d'environ 19,5 %1 et 15,2 %2 respectivement. Cependant, environ 39,3 % de tous les nouveau-nés ayant subi un dépistage auditif anormal ne reçoivent pas de traitement correctif tel que rapporté par les Centers for Disease Control3. La perte auditive est une condition largement étudiée, et le rongeur est un modèle robuste pour étudier les troubles normaux liés à l'audition et l'ouïe4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Les troubles auditifs tels que la perte auditive conductrice (LCH) entraînent une augmentation de la dépression synaptique à court terme dans le cortex auditif4, ce qui entraîne des pentes psychométriques moins profondes associées aux seuils de détection de la modulation de fréquence. 5. Les modèles de perte auditive conductrice par l'ablation/déplacement chirurgical du malleus, de la ponction de membrane tympanique (TM) ou du bouchon d'oreille sont facilement employés et permettent l'induction rapide du modèle de perte auditive5,14 ,15,16,17,18. L'objectif du protocole et de la méthode actuels est de démontrer un modèle simple et reproductible de CHL chez les rongeurs.
Le protocole actuel est peu coûteux (300 $US avec tous les outils) et facilement modifiable à différentes activités de recherche. Le rat a eu des évaluations détaillées de l'anatomie de l'oreille moyenne19,20,21,22,23, approches chirurgicales24, modèles dans les médias d'otite25, 26,27 et TM rinçant la régénération16,17,18,28,29,30, ce qui en fait un modèle idéal pour étudier perte. Ici, une procédure simple d'induction de CHL est décrite avec la vérification par l'otoscope et l'évaluation comportementale avec la réponse de sursaut de clap dans le rat, qui peut alors être employée pour explorer des séquelles additionnelles de perte d'audition. La procédure de LCH est induite par la perforation chirurgicale du TM. La vérification de la procédure de l'OLC est effectuée par visualisation d'otoscope pour déterminer l'absence du TM. L'évaluation comportementale est effectuée par un niveau de pression sonore élevé de décibels (dB) (SPL) à la main. Cette méthode a été appliquée précédemment dans une variété de rongeurs. Il est facile à reproduire, produit des différences psychométriques robustes et des changements dans les réponses physiologiques neuronales4,5,16,17,18.

<table><tbody><tr><td>Gants en latex, en polyvinyle ou en nitrile</td><td>AMMEX</td><td></td><td>Utilisez des gants non poudrés 8 mil</td></tr><tr><td>Micro-ciseaux à ressort (voir Fig. 1b)</td><td>RWD Life Science</td><td>S11035-08</td><td>Longueur totale de 8,0 cm, avec tranchant de 3,5 mm, ou micro-pinces similaires. Une pince à épiler standard avec action à ressort suffira pour</td></tr><tr><td>l’Otoscope mini 3000</td><td>HEINE&nbsp ;</td><td>D-008.70.120M</td><td>L’otoscope LED standard suffira</td></tr><tr><td>Rat ou souris</td><td>JAX labs N’importe</td><td></td><td>quel petit rongeur&nbsp ;</td></tr><tr><td>Petite cage à rongeurs</td><td>Tecniplast</td><td>1284L</td><td>Besoin de deux cages pour séparer le rongeur CHL du rongeur entendant. Si les rongeurs sont en contact direct les uns avec les autres, ils se surprendront les uns les autres. Dimensions de la cage 365 x 207 x 140 mm, surface au sol : 530 cm2/82,15 po2</td></tr></tbody></table>

induction chirurgicale simple de perte auditive conductrice avec vérification utilisant la visualisation d'otoscope et la réponse comportementale de sursaut de clap dans le rat

Simple Surgical Induction of Conductive Hearing Loss with Verification Using Otoscope Visualization and Behavioral Clap Startle Response in Rat

La perte auditive conductrice (LCH) est une déficience auditive répandue chez l'homme. Le but du protocole est de décrire une procédure chirurgicale simple pour induire l'ACh chez les rongeurs. Le protocole démontre CHL par perforation de membrane tympanique. La vérification de la chirurgie de LCH était par l'examen d'otoscope et l'évaluation comportementale par la réponse de sursaut de clap, reproductible et fiable, et sont des méthodes simples pour démontrer la perte d'audition s'est produite. La procédure simple de l'EsCH est avantageuse en raison de sa reproductibilité et de sa souplesse à différentes activités de recherche sur les pertes auditives. Les limites d'induire CHL par une approche chirurgicale sont associées à la courbe d'apprentissage pour effectuer l'intervention chirurgicale et la confiance dans l'examen audiologique. Induire une déficience auditive par l'UneCH permet d'étudier facilement les manifestations neuronales et les résultats comportementaux de la perte auditive.

La procédure simple de LCH a été exécutée sur 90 rats et de ce groupe 2 a eu le saignement significatif et 2 n'a pas eu la perte d'audition le lendemain comme évalué par le sursaut comportemental de clap. Ces quatre rats ont été jetés. Les rats doivent être jetés comme décrit par les raisons dans la discussion en raison de complications. Induire la ponction tM et/ou le déplacement/déplacement de malleus (figure 2B) suscitent des manifestations comportementale...

Ici, nous présentons un protocole pour établir une induction conductrice reproductible de perte auditive par la perforation et la vérification chirurgicales de membrane tympanique par la visualisation d'otoscope et l'évaluation comportementale par le sursaut de clap.

Induction chirurgicale simple de perte auditive conductrice avec vérification utilisant la visualisation d'otoscope et la réponse comportementale de sursaut de clap dans le rat

Conductive hearing loss (CHL) is a prevalent hearing impairment in humans. The goal of the protocol is to describe a simple surgical procedure for ...

L’objectif global de cette étude est d’établir une induction fiable de perte d’audition par perforation et vérification chirurgicales de membrane tympanique par visualisation d’otoscope et évaluation comportementale par le sursursage de clap. Le but de notre pratique est de développer un modèle pour les troubles auditifs humains conductrices. Nous démontrons dans la pratique, la procédure chirurgicale conductrice de perte d’audition, qui est une simplification dans l’enlèvement de malleus, la méthode pour vérifier la perte auditive conductrice par visualisation d’otoscope, et un sursursage comportemental simple de clap, qui valident que la perte auditive conductrice s’est produite.Le principal avantage de la procédure que nous avons décrite sont les procédures non invasives, la vérification de la perte auditive conductrice par otoscope, et la validation par sursaisi clap. La présente étude et procédures ont été approuvées par le comité d’éthique de la recherche animale et l’Université municipale de Hong Kong, l’Université de Hong Kong et le Département de la santé de la Région administrative spéciale de Hong Kong. Pour le protocole actuel, nous choisissons des rats, mais vous pouvez choisir n’importe quel rongeur.Pesez les animaux pour assurer une anesthésie adéquate pour l’injection ip. Pour l’anesthésie, il est important que les animaux aient la bonne dose. Prends ton rat par le scruff.Assurez-vous de votre dose correcte de kétamine et de xylazine pour l’injection ip, et injectez. Assurez-vous d’effectuer le pincement des pieds pour vérifier aucune sensation de douleur. Pour la configuration chirurgicale se compose de votre rat anesthésié, les microscisseurs, et votre otoscope.S’il vous plaît nettoyer soigneusement la zone chirurgicale avec de l’éthanol. Placez le drapé chirurgical sur le banc nettoyé. Introduisez ensuite vos ciseaux, otoscope et rat.La taille de vos ciseaux dépendra de la taille de votre rongeur. Sous otoscope, visualiser l’oreille gauche et droite du rat pour assurer une membrane tympanique saine. Prenez l’hélice et prolongez le canal auditif externe pour devenir obscurci et noirci.Ici, vous présenterez les microscisseurs. Introduire les microscisseurs au centre du canal auditif, en prêtant une attention particulière à ne pas entailler le tissu. Écoutez le son pop, puis tordez pour assurer le déplacement du malleus.La confirmation d’une chirurgie conductrice réussie de perte d’audition, devrait être faite avec un otoscope. Évaluez chaque oreille de rat avant et après la chirurgie avec un otoscope avec un spéculum de petit diamètre. Une fois visualisées avec un otoscope, les différences entre une membrane tympanique normale et une membrane tympanique perforée devraient être étudiées.Ici, la membrane tympanique normale sur la gauche a la tête du malleus en place et est radicalement différente de la membrane tympanique perforée sur la droite. La membrane tympanique perforée, après la chirurgie conductrice de perte auditive, a le malleus déplacé et le pars tensa rompu avec l’umbo du malleus et la tête complètement manquante. Soins postopératoires pour les rongeurs.Placez le rongeur dans la cage de la maison sous une lampe chaude et injectez des agents antibactériens et du glucose. Corroborer la perte auditive conjonctive avec le sursurfait de clap comportemental. Le rat CHL est placé à côté d’un rat normal dans deux cages adjacentes.Ceux-ci sont placés dans une pièce silencieuse. Tenez-vous à un demi-mètre et applaudissez dans des durées tout aussi espacées un certain nombre de fois. Ici, nous en choisissons cinq.Ici, nos résultats comportementaux représentatifs. Notez que le rat en bas ne saute pas au son fort du clap. Le rat en haut de l’écran est surpris par ces sons de applaudissements forts.S’il vous plaît étudier l’avant et après la différence clap pour ces deux rats. Défaut d’induire une perte auditive conductrice. L’omission d’induire une perte auditive conductrice peut être causée par des saignements dans une ou les deux oreilles.Et dans ce cas, le rongeur doit être euthanasié. Cela indiquerait que les ciseaux n’ont pas pris contact avec la membrane tympanique. Un bruit sans éclat pendant la procédure.Un bruit sans éclat indiquerait que la procédure conductrice de perte auditive était pauvre et non propre. Un son sans popping signifierait que vos microscisseurs n’ont pas pris contact direct avec la membrane tympanique. Visualisation otoscope.Si, lors de la visualisation par otoscope, la membrane tympanique semble normale, cela indiquerait qu’aucun CHL ne s’est produit. Une réponse au test sonore de clap fort. Cela indiquerait qu’aucun LCH ne s’est produit et que le rongeur n’a pas de perte auditive conductrice.Cela se produirait quand un rat saute ou est surpris par un bruit de clap fort. Le principal avantage de la procédure que nous avons décrite, sont les procédures non invasives, la vérification de la perte auditive conductrice par otoscope, et la validation par sursaisi clap. Après avoir fait le pratique, vous pouvez induire une perte auditive conductrice dans un modèle de rongeur et d’explorer les manifestations comportementales et psychophysiques de ce trouble auditif.

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

L'application d'un paradigme classique conditionnement à la peur du comportement de la recherche auditive prothétique chez le rat est décrit. Ce paradigme fournit un mécanisme pour identifier à la fois la détection, et la discrimination entre, d'acoustique et distincte des stimuli électriques en utilisant la fréquence cardiaque comme mesure des résultats.

Détermination du comportement de la discrimination de la paire de stimuli acoustiques des stimuli auditifs et électrique en utilisant un conditionnement classique et de fréquence cardiaque approche

Une méthode rapide et peu coûteuse pour la détermination du comportement de l'audition des paramètres tels que les seuils d'audition, une déficience auditive ou des perceptions fantômes (acouphène subjectif) est décrite. Il utilise pré-impulsion inhibition de la réaction de sursaut acoustique et peut être facilement mis en oeuvre dans un ordinateur personnel à l'aide d'un AD programmable / convertisseur numérique-analogique et un capteur piézo-électrique.

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Cette vidéo montre la procédure d’implantation d’un dispositif cochléaire dans une souris sourde et d’application de stimuli électriques pour enregistrer les réponses auditives du tronc cérébral. Cette procédure permet de comprendre les mécanismes de base de l’audition électrique et peut contribuer aux progrès de la technologie des implants cochléaires et des neurosciences auditives.

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Différents revêtements d'électrodes affectent les performances d'enregistrement de neurones par des changements aux propriétés électrochimiques, chimiques et mécaniques. Comparaison des électrodes in vitro est relativement simple, mais la comparaison de la réponse in vivo est généralement compliquée par les variations de la distance électrode / des neurones et entre les animaux. Cet article fournit une méthode robuste de comparer les électrodes d'enregistrement de neurones.

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Induction chirurgicale simple de perte auditive conductrice avec vérification utilisant la visualisation dotoscope et la réponse comportementale de sursaut de clap dans le rat (Vidéo) | JoVE Journal

Induction chirurgicale simple de perte auditive conductrice avec vérification utilisant la visualisation d'otoscope et la réponse comportementale de sursaut de clap dans le rat

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