Name: Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Découvrez l'évaluation des voies olfactives chez les têtards de Xenopus pour la neurobiologie. Cette méthode d'imagerie in vivo permet d'étudier le traitement de l'information odorante et les réponses comportementales.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ce travail a été soutenu par des subventions de El Ministerio de Economía y Competitividad (MINECO ; SAF2015-63568-R) co-financé par le Fonds européen de développement régional (FEDER), de bourses de recherche concurrentielle de la M. G. F. Fuortes Memorial Fellowship, le Stephen W. fonds de bourses Kuffler, Laura et Arthur Colwin doué Summer Research Fellowship Fund , la bourse de Fischbach et le grand fonds de génération du laboratoire de Biologie Marine et la National Xenopus ressources RRID:SCR_013731 (Woods Hole, Massachusetts), où une partie de ce travail a été effectuée. Nous remercions également le programme CERCA / Generalitat de Catalunya d’appui institutionnel. A.L. est un camarade de Serra Húnter.

<ol><li>Hellsten, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+of+the+Western+clawed+frog+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The genome of the Western clawed frog Xenopus tropicalis.</a> Science. 328 (5978), 633-636 (2010).</li>
<li>Session, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+evolution+in+the+allotetraploid+frog+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genome evolution in the allotetraploid frog Xenopus laevis.</a> Nature. 538 (7625), 336-343 (2016).</li>
<li>Zhang, L. I., Tao, H. W., Holt, C. E., Harris, W. A., Poo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+window+for+cooperation+and+competition+among+developing+retinotectal+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A critical window for cooperation and competition among developing retinotectal synapses.</a> Nature. 395 (6697), 37-44 (1998).</li>
<li>Li, J., Erisir, A., Cline, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+time-lapse+imaging+and+serial+section+electron+microscopy+reveal+developmental+synaptic+rearrangements%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">In vivo time-lapse imaging and serial section electron microscopy reveal developmental synaptic rearrangements.</a> Neuron. 69 (2), 273-286 (2011).</li>
<li>Dietrich, H., Glasauer, S., Straka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Organization+of+Vestibulo-Ocular+Responses+in+Abducens+Motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional Organization of Vestibulo-Ocular Responses in Abducens Motoneurons.</a> Journal of Neuroscience. 37 (15), 4032-4045 (2017).</li>
<li>Buhl, E., Roberts, A., Soffe, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+a+trigeminal+sensory+nucleus+in+the+initiation+of+locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The role of a trigeminal sensory nucleus in the initiation of locomotion.</a> Journal of Physiology. 590, Pt 10 2453-2469 (2012).</li>
<li>Junek, S., Kludt, E., Wolf, F., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+coding+with+patterns+of+response+latencies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Olfactory coding with patterns of response latencies.</a> Neuron. 67 (5), 872-884 (2010).</li>
<li>Stout, R. P., Graziadei, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+the+olfactory+placode+on+the+development+of+the+brain+in+Xenopus+laevis+%28Daudin%29.+I.+Axonal+growth+and+connections+of+the+transplanted+olfactory+placode%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Influence of the olfactory placode on the development of the brain in Xenopus laevis (Daudin). I. Axonal growth and connections of the transplanted olfactory placode.</a> Neuroscience. 5 (12), 2175-2186 (1980).</li>
<li>Yoshino, J., Tochinai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+regeneration+of+the+olfactory+bulb+requires+reconnection+to+the+olfactory+nerve+in+Xenopus+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Functional regeneration of the olfactory bulb requires reconnection to the olfactory nerve in Xenopus larvae.</a> Development, Growth & Differentiation. 48 (1), 15-24 (2006).</li>
<li>Terni, B., Pacciolla, P., Masanas, H., Gorostiza, P., Llobet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+temporal+coupling+between+synaptic+rewiring+of+olfactory+glomeruli+and+the+emergence+of+odor-guided+behavior+in+Xenopus+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Tight temporal coupling between synaptic rewiring of olfactory glomeruli and the emergence of odor-guided behavior in Xenopus tadpoles.</a> Journal of Comparative Neurology. 525 (17), 3769-3783 (2017).</li>
<li>Goda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+screens+for+mutations+affecting+development+of+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic screens for mutations affecting development of Xenopus tropicalis.</a> PLOS Genetics. 2 (6), 91(2006).</li>
<li>Nakayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+efficient+CRISPR%2FCas9-mediated+targeted+mutagenesis+in+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Simple and efficient CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis in Xenopus tropicalis.</a> Genesis. 51 (12), 835-843 (2013).</li>
<li>Jafkins, A., Abu-Daya, A., Noble, A., Zimmerman, L. B., Guille, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Husbandry+of+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Husbandry of Xenopus tropicalis.</a> Methods in Molecular Biology. 917, 17-31 (2012).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="https://www.journals.uchicago.edu/doi/10.1086/393914">Early Development of Xenopus laevis. A Laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="https://searchworks.stanford.edu/view/2945881">Normal table of Xenopus laevis (Daudin). A systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. , North-Holland Publishing Company. Amsterdam. (1956).</li>
<li>Xu, H., Dude, C. M., Baker, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine-grained+fate+maps+for+the+ophthalmic+and+maxillomandibular+trigeminal+placodes+in+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fine-grained fate maps for the ophthalmic and maxillomandibular trigeminal placodes in the chick embryo.</a> Developmental Biology. 317 (1), 174-186 (2008).</li>
<li>Friedrich, R. W., Korsching, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+and+chemotopic+odorant+coding+in+the+zebrafish+olfactory+bulb+visualized+by+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Combinatorial and chemotopic odorant coding in the zebrafish olfactory bulb visualized by optical imaging.</a> Neuron. 18 (5), 737-752 (1997).</li>
<li>Ishibashi, S., Cliffe, R., Amaya, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+bi-allelic+mutation+rates+using+TALENs+in+Xenopus+tropicalis%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Open%22%5BJournal%5D)">Highly efficient bi-allelic mutation rates using TALENs in Xenopus tropicalis.</a> Biology Open. 1 (12), 1273-1276 (2012).</li>
<li>Meijering, E., Dzyubachyk, O., Smal, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+cell+and+particle+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Methods for cell and particle tracking.</a> Methods in Enzymology. 504, 183-200 (2012).</li>
<li>Nussbaum-Krammer, C. I., Neto, M. F., Brielmann, R. M., Pedersen, J. S., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+spreading+and+toxicity+of+prion-like+proteins+using+the+metazoan+model+organism+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Journalof+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Investigating the spreading and toxicity of prion-like proteins using the metazoan model organism C. elegans.</a> Journalof Visualized Experiments. (95), e52321(2015).</li>
<li>Koide, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+neural+circuitry+for+attraction+to+amino+acids+revealed+by+transposon-mediated+gene+trap+approach+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Olfactory neural circuitry for attraction to amino acids revealed by transposon-mediated gene trap approach in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (24), 9884-9889 (2009).</li>
<li>Love, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pTransgenesis%3A+a+cross-species%2C+modular+transgenesis+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">pTransgenesis: a cross-species, modular transgenesis resource.</a> Development. 138 (24), 5451-5458 (2011).</li>
<li>Tandon, P., Conlon, F., Furlow, J. D., Horb, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+genetic+toolkit+in+Xenopus%3A+Approaches+and+opportunities+for+human+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Expanding the genetic toolkit in Xenopus: Approaches and opportunities for human disease modeling.</a> Developmental Biology. 426 (2), 325-335 (2017).</li>
<li>Pratt, K. G., Khakhalin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+neurodevelopmental+disorders+in+the+Xenopus+tadpole%3A+from+mechanisms+to+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Modeling human neurodevelopmental disorders in the Xenopus tadpole: from mechanisms to therapeutic targets.</a> Disease Models & Mechanisms. 6 (5), 1057-1065 (2013).</li>
<li>Truszkowski, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+mental+retardation+protein+knockdown+in+the+developing+Xenopus+tadpole+optic+tectum+results+in+enhanced+feedforward+inhibition+and+behavioral+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Development%22%5BJournal%5D)">Fragile X mental retardation protein knockdown in the developing Xenopus tadpole optic tectum results in enhanced feedforward inhibition and behavioral deficits.</a> Neural Development. 11 (1), 14(2016).</li>
<li>Hassenklöver, T., Manzini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+wiring+logic+in+amphibians+challenges+the+basic+assumptions+of+the+unbranched+axon+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory wiring logic in amphibians challenges the basic assumptions of the unbranched axon concept.</a> Journal of Neuroscience. 33 (44), 17247-17252 (2013).</li>
<li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29 (3), 583-591 (2001).</li>
<li>Sild, M., Van Horn, M. R., Schohl, A., Jia, D., Ruthazer, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Activity-Dependent+Regulation+of+Radial+Glial+Filopodial+Motility+Is+Mediated+by+Glial+cGMP-Dependent+Protein+Kinase+1+and+Contributes+to+Synapse+Maturation+in+the+Developing+Visual+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neural Activity-Dependent Regulation of Radial Glial Filopodial Motility Is Mediated by Glial cGMP-Dependent Protein Kinase 1 and Contributes to Synapse Maturation in the Developing Visual System.</a> Journal of Neuroscience. 36 (19), 5279-5288 (2016).</li>
<li>McDiarmid, R., Altig, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcDiarmid%2C+R+%22Tadpoles%3A+The+biology+of+anuran+larvae%22">Tadpoles: The biology of anuran larvae</a>. , The University of Chicago Press. 149-169 (1999).</li>
<li>Heerema, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+molecular+analyses+of+olfaction-mediated+avoidance+responses+of+Rana+%28Lithobates%29+catesbeiana+tadpoles%3A+Sensitivity+to+thyroid+hormones%2C+estrogen%2C+and+treated+municipal+wastewater+effluent%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Behavioral and molecular analyses of olfaction-mediated avoidance responses of Rana (Lithobates) catesbeiana tadpoles: Sensitivity to thyroid hormones, estrogen, and treated municipal wastewater effluent.</a> Hormones and Behavior. 101, 85-93 (2018).</li>
<li>Gaudin, A., Gascuel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+atlas+describing+the+ontogenic+evolution+of+the+primary+olfactory+projections+in+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">3D atlas describing the ontogenic evolution of the primary olfactory projections in the olfactory bulb of Xenopus laevis.</a> Journal of Comparative Neurology. 489 (4), 403-424 (2005).</li>
<li>Scheidweiler, U., Nezlin, L., Rabba, J., Müller, B., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slice+culture+of+the+olfactory+bulb+of+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Slice culture of the olfactory bulb of Xenopus laevis tadpoles.</a> Chemical Senses. 26 (4), 399-407 (2001).</li>
<li>Manzini, I., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classes+and+narrowing+selectivity+of+olfactory+receptor+neurons+of+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Classes and narrowing selectivity of olfactory receptor neurons of Xenopus laevis tadpoles.</a> Journal of General Physiology. 123 (2), 99-107 (2004).</li>
<li>Kludt, E., Okom, C., Brinkmann, A., Schild, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+temperature+with+odor+processing+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Integrating temperature with odor processing in the olfactory bulb.</a> Journal of Neuroscience. 35 (20), 7892-7902 (2015).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Cet article décrit les techniques qui sont utiles pour étudier la fonctionnalité des voies olfactives dans vie Xenopus têtards. Le protocole actuel est particulièrement utile pour les laboratoires qui travaillent ou ont accès aux Xenopus; Toutefois, il est également intéressant pour les chercheurs qui étudient les bases cellulaires et moléculaires de la réparation et la régénération neuronale. Résultats obtenus chez Xenopus est cumulable avec les données recueillies dans d’autres vertébrés modè...

Les têtards de Xenopus constituent un excellent modèle animal pour étudier la fonction normale du système nerveux. Transparence, un génome entièrement séquencé1,2et l’accessibilité aux techniques chirurgicales, électrophysiologiques et d’imagerie sont des propriétés uniques des larves de Xenopus qui permettent d’étudier les fonctions neuronales in vivo3 . Quelques-unes des multiples possibilités expérimentales de ce modèle animal sont illustrés par les études approfondies réalisées têtard les systèmes sensoriels et moteurs4,5,6. Un circuit neuronal particulièrement bien adapté pour étudier plusieurs aspects de l’information au niveau des synapses est le Xenopus têtard système olfactif7. Tout d’abord, sa connectivité synaptique est bien définie : neurones récepteurs olfactifs (Orn) projettent vers le bulbe olfactif et établir des contacts synaptiques avec les dendrites des cellules mitrales/tuffeté dans les glomérules pour générer des cartes de l’odeur. Deuxièmement, son Orn continuellement générés par neurogenèse tout au long de la vie pour maintenir le fonctionnement des voies olfactives8. Et troisièmement, parce que le système olfactif montre une grande capacité régénératrice, Xenopus têtards sont en mesure de reformer entièrement leur bulbe olfactif après ablation9.
Dans cet article, nous décrivons les approches qui combinent l’imagerie des glomérules olfactifs chez les têtards vivant avec des expériences comportementales pour étudier la fonctionnalité des voies olfactives. Les méthodes détaillées ici ont été utilisées pour étudier la récupération fonctionnelle de la connectivité glomérulaire dans le bulbe olfactif après transection de nerf olfactif10. Données obtenues chez les têtards de Xenopus sont représentatifs des vertébrés comme traitement olfactif est évolutive conservée.
Les méthodes décrites sont illustrés à l’aide de X. tropicalis , mais elles peuvent être facilement implémentées dans X. laevis. Malgré la grande taille des adultes X. laevis, les deux espèces sont remarquablement semblables au cours des étapes de têtard. Les principales différences résident au niveau génomique. X. laevis affiche les pauvre traçabilité génétique, principalement déterminée par son génome allotétraploïde et longue durée de génération (environ 1 an). En revanche, x. tropicalis est plus favorable à des modifications génétiques en raison de sa durée d’une génération plus courte (5 à 8 mois) et le génome diploïde. Les expériences représentatives sont illustrées pour animaux sauvage et trois différentes lignées transgéniques : Hb9:GFP (X. tropicalis), NBT:GFP (X. tropicalis) et tubb2:GFP (X. laevis).
On envisagera les méthodologies décrites dans les travaux en cours aux côtés de la génétique progresse dans le domaine de Xenopus . La simplicité et la simple mise en œuvre des techniques présentées qui les rend particulièrement utile pour l’évaluation mutants déjà décrit11, ainsi que des lignes de Xenopus générés par CRISPR-Cas9 technologie12. Nous décrivons également une intervention chirurgicale permettant de transect des nerfs olfactifs qui peuvent être implémentées dans un laboratoire ayant accès aux têtards de Xenopus . Les approches utilisées pour évaluer les réponses de calcium présynaptique et comportement olfactif guidée nécessitent des équipements spécifiques, quoique disponible à un coût modéré. Méthodes sont présentées sous une forme simple de promouvoir leur utilisation dans des groupes de recherche et marquera-t-il le début les bases de tests plus complexes en mettant en œuvre des améliorations, ou par l’association à d’autres techniques, c'est-à-dire aux approches de, histologiques ou génétiques.

<table><tbody><tr><td>Sels pour aquariums (Instant Ocean Salt)</td><td>Tecniplast</td><td>XPSIO25R</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Pince à épiler #5 (pointe 0.025 x 0.005 mm)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501985</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Ciseaux (pointe 0.015 x 0.015)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501778</td><td></td></tr><tr><td>Whatman papier filtre qualitatif</td><td>Fisher Scientific</td><td>WH3030917</td><td></td></tr><tr><td>X. laevis tubb2-GFP</td><td>National Xenopus Resource (NXR), RRID :SCR_013731</td><td>NXR_0.0035</td><td></td></tr><tr><td>X.tropicalis NBT-GFP</td><td>European Xenopus Resource Center (EXRC) RRID :SCR_007164</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellTracker CM-DiI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C-7001</td><td></td></tr><tr><td>Calcium Green dextran, Sel de potassium, 10 000 MW, Anionic</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C-3713</td><td></td></tr><tr><td>Capillaires en borosilicate pour micro-injection</td><td>Instrument Sutter</td><td>B100-75-10</td><td>D.E.=1,0 mm., D.I.=0,75 mm.</td></tr><tr><td>Extracteur</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>Micro-injecteur</td><td>Parker Instruments</td><td>Picospritzer III</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard-184</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>761028-5EA</td><td></td></tr><tr><td>Micropipettes Microfil</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G-5</td><td></td></tr><tr><td>Microscope droit</td><td>Zeiss</td><td>AxioImager-A1</td><td></td></tr><tr><td>Stimulateur Master-8</td><td>A.M.P.I.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Caméra CCD</td><td>Hamamatsu</td><td>Image EM</td><td></td></tr><tr><td>Électrovannes</td><td>Warner Instruments</td><td>VC-6 Système</td><td></td>à six canaux</tr><tr><td>Dow Corning Graisse sous vide poussé</td><td>VWR Scientific</td><td>636082B</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de tubocurine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2379</td><td></td></tr><tr><td>Caméra CCD</td><td>Zeiss</td><td>MRC-5</td><td>Contrôlée par Zen logiciel</td></tr><tr><td>objectif de caméra</td><td>Thorlabs</td><td>MVL8ML3</td><td>Il existe de multiples possibilités qui doivent être adaptées au modèle de caméra utilisé</td></tr><tr><td>Résine époxy</td><td>RS Components</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collecteur</td><td>Warner Instruments</td><td>MP-6 Collecteur de perfusion</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateur pour la livraison locale de solutions</td><td>Narishige</td><td>MN-153</td><td></td></tr><tr><td>Mini pinces magnétiques</td><td>Warner Instruments</td><td>MAG-7, MAG-6</td><td></td></tr><tr><td>Tubes en polyéthylène</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0755</td><td>Diamètre extérieur = 1,57 mm, Diamètre intérieur = 1,14 mm.</td></tr></tbody></table>

Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de xenopus vivant

Functional Evaluation of Olfactory Pathways in Living Xenopus Tadpoles

Les têtards de Xenopus offrent une plate-forme unique pour étudier la fonction du système nerveux. Ils offrent plusieurs avantages expérimentales, telles que l’accessibilité à nombreuses approches d’imagerie, des techniques électrophysiologiques et tests comportements. Le système olfactif de Xenopus têtard est particulièrement bien adapté pour étudier la fonction des synapses établis au cours du développement normal ou réformés après une blessure. Nous décrivons ici les méthodologies permettant d’évaluer le traitement de l’information olfactive dans la vie des larves de Xenopus . Nous exposons une combinaison de mesures in vivo des réponses de calcium présynaptique dans les glomérules du bulbe olfactif avec des essais de comportement olfactif guidée. Méthodes est cumulable avec la transection des nerfs olfactifs pour étudier le recâblage de la connectivité synaptique. Des expériences sont présentées à l’aide d’animaux sauvage et génétiquement modifiés exprimant des reporters de la GFP dans les cellules du système nerveux central. Application des méthodes décrites aux têtards génétiquement modifiés peut être utile pour démêler les bases moléculaires qui définissent le comportement de vertébrés.

Dans cet article, nous présentons une combinaison des deux approches complémentaires à effectuer en vivo étude des fonctionnalités du système olfactif Xenopus têtard : J’ai) une méthode d’imagerie présynaptique Ca2 + change dans les glomérules de la vie les têtards en utilisant un indicateur calcique fluorescent et ii) une odeur guidé analyse comportementale qui peut être utilisé pour étudier la réponse spécifique Odorisants d’origine hydrique. Étant donné que...

Les têtards de Xenopus offrent une plate-forme unique pour étudier la fonction du système nerveux in vivo. Nous décrivons des méthodologies pour évaluer le traitement de l’information olfactive vie Xenopus larves dans des conditions normales d’élevage ou après une blessure.

Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant

Xenopus tadpoles offer a unique platform to investigate the function of the nervous system. They provide multiple experimental advantages, such as ...

Cette méthode peut être utile pour répondre à des questions clés dans les domaines de la neurobiologie tels que la façon dont les terminaux présynaptiques fonctionnent in vivo. Le principal avantage de cet ensemble de techniques est que nous montrons des approches complémentaires pour asses la fonction des voies olfactives en utilisant têtards Xenopus comme modèle animal. La démonstration de cette procédure sera moi-même, Béatrice Terni, et Paolo Pacciolla.Commencez la procédure de transection en mouillant deux morceaux de papier filtre qualitatif de cellulose dans la solution anesthésique MS2 22 à 0,02 %, et en les plaçant sous la portée de dissectation. Puis choisissez un têtard dans le réservoir et immerger dans un plat de solution anesthésique. Le têtard doit cesser de nager dans les deux à quatre minutes.Vérifiez l’anesthésie appropriée par l’absence de réaction aux stimuli mécaniques appliqués au niveau de la queue à l’aide d’une pince à épiler. Placez le têtard anesthésié sur le papier filtre sous la portée. Placez l’animal avec son côté dorsal orienté vers le haut afin que les structures cérébrales puissent être visualisées.Pour les expériences comportementales, utilisez de

functional-evaluation-of-olfactory-pathways-in-living-xenopus-tadpoles

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Nous démontrons variations de la technique d'enregistrement multi-unité extracellulaire de caractériser les odeurs réponses évoquées dans les trois premières étapes de la voie olfactive invertébrés. Ces techniques peuvent être facilement adaptés pour examiner l'activité d'ensemble dans d'autres systèmes neuronaux ainsi.

Méthodes d&#39;enregistrement multi-unités pour caractériser l&#39;activité neuronale dans le Criquet (<em&gt; Schistocerca americana</em&gt; Circuits olfactifs)

L'ampoule accessoire olfactif de la souris (AOB) a été difficile à étudier dans le contexte du codage sensoriel. Ici, nous démontrons une dissection qui produit in vivo préparation ex dans laquelle les neurones AOB restent fonctionnellement connectées à leurs entrées périphériques, ce qui facilite la recherche en traitement de l'information des phéromones de souris et kairomones.

Ex Vivo préparatifs de l&#39;ampoule Vomeronasal organes et accessoire olfactive Intact

Nous décrivons un protocole de marquage in vivo des neurones sensoriels olfactifs par électroporation et par balayage laser confocal ultérieur ou microscopie multiphotonique pour visualiser la morphologie neuronale et son développement au fil du temps.

Le système olfactif comme un modèle pour étudier des modèles axonale croissance et la morphologie In Vivo

L’analyse des propriétés physiologiques des neurones sensoriels olfactifs se heurte encore à des limites techniques. Ici, nous les enregistrons à l’aide d’un patch-clamp perforé dans une préparation intacte de l’épithélium olfactif chez des souris ciblées par des gènes. Cette technique permet de caractériser les propriétés membranaires et les réponses à des ligands spécifiques de neurones exprimant des récepteurs olfactifs définis.

Perforé patch-clamp enregistrement des souris neurones sensoriels olfactifs dans neuroépithélium Intact: Analyse fonctionnelle des neurones exprimant un récepteur odorant Identifié

Nous décrivons ici un protocole de mesure et d’analyse des réponses de température dans le bulbe olfactif de Xenopus laevis. Les neurones récepteurs olfactifs et les cellules mitrales sont colorés de manière différentielle, après quoi des modifications du calcium sont enregistrées, reflétant une sensibilité de certains réseaux neuronaux du bulbe aux baisses de température induites au niveau du nez.

Enregistrement Neuronal activité induite de Température-travers le contrôle des modifications de calcium dans le bulbe olfactif de<em&gt; Xenopus laevis</em

Ce protocole analyse le comportement de navigation de larve de drosophile en réponse à la stimulation simultanée d’optogenetic de ses neurones olfactifs. Lumière de longueur d’onde de 630 nm permet d’activer les neurones olfactifs individuels exprimant une rhodopsine canal décalée vers le rouge. Mouvement larvaire est suivi en même temps, d’enregistrement numérique et analysées à l’aide du logiciel d’écriture personnalisée.

Analyser le comportement larves de drosophile en réponse à une Stimulation des neurones olfactifs Optogenetic

Ce protocole vise à démontrer comment microinjecter un mélange ADN/DOTAP dans les œilcs d'embryons de Xenopus laevis d'un jour, et comment imager et reconstruire la protéine fluorescente verte individuelle (GFP) exprimant des arborescences axonales optiques dans les midbrains tectal de intacts, les têtards Xenopus vivants.

Microinjection d'ADN dans eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

L’enregistrement extracellulaire à plusieurs unités du nerf olfactif est une méthode sensible, robuste et reproductible pour évaluer la sensibilité olfactive chez les poissons marins. Il enregistre l’entrée sensorielle primaire et est indépendant de la salinité externe.

Enregistrement extracellulaire multi-unités du nerf olfactif des téléosts

Ce protocole décrit la procédure de dissection, l’état de culture et l’imagerie en direct d’un système d’explantation antenne-cerveau pour l’étude de l’assemblage du circuit olfactif.

Un système Explant pour les études d’imagerie time-lapse de l’assemblage de circuits olfactifs chez la drosophile

Nous décrivons ici des méthodes pour induire et analyser le remodelage dépendant de l’expérience olfactive des glomérules synaptiques du lobe antennaire dans le cerveau juvénile de la drosophile .

Remodelage dépendant de l’expérience de la connectivité synaptique des neurones sensoriels olfactifs du cerveau juvénile au cours d’une période critique au début de la vie

Découvrez l'évaluation des voies olfactives chez les têtards de Xenopus pour la neurobiologie. Cette méthode d'imagerie in vivo permet d'étudier le traitement de l'information odorante et les réponses comportementales.

Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant

Explorer plus de vidéos