Transfert d’embryon et vitrification d’embryons au stade optimal de l’embryon dans le modèle Rabbit

L’objectif principal de cette expérience est de décrire une procédure laparoscopique de transfert d’embryons chez le lapin comme modèle. Le principal avantage de cette technique est que celui-ci travaille à transférer des embryons en utilisant une technique facile et mini-invasive. En outre, le protocole efficace de cryopréservation embryonnaire décrit ici travaille également au stockage à long terme des embryons de lapin, fournissant des capacités logistiques flexibles dans le temps et la capacité de transporter l’échantillon.

Comme nous le savons, les technologies de procréation assistée font l’effet d’une évaluation continue afin d’améliorer les résultats et de réduire les risques associés. Par conséquent, en utilisant les deux techniques, le lapin peut être utilisé comme un modèle animal idéal de reproduction humaine pour répondre à des questions clés dans ce domaine, telles que les effets de la manipulation in vitro de l’embryon sur la progéniture. La démonstration visuelle de ces questions est essentielle car les étapes de transfert d’embryons sont difficiles à apprendre, car il doit être fait avec une grande précision pour assurer le succès de la technique.

Pour la vitrification embryonnaire, immerger les embryons dans une solution d’équilibrage pendant deux minutes, suivie d’une incubation d’une minute dans la solution de vitrification. À la fin de l’incubation, charger les embryons dans une mini-paille en plastique de 125 microlitres et coupler l’extrémité fermée de la mini-paille avec un microdispenseur approprié d’un millilitre. Aspirer le milieu de base jusqu’à un tiers de la longueur de paille, suivi d’une petite bulle d’air.

Ensuite, utilisez un stéréomicroscope pour aspirer les embryons dans 40 microlitres de solution de vitrification, suivi d’une autre petite bulle d’air et d’un milieu de base suffisant pour déplacer la première fraction liquide jusqu’au coton de la mini-paille. Ensuite, fermez l’extrémité ouverte de la mini-paille avec un bouchon de paille, plongez la mini-paille directement dans de l’azote liquide pour atteindre la vitrification, et stockez la mini-paille dans une dewar d’azote liquide. Pour décongeler les embryons pour un transfert, placez la mini-paille horizontalement à 10 centimètres de la vapeur d’azote liquide pendant 20 à 30 secondes.

Lorsque le processus de cristallisation commence à l’intérieur de la mini-paille, immerger la mini-paille dans le bain d’eau de 25 degrés Celsius pendant 10 à 15 secondes. Retirez immédiatement les bouchons de mini-paille et de coton et utilisez un microdispenser couplé pour expulser le contenu de la mini-paille dans une assiette contenant un milieu de base de 25 degrés Celsius complété par une solution de saccharose molaire de 0,33, dans laquelle les embryons doivent rester pendant cinq minutes. Transférer ensuite les embryons dans une assiette de milieu de base frais pour une incubation de cinq minutes.

Autant de jours avant que l’âge des embryons à transférer, observez la turgidité et la couleur des vulves des lapins femelles sexuellement matures disponibles de 4,5 mois, et induisez l’ovulation chez les animaux réceptifs avec une injection intramusculaire simple d’un microgramme d’acétate de buserelin indépendamment du poids corporel. Le jour du transfert, rincer les embryons frais ou décongelés dans un milieu de base de 37 degrés Celsius sous un stéréomicroscope et attacher un cathéter épidural de calibre 17 correctement configuré à une seringue d’un millilitre. Aspirer un centimètre de milieu de base dans le cathéter, suivi d’une petite bulle d’air.

Puis aspirer cinq à sept embryons et 10 microlitres de milieu de base, suivi d’une autre petite bulle d’air, et un dernier centimètre de milieu de base. Une fois que les embryons ont été chargés, placez le lapin receveur anesthésié dans une cage à un stade de réchauffement et appliquez de la pommade sur les yeux de l’animal. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de pédale, raser la fourrure de l’abdomen ventral, nettoyer la zone chirurgicale avec du savon gluconate de chlorhexidine, et enlever tous les cheveux restants.

Couvrez la zone d’un drapé stérile avec un trou pour la zone chirurgicale, et insérez un trocar endoscopique de cinq centimètres dans la cavité abdominale, deux centimètres caudal au processus zyphoïde, et utilisez un insufflateur mécanique régulateur de pression pour gonfler la cavité péritonéale. Insérez la caméra endoscope à travers la trocar endoscopique, et insérez l’aiguille épidurale de calibre 17 dans la région inguinale, à deux ou trois centimètres de l’infundibulum. Insérez le cathéter chargé à travers l’aiguille péridurale dans l’abdomen, et insérez un à deux centimètres du cathéter épidural à travers l’infundibulum dans l’ampulla.

Déprimez doucement le piston cathéter pour libérer les embryons dans l’oviducte. Les deux bulles d’air doivent sortir du cathéter. Retirer le cathéter juste après la libération des embryons et aspirer et libérer le milieu restant pour confirmer l’absence des embryons.

Après confirmation d’un transfert réussi des embryons, retirez l’aiguille péridurale et la caméra endoscope, et relâchez le dioxyde de carbone abdominal par le trocar endoscopique. Nettoyez l’incision trocar avec la solution de chlorhexidine, et fermez la plaie avec un aluminium micronisé et un pansement en plastique. Traitez ensuite l’animal avec les antibiotiques et analgésiques appropriés, et surveillez l’animal jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement.

Le transfert minimal d’embryons laparoscopiques invasifs place le lapin parmi les meilleurs modèles animaux pour les études de reproduction, avec un pourcentage élevé d’embryons frais transférés entraînant un chiot. Notamment, des valeurs plus élevées sont atteintes lorsque le transfert d’embryons frais est effectué avec des embryons au stade précoce ou compact des morulae. Des résultats similaires sont observés après le transfert précoce et compacté de morula de lapin vitrifié, particulièrement avec le morulae compact, confirmant l’efficacité et la fiabilité de cette technique pour transférer les embryons in-vitrifiés frais chez les lapins.

À la suite de cette procédure, d’autres méthodes comme les technologies de reproduction assistée conditionnelles peuvent être effectuées afin de répondre à d’autres questions comme la façon dont l’ajout de densités peut entraîner un effet analgésique plus tard dans la vie. Après un développement récent, cette technique ouvre la voie aux scientifiques dans le domaine de la reproduction pour explorer cet effet chez l’homme basé sur la distance phylogénétique étroite entre le lapin et l’homme. Ainsi, cette technique peut fournir des résultats facilement transférables à la médecine clinique humaine, ainsi que chez d’autres espèces de mammifères.

N’oubliez pas que notre méthode offre certains avantages hygiéniques et économiques conformes au concept de trois R de bien-être animal, remplacement, réduction et raffinement, en ayant l’intention d’améliorer le traitement humain des animaux expérimentaux.