Name: L’Identification des phéromones de la lamproie marine à l’aide de fractionnement Bioassay-guidé (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Découvrez l'identification des phéromones de la lamproie marine par extraction en phase solide et chromatographie. Cette méthode lie de nouveaux composés à leur fonction phéromonale en écologie chimique.

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Nous remercions l’US Geological Survey Hammond Bay Station biologique pour l’utilisation de leurs installations de recherche et le personnel du U.S. Fish and Wildlife Service et Pêches et Océans Canada pour fournir de la lamproie marine. Cette recherche a été financée par des subventions de la Commission des pêcheries des grands lacs à Weiming Li et Ke Li.

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Poissons vivants dans un monde chimique de composés encore être identifiés. Guidée par bioessai fractionnement s’est avérée essentiel pour identifier et caractériser les molécules bioactives qui assurent la médiation de nombreuses interactions chimiques, tels que ceux observés en saumon masu31, éléphants d’Asie,32et la grande lamproie marine33, 34,35. Fractionnement guidée par ess...

Les phéromones sont des signaux chimiques spécifiques, libérés par les personnes qui les aident à localiser les sources de nourriture, détecter les prédateurs et médiation des interactions sociales de leurs congénères1. Communication de la phéromone chez les insectes a été bien étudiée2; Cependant, l’identification chimique et la fonction biologique des phéromones de vertébrés aquatiques n'ont pas été étudiées aussi largement. Connaissance de l’identité et la fonction des phéromones libéré peuvent être appliquées pour faciliter la récupération des espèces menacées,3,4 ou contrôle antiparasitaire espèces5,6. L’application de ces techniques nécessite l’isolement et la caractérisation des composants bioactifs de phéromone.
Identification de la phéromone est une branche de la chimie des produits naturels. Progrès dans la recherche de phéromone a été partiellement limité en raison de la nature des molécules phéromones eux-mêmes. Les phéromones sont souvent instables et publié en petites quantités, et seulement quelques techniques d’échantillonnage existent pour détecter des quantités infimes de volatiles7,8 ou des composés solubles dans l’eau9. Méthodes pour identifier les phéromones comprennent 1) un dépistage ciblé des composés connus, métabolomique) 2 et 3) guidée par bioessai fractionnement. Un dépistage ciblé des composés connus les tests disponibles dans le commerce des sous-produits métaboliques des processus physiologiques hypothétiquement fonctionnent comme des phéromones. Cette approche est limité parce que les chercheurs peuvent tester uniquement composés connus et disponibles. Toutefois, il a conduit à l’identification réussie des hormones sexuelles chez le poisson rouge qui fonctionnent comme phéromones10,11,12. La métabolomique est une deuxième approche d’identification de phéromone qui distingue les produits métaboliques potentiels de petites molécules dans un système biologique13. Une comparaison des profils métaboliques des deux groupes (c.-à-d., un actif contre un extrait inactif) permet l’identification d’un profil métabolique potentiel de qui le métabolite est épuré, la structure est élucidée et les bioactivité est confirmé14. Effets additifs ou synergiques des formulations complexes des mélanges spécifiques sont plus susceptibles d’être détectés avec la métabolomique, parce que les métabolites sont considérés ensemble plutôt que comme une série de fractions13. Pourtant, la mise en œuvre de la métabolomique repose sur la disponibilité des références synthétiques parce que les données qui en résulte ne facilitent pas l’élucidation des nouvelles structures.
Fractionnement guidée par essai biologique est une approche intégrée et itérative qui s’étend sur deux domaines : chimie et biologie. Cette approche utilise les résultats des essais biologiques physiologiques et comportementales pour guider l’isolement et l’identification d’un composé actif de phéromone. Un extrait brut est fractionné par une propriété chimique(p. ex., taille moléculaire, polarité, etc.) et testé avec enregistrements électro-olfactogramme (EOG) et/ou dans un test biologique. Les composants bioactifs sont éliminés en répétant ces étapes de fractionnement et EOGs et/ou biologiques. Les structures des composés actifs purs ont été dégagés par les méthodes spectrométriques et spectroscopiques, qui assurent le poids moléculaire et l’information structurale pour produire un modèle de ce composé à être synthétisé. Guidée par bioessai fractionnement peut produire divers métabolites et potentiellement roman phéromones avec des squelettes chimiques uniques qui ne risquent pas d’être prédites par les voies de biosynthèse.
Nous décrivons ici le protocole de fractionnement guidée par essai biologique utilisé pour isoler et de caractériser la bioactivité de la lamproie de mer mâle sex pheromone composés. La lamproie marine (Petromyzon marinus) est un modèle idéal de vertébrés pour étudier la communication phéromonale parce que ces poissons s’appuient fortement sur la détection olfactive des signaux chimiques d’arbitrer leur histoire de vie anadrome composé de trois étapes distinctes : les larves, juvénile et adulte. Larve de la lamproie marine se terrent dans les sédiments des cours d’eau douce, subissent une métamorphose radicale et de transforme en juvéniles qui migrent d’un lac ou l’océan où ils parasitent les poissons de la grande hostie. Après avoir détaché du poisson hôte, les adultes migrent vers des ruisseaux frayères, guidé par les phéromones migrateurs publiés par flux résident larves15,16,17,18,19 . Les mâles matures montent sur les frayères, libérer une phéromone de sexe multi-composants pour attirer des compagnons, frayer par intermittence pendant environ une semaine et puis mourir15,20. L’identification des phéromones de la lamproie marine est importante parce qu’une modulation du système de communication phéromone est parmi les options envisagées pour contrôler les lamproies marines envahissantes dans les Grands Lacs laurentiens21.

<table><tbody><tr><td>Capillaires en borosilicate à paroi standard de qualité supérieure avec filament&nbsp ;</td><td>Warner Instruments</td><td>G150F-4</td><td>Électrode d’enregistrement et de référence (OD 1,5 mm, ID 0,86 mm)</td></tr><tr><td>Instrument d’extraction de pipette</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td>tire des électrodes pour EOG</td></tr><tr><td>Coupe-verre à pointe de diamant</td><td>Pointe générique</td><td></td><td>d’électrodes pour EOG</td></tr><tr><td>Capillaires en verre borosilicaté</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B150-4</td><td>Tube de distribution d’odorant pour EOG</td></tr><tr><td>Porte-électrode d’enregistrement Série E corps droit avec pastille Ag/AgCl pour capillaire en verre OD 1,5 mm</td><td>Warner Instruments</td><td>ESP-M15N</td><td>Porte-électrode d’enregistrement</td></tr><tr><td>Porte-électrode de référence Série E avec poignée avec&nbsp ; Granulés Ag/AgCl&nbsp ; pour capillaire en verre OD 1,5 mm</td><td>Warner Instruments</td><td>E45P-F15NH</td><td>porte-électrode de référence</td></tr><tr><td>1 broche</td><td>Warner Instruments</td><td>WC1-10</td><td>pour pont porte-électrodes de référence et d’enregistrement</td></tr> 2 <tr><td>mm broche</td><td>Warner Instruments</td><td>WC2-5</td><td>pour pont porte-électrodes de référence et d’enregistrement</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma</td><td>A1296</td><td>gélose fondue pour remplir les électrodes</td></tr><tr><td>Chlorure de potassium (KCl)</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td>3M KCl pour le remplissage des électrodes et des porte-électrodes</td></tr><tr><td>Micropipette microfil</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G-5</td><td>pour le remplissage des électrodes et des porte-électrodes</td></tr><tr><td>L-Arginine</td><td>Sigma</td><td>A5006</td><td>odorant à contrôle positif pour EOG</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Sigma</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>Bain-marie</td><td>Sur mesure</td><td>N/A</td><td>maintient les odorisants pour EOG</td></tr><tr><td>Ester éthylique de l’acide 3-aminobenzoïque (MS222)</td><td>Syndel USA</td><td>Tricaïne1G</td><td>EOG anesthésique</td></tr><tr><td>Triéthiodide Gallamine</td><td>Sigma</td><td>G8134-5G</td><td>EOG paralytique</td></tr><tr><td>1 mL seringue</td><td>BD Biosciences</td><td>301025</td><td>pour administrer paralysant</td></tr><tr><td>Aiguille sous-cutanée 26G 5/8</td><td>BD Biosciences</td><td>305115</td><td>pour administrer paralysant</td></tr><tr><td>Pince à rouleau</td><td>World Precision Les instruments</td><td>14043-20</td><td>ajustent le débit d’anesthésique dans la bouche de la lamproie</td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>J.T. Baker</td><td>3624-05</td><td>pour la préparation d’un support en plastique salin en forme de V à 0,9 %</td></tr><tr><td>comme étape d’échantillon N</td><td>/A</td> Fabriqué <td>sur mesure</td><td>pour maintenir la lamproie pendant l’EOG</td></tr><tr><td>Auge en plastique S.O.</td> sur <td>mesure</td><td></td><td>pour tenir le support en plastique en forme de V pendant l’EOG</td></tr><tr><td>Lames de scalpel - #11</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td>pour la dissection EOG</td></tr><tr><td>Manche de scalpel - #3</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td>pour la dissection EOG</td></tr><tr><td>Pince droite ultra fine</td><td>Outils de science</td><td>fine 11252-00</td><td>pour la dissection EOG, Dumont #5SF Pince</td></tr><tr><td>Pince ultra fine incurvée</td><td>Outils de science fine</td><td>11370-42</td><td>pour la dissection EOG, Moria MC40B</td></tr><tr><td>Ciseaux</td> <td>droitsOutils de haute science</td><td>15003-08</td><td>pour la dissection EOG</td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Zeiss</td><td>Discovery V8</td><td>pour la dissection EOG</td></tr><tr><td>Lumière de l’illuminateur</td><td>Zeiss</td><td>CL 1500 ECO</td><td>pour la dissection EOG</td></tr><tr><td>Tube en plastique Générique</td><td></td><td></td><td>pour connecter la configuration EOG à recirculation et les bains-marie</td></tr><tr><td>Tube de distribution d’odorant Fabrication</td><td>sur mesure</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>In Filtre de ligne et joint d’étanchéité</td><td>Lee Company</td><td>TCFA1201035A</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulateurs</td><td>Narishige</td><td>MM-3</td><td>pour positionner les électrodes et le tube capillaire de distribution d’odorant</td></tr><tr><td>Dispositifs de maintien magnétiques</td><td>Kanetec</td><td>MB-K</td><td></td></tr><tr><td>Pilote de vanne</td><td>Arduino</td><td>fabriqué sur mesure</td><td>pour contrôler l’ouverture de la vanne pour la stimulation des odeurs</td></tr><tr><td>Vanne électromagnétique Lee</td><td> Entreprise</td><td>LFAA1201618H</td><td>valve pour la stimulation des odeurs</td></tr><tr><td>NeuroLog Amplificateur AC/DC</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL106</td><td>pour augmenter l’amplitude du préamplificateur DC du signal électrique</td></tr><tr><td>NeuroLog avec étage de tête</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL102G</td><td>pour augmenter l’amplitude du signal électrique</td></tr><tr><td>Filtre passe-bas 60 Hz</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL125</td><td></td></tr><tr><td>Numériseur</td><td>Molecular Devices LLC</td><td>Axon Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>Ordinateur Dell (OptiPlex 745) exécutant le logiciel d’acquisition de données Axoscope</td><td>Molecular Devices LLC</td><td>AxoScope version 10.4</td><td></td></tr><tr><td>Cage de Faraday</td><td>Fabrication sur mesure</td><td>N/A</td><td>Blindage contre le bruit électromagnétique</td></tr><tr><td>Labyrinthe à deux choix Fabrication</td><td>sur mesure</td><td>N/A</td><td>contreplaqué imperméable de qualité marine recouvert d’une doublure en plastique</td></tr><tr><td>Pompe à ordures</td><td>Honda</td><td>WT30XK4A</td><td>remplit le labyrinthe avec de l’eau de la rivière voisine</td></tr><tr><td>Pompe péristaltique avec tube</td><td>Cole Parmer</td><td>Masterflex 07557-00</td><td>pour administrer les odorisants dans le labyrinthe</td></tr><tr><td>Générateur d’onduleur</td><td>Honda</td><td>EU1000i</td><td>alimente la pompe perstaltique</td></tr><tr><td>Cage de libération</td><td>sur mesure</td><td>N/A</td><td>utilisé pour acclimater la lamproie dans le labyrinthe</td></tr><tr><td>Maille</td><td>Générique</td><td></td><td>utilisé pour contenir les dimensions du labyrinthe et minimiser la turbulance de l’eau avec des rouleaux à mailles</td></tr><tr><td>Seaux (5 gallons)</td><td>Générique</td><td></td><td>pour mélanger les odorisants</td></tr><tr><td>Débitmètre</td><td>Marsh-McBirney</td><td>Flo-Mate 2000</td><td>pour mesurer la décharge</td></tr><tr><td>XAD 7 HP résine</td><td>Dow chimique</td><td>37380-43-1</td><td>pour l’extraction de l’eau conditionnée&nbsp ;</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Sigma</td><td>34860</td><td>pour l’extraction d’eau conditionnée</td></tr><tr><td>Bain-marie</td><td>Yamato</td><td>BM 200</td><td>pour l’extraction de l’eau conditionnée</td></tr><tr><td>Lyophilisateur</td><td>Labconco</td><td>CentriVap Concentrateur</td><td>pour l’extraction de l’eau conditionnée</td></tr><tr><td>chloroforme</td><td>Sigma</td><td>CX1050</td><td>pour l’isolement des flaques de fractions</td></tr><tr><td>Gel de silice 70-230 mesh</td><td>Sigma</td><td>112926-00-8</td><td>pour l’isolation des pools de fractions Gel de</td></tr><tr><td>silice 230-400 mesh</td><td>Sigma</td><td>112926-00-8</td><td>pour l’isolation des pools de fractions</td></tr><tr><td>Silice pré-enduite gel plaques TLC</td><td>Sigma</td><td>99571</td><td>pour l’isolation des piscines de fractions</td></tr><tr><td>anisaldéhyde</td><td>Sigma</td><td>A88107</td><td>pour l’isolation des piscines de fractions</td></tr><tr><td>Sephadex LH-20</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0090-01</td><td>pour l’isolation des piscines de fractions</td></tr><tr><td>Amberlite XAD 7 HP résine</td><td>Sigma</td><td>XAD7HP</td><td>pour l’extraction de l’eau conditionnée&nbsp ;</td></tr><tr><td>4 colonnes de verre d’une capacité de 2,5 L</td><td>Ace Glass Inc.</td><td>5820</td><td>pour l’extraction d’eau conditionnée</td></tr><tr><td>Acétone</td><td>Sigma</td><td>650501</td><td>pour l’extraction d’eau conditionnée</td></tr><tr><td>TQ-S TOF LC Spectromètre de masse (ou équivalent)</td><td>Waters Co.</td><td>N/A</td><td>pour l’élucidation de la structure</td></tr><tr><td>Pompe HPLC binaire</td><td>Waters Co.</td><td>1525</td><td>pour l’isolement de bassins de fractions/composés</td></tr><tr><td>Spectromètre RMN Agilent, 900MHz (ou équivalent)</td><td>Agilent</td><td>N/A</td><td>pour l’élucidation de la structure</td></tr><tr><td>Système de séchage Rotovap</td><td>Buchi</td><td>RII</td><td>pour l’extraction d’eau conditionnée&nbsp ;</td></tr><tr><td>Lampe UV (254 nm)</td><td>Spectronics Co.</td><td>ENF-240C</td><td>pour la chromatographie sur couche mince</td></tr></tbody></table>

l’identification des phéromones de la lamproie marine à l’aide de fractionnement bioassay-guidé

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Fractionnement guidée par essai biologique est une approche itérative qui utilise les résultats des essais biologiques physiologiques et comportementales pour guider l’isolement et l’identification d’un composé actif de phéromone. Cette méthode a entraîné la caractérisation réussie des signaux chimiques qui fonctionnent comme des phéromones dans un large éventail d’espèces animales. La lamproie marine se fient olfaction pour détecter les phéromones qui médient réponses comportementales et physiologiques. Nous utilisons cette connaissance de la biologie des poissons à proposer des fonctions de phéromones putatifs et pour guider l’isolement et l’identification des composantes de l’actif de phéromone. La chromatographie est utilisée pour extraire, se concentrer et de séparer les composés de l’eau conditionnée. Électro-olfactogramme (EOG) enregistrements sont effectuées pour déterminer quelles fractions provoquer des réponses olfactifs. Tests comportementaux labyrinthe deux choix sont ensuite utilisés pour déterminer si une des fractions odorantes sont également actif sur le plan comportemental et induire une préférence. Méthodes spectrométriques et spectroscopiques fournissent le poids moléculaire et l’information structurale pour aider à l’élucidation de la structure. L’activité biologique des composés purs se confirme avec EOG et tests comportements. Les réponses comportementales observées dans le labyrinthe en fin de compte doivent être validés qu’en milieu de terrain pour confirmer leur fonction dans un cadre de cours d’eau naturel. Ces essais biologiques jouent un rôle double pour 1) guider le processus de fractionnement et 2) confirmer et préciser la bioactivité des composants isolés. Ici, nous rapportons les résultats représentatifs d’une identification de phéromone de la lamproie marine qui illustrent l’utilité de l’approche guidée par bioessai fractionnement. L’identification des phéromones de la lamproie marine est particulièrement importante parce qu’une modulation de son système de communication de phéromone est parmi les options envisagées pour contrôler la lamproie de mer envahissante dans les Grands Lacs laurentiens. Cette méthode peut être facilement adaptée pour caractériser la communication chimique dans un large éventail de taxons et de faire la lumière sur l’écologie chimique d’origine hydrique.

Un schéma résumant les étapes décrites dans le protocole du fractionnement guidée par essai biologique est donné à la Figure 1. Le protocole, procédez comme pour les isoler et de caractériser la structure, la puissance olfactive et l’activité comportementale des 5 phéromones putatifs de la lamproie (Figure 2). À l’aide de la spectrométrie de masse et les données de la RMN (Figure 3 et <strong class="...

Nous présentons ici un protocole visant à isoler et de caractériser la structure, puissance olfactive et réaction de composés de phéromones putatifs de la lamproie marine.

L’Identification des phéromones de la lamproie marine à l’aide de fractionnement Bioassay-guidé

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’écologie chimique, telles que l’identification des phéromones. Le principal avantage de cette technique est qu’elle relie de nouveaux composés à la fonction des phéromones. Pour commencer cette procédure, placez 15 à 30 lamproies marines mâles sexuellement matures dans un réservoir alimenté par 250 litres d’eau aérée du lac Huron, maintenue à 16-18 degrés Celsius.Pour extraire l’eau conditionnée par extraction en phase solide, faites-la passer de la cuve via le système de pompage vers le haut de la colonne. L’eau passe à travers un lit de deux kilogrammes de résine échangeuse d’ions polymère modérément polaire contenue dans une série de quatre colonnes de verre d’une capacité d’un litre. Ensuite, retirez le solvant organique et récoltez l’extrait par évaporation rotative pendant cinq heures sous pression réduite à 40 degrés Celsius.Pour isoler les flaques de fractions, faites tremper le gel de silice dans la phase mobile initiale pendant 30 minutes. Transférez le gel avec le solvant dans une colonne de verre et ouvrez sa valve pour permettre à la phase mobile de passer. Ensuite, mélangez soigneusement les

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Dans cette vidéo, nous montrons un test permettant d’établir la présence de phospholipase dans l’extrait de venin brut d’Anthopleura dowii, une anémone de mer marine. Le test utilise une technique de diffusion sur gel d’agarose, dans laquelle l’enzyme phospholipase diffuse et décompose les phospholipides incorporés dans le milieu solide de manière radiale.

Dosage de l’activité de la phospholipase : un dosage de la diffusion sur gel pour déterminer l’activité de la phospholipase dans l’extrait de venin brut d’Anthopleura dowii

Dans cet article, nous décrivons une procédure optimisé pour l'extraction et l'analyse des prostaglandines et autres eicosanoïdes...

Extraction de prostaglandine et de l&#39;analyse en<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Ce bio-essai emploie un poisson prédateur de modèle pour évaluer la présence de métabolites alimentation-dissuasion à partir d'extraits organiques des tissus d'organismes marins à des concentrations naturelles en utilisant une matrice d'aliments comparable nutritionnel.

Un poisson-alimentation Laboratoire d&#39;essais biologiques pour évaluer l&#39;activité antiprédatrices des métabolites secondaires dans les tissus d&#39;organismes marins

Une méthode de longueur des fragments de réaction restriction polymorphisme améliorée en chaîne par polymérase pour le génotypage des espèces pufferfish par chromatographie / spectrométrie de masse liquide est décrit. Une colonne de monolithe de silice en phase inverse est utilisée pour la séparation des amplicons digérées. Cette méthode peut élucider les masses monoisotopiques d'oligonucléotides, qui est utile pour identifier la composition de base.

Amélioration de la Polymerase Chain Reaction restriction Fragment Length Polymorphism génotypage de Pufferfish Toxique par chromatographie liquide / spectrométrie de masse

Chez les reptiles, les lipides de la peau de leurs congénères sont cruciales pour signalisation sexuelle, avec une utilisation potentielle dans la gestion des espèces envahissantes. Nous décrivons ici les protocoles pour l’extraction des lipides de la peau de peau de hangar ou des animaux entiers, déterminer et analyser la masse de lipides totaux et séparant les lipides à l’aide de fractionnement par chromatographie sur colonne de.

Isolement chimique, Quantification et séparation des lipides de la peau des Reptiles

L’enregistrement extracellulaire à plusieurs unités du nerf olfactif est une méthode sensible, robuste et reproductible pour évaluer la sensibilité olfactive chez les poissons marins. Il enregistre l’entrée sensorielle primaire et est indépendant de la salinité externe.

Enregistrement extracellulaire multi-unités du nerf olfactif des téléosts

La caractérisation par spectrométrie de masse des neuropeptides fournit des informations de séquence, de quantification et de localisation. Ce flux de travail optimisé est non seulement utile pour les études de neuropeptides, mais aussi pour d’autres peptides endogènes. Les protocoles fournis ici décrivent la préparation des échantillons, l’acquisition de la SEP, l’analyse de la SEP et la génération de bases de données de neuropeptides à l’aide de l’imagerie LC-ESI-MS, MALDI-MS et MALDI-MS.

Étude spectrométrique de masse à multiples facettes des neuropeptides chez Callinectes sapidus

Ici, nous décrivons un protocole pour obtenir un extrait de venin brut de l’anémone de mer et détecter son activité hémolytique et phospholipase.

Identification de l’activité hémolytique et phospholipase dans les extraits bruts d’anémones de mer par des essais biologiques simples

Ce protocole établit des méthodes pour extraire et quantifier les réponses à la phéromone sexuelle volatile chez C. elegans, fournissant des outils pour étudier la communication chimique et la trajectoire de navigation.

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Ce protocole présente un flux de travail entièrement automatisé pour l’extraction de la géosmine et du 2-méthylisobornéol à partir de l’eau et des tissus de poissons riches en lipides. La méthode permet de détecter précocement ces molécules avant qu’elles n’atteignent les seuils d’odeur. Des données représentatives d’un milieu aquacole sont fournies.

Extraction et détection de la géosmine et du 2-méthylisobornéol dans l’eau et les poissons à l’aide de sondes d’extraction par sorption de grande capacité et de GC-MS

Découvrez l'identification des phéromones de la lamproie marine par extraction en phase solide et chromatographie. Cette méthode lie de nouveaux composés à leur fonction phéromonale en écologie chimique.

L’Identification des phéromones de la lamproie marine à l’aide de fractionnement Bioassay-guidé

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