Un test In Vitro pour détecter l’activité ARNt-isopentényl transférase

L’objectif global de ce protocole est de caractériser biochimiquement l’activité de transferase tRNA-Isopentenyl in vitro. Cette méthode est utile pour la détection in vitro et la caractérisation de l’activité de transferase tRNA-isopentenyl des enzymes recombinantes purifiées. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’un essai simple et direct utilisé pour détecter une modification covalente de l’ARN.

Bien que cette méthode donne un aperçu de l’activité de transferase tRNA-isopentenyl, elle est potentiellement adaptable pour la caractérisation biochimique d’enzymes modificables à large portée ou arn. La première étape de cette procédure consiste à nettoyer soigneusement les plaques de verre qui seront utilisées pour moulage du gel. Laver les assiettes avec du savon et de l’eau, bien rincer à l’eau déionisée, puis nettoyer les assiettes avec des lingettes sans isopropanol et sans peluche.