Name: Multiplex suivi thérapeutique pharmacologique par dilution isotopique HPLC-MS/MS des antibiotiques dans les maladies graves (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Découvrez une méthode HPLC-MS/MS par dilution isotopique pour le suivi thérapeutique pharmacologique des antibiotiques en réanimation. Ce protocole permet d'ajuster les dosages selon la sensibilité des pathogènes en 30 minutes.

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Les auteurs remercient Dr Schütze pour son aide à l’établissement de la méthode présentée et Dr. Zoller pour la précieuse contribution en ce qui concerne la gamme d’étalonnage approprié. Les auteurs remercient également le personnel technique de l’installation de spectrométrie de masse.

<ol><li>Fleischmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Global+Incidence+and+Mortality+of+Hospital-treated+Sepsis.+Current+Estimates+and+Limitations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assessment of Global Incidence and Mortality of Hospital-treated Sepsis. Current Estimates and Limitations.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193 (3), 259-272 (2016).</li>
<li>Dellinger, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surviving+Sepsis+Campaign%3A+international+guidelines+for+management+of+severe+sepsis+and+septic+shock%2C+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Surviving Sepsis Campaign: international guidelines for management of severe sepsis and septic shock, 2012.</a> Intensive Care Medicine. 39 (2), 165-228 (2013).</li>
<li>Lodise, T. P., Drusano, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics%3A+optimal+antimicrobial+therapy+in+the+intensive+care+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Clinics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics: optimal antimicrobial therapy in the intensive care unit.</a> Critical Care Clinics. 27 (1), 1-18 (2011).</li>
<li>Macedo, R. S., Onita, J. H., Wille, M. P., Furtado, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+pharmacodynamics+of+antimicrobial+drugs+in+intensive+care+unit+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and pharmacodynamics of antimicrobial drugs in intensive care unit patients.</a> Shock. 39, Suppl 1. 24-28 (2013).</li>
<li>Petersson, J., Giske, C. G., Eliasson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+dosing+of+piperacillin+and+meropenem+fail+to+achieve+adequate+plasma+concentrations+in+ICU+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anaesthesiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Standard dosing of piperacillin and meropenem fail to achieve adequate plasma concentrations in ICU patients.</a> Acta Anaesthesiologica Scandinavica. 60 (10), 1425-1436 (2016).</li>
<li>Abdul-Aziz, M. H., Lipman, J., Mouton, J. W., Hope, W. W., Roberts, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applying+pharmacokinetic%2Fpharmacodynamic+principles+in+critically+ill+patients%3A+optimizing+efficacy+and+reducing+resistance+development%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Applying pharmacokinetic/pharmacodynamic principles in critically ill patients: optimizing efficacy and reducing resistance development.</a> Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 36 (1), 136-153 (2015).</li>
<li>Imani, S., Buscher, H., Marriott, D., Gentili, S., Sandaradura, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Too+much+of+a+good+thing%3A+a+retrospective+study+of+beta-lactam+concentration-toxicity+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Too much of a good thing: a retrospective study of beta-lactam concentration-toxicity relationships.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 72 (10), 2891-2897 (2017).</li>
<li>Ventola, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antibiotic+resistance+crisis%3A+part+1%3A+causes+and+threats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacy+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats.</a> Pharmacy & Therapeutics. 40 (4), 277-283 (2015).</li>
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<li>Pulcini, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+stewardship%3A+update+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Antibiotic stewardship: update and perspectives.</a> Clinical Microbiology and Infection. 23 (11), 791-792 (2017).</li>
<li>Cairns, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+a+multidisciplinary+antimicrobial+stewardship+team+on+the+timeliness+of+antimicrobial+therapy+in+patients+with+positive+blood+cultures%3A+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">The impact of a multidisciplinary antimicrobial stewardship team on the timeliness of antimicrobial therapy in patients with positive blood cultures: a randomized controlled trial.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (11), 3276-3283 (2016).</li>
<li>Baur, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+antibiotic+stewardship+on+the+incidence+of+infection+and+colonisation+with+antibiotic-resistant+bacteria+and+Clostridium+difficile+infection%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of antibiotic stewardship on the incidence of infection and colonisation with antibiotic-resistant bacteria and Clostridium difficile infection: a systematic review and meta-analysis.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (9), 990-1001 (2017).</li>
<li>Roberts, J. A., Norris, R., Paterson, D. L., Martin, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+drug+monitoring+of+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic drug monitoring of antimicrobials.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 73 (1), 27-36 (2012).</li>
<li>Paal, M., Zoller, M., Schuster, C., Vogeser, M., Schutze, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+quantification+of+cefepime%2C+meropenem%2C+ciprofloxacin%2C+moxifloxacin%2C+linezolid+and+piperacillin+in+human+serum+using+an+isotope-dilution+HPLC-MS%2FMS+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Simultaneous quantification of cefepime, meropenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid and piperacillin in human serum using an isotope-dilution HPLC-MS/MS method.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 152, 102-110 (2018).</li>
<li>Vogeser, M., Seger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pitfalls+associated+with+the+use+of+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+in+the+clinical+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Pitfalls associated with the use of liquid chromatography-tandem mass spectrometry in the clinical laboratory.</a> Clinical Chemistry. 56 (8), 1234-1244 (2010).</li>
<li>United States Pharmacopeia and National Formulary. Chapter <621>. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CHROMATOGRAPHY+%28USP+37-NF+32+S1%29%22">CHROMATOGRAPHY (USP 37-NF 32 S1)</a>. , United Book Press, Inc. Baltimore, MD. 6376-6385 (2014).</li>
<li>Wong, G., Sime, F. B., Lipman, J., Roberts, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+we+use+therapeutic+drug+monitoring+to+improve+outcomes+from+severe+infections+in+critically+ill+patients%3F%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">How do we use therapeutic drug monitoring to improve outcomes from severe infections in critically ill patients?</a> BMC Infectious Diseases. 14, 288(2014).</li>
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<li>Cefepime hydrochloride: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/050679s040lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/050679s040lbl.pdf</a> (2016).</li>
<li>Meropenem: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2008/050706s022lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2008/050706s022lbl.pdf</a> (2006).</li>
<li>Ciprofloxacin hydrochloride: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/019537s086lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2016/019537s086lbl.pdf</a> (2016).</li>
<li>Moxifloxacin hydrochloride: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2010/021277s038lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2010/021277s038lbl.pdf</a> (2010).</li>
<li>Linezolid: Highlights of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2012/021130s028lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2012/021130s028lbl.pdf</a> (2011).</li>
<li>Piperacillin and Tazobactam: Highlighs of prescribing information. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2017/050684s88s89s90_050750s37s38s39lbl.pdf">https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/Label/2017/050684s88s89s90_050750s37s38s39lbl.pdf</a> (2017).</li>
<li>Zander, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+biobanking+conditions+on+six+antibiotic+substances+in+human+serum+assessed+by+a+novel+evaluation+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Effects of biobanking conditions on six antibiotic substances in human serum assessed by a novel evaluation protocol.</a> Clinical Chemistry and Laboratory. 54 (2), 265-274 (2016).</li>
<li>Zander, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+piperacillin%2C+tazobactam%2C+cefepime%2C+meropenem%2C+ciprofloxacin+and+linezolid+in+serum+using+an+isotope+dilution+UHPLC-MS%2FMS+method+with+semi-automated+sample+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Quantification of piperacillin, tazobactam, cefepime, meropenem, ciprofloxacin and linezolid in serum using an isotope dilution UHPLC-MS/MS method with semi-automated sample preparation.</a> Clinical Chemistry and Laboratory. 53 (5), 781-791 (2015).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans ce manuscrit, les auteurs rapportent le protocole pour une méthode de basé sur la spectrométrie de masse tandem simple et robuste pour la quantification des antibiotiques fréquemment utilisés à l’ICU19, nommément céfépime, méropénem, ciprofloxacine, la moxifloxacine, linézolide, et pipéracilline14. Une feuille de calcul accompagne le manuscrit pour la préparation des solutions mères antibiotiques, calibrateurs et contrôles de qualité, compte tenu de la pureté des antib...

Bien que les antibiotiques ont révolutionné la pratique de la médecine, des infections bactériennes sévères demeurent des principales causes de morbidité et de mortalité dans les maladies graves1. À cet égard, l’administration rapide d’un anti-infectieux adapté à un dosage adéquat est de l’importance supérieure pour maladie contrôle2.
Un corps croissant d’évidence montre que le traitement empirique avec des antibiotiques à large spectre devient de plus en plus problématique avec la complexité des populations de patients. Ceci est particulièrement vrai pour les unités de soins intensifs (USI), où une énorme variabilité interindividuelle des principaux paramètres pharmacocinétiques de (PK) est fréquemment observée3,4. Par conséquent, les patients ICU courent un risque imminent de niveaux sous thérapeutiques avec le danger d’un succès thérapeutique insuffisant5,6. Là encore, les patients sont inutilement exposés à des concentrations d’antibiotique excessivement élevées pouvant entraîner des événements indésirables graves avec aucun des avantages cliniques7. L’abus d’antibiotiques et de la posologie insuffisante ont également alimenté la diffusion de la résistance aux antibiotique, qui devient une menace croissante pour la santé publique8.
D’améliorer l’utilisation des antibiotiques et de préserver leur effectivenessas longtemps que possible, l’Organisation mondiale de la santé a lancé un plan d’action global sur la résistance antimicrobienne en 20159. Programmes d’intendance antibiotiques constituent une pierre essentielle angulaire d’utilisation prudente des antimicrobiens en national de santé publique stratégies10, aider les cliniciens à améliorer sensiblement la qualité des soins aux patients11 et, en même temps, la réduire la résistance aux antibiotiques12. Antimicrobiens chez chaque patient par le biais de l’application du médicament thérapeutique suivi (TDM) est un instrument clé dans ce contexte13.
À ce jour, disponible dans le commerce TDM essais sont uniquement disponibles pour les antibiotiques glycopeptides et aminoglycosides. La quantification des substances des autres classes nécessite généralement un développement de la méthode interne ou une validation qui peut être encombrante. Nous avons, par conséquent, présenter en détail le protocole pour un dosage basé sur la spectrométrie de masse solide qui peut être utilisé pour la quantification des antibiotiques plus pertinents aux soins intensifs au sein de leurs gammes de concentration pertinente clinique14. La méthode a récemment mis en place dans nos installations de spectrométrie de masse et a été appliquée pour la TDM en réanimation de routine depuis lors. La procédure utilise un cadre analytique simple et direct avec un nettoyage uniforme échantillon, permettant la mise en oeuvre rapide des antibiotiques TDM dans de nombreuses installations avec des capacités de spectrométrie de masse.
Le protocole décrit ici a été optimisé pour la quantification du céfépime, méropénem, ciprofloxacine, la moxifloxacine, linézolide et pipéracilline dans le sérum humain, en utilisant la chromatographie liquide (LC) à dilution isotopique en combinaison avec un tandem mass spectrométrie (MS/MS). Pour la dilution isotopique méthodologie LC-MS/MS, composés marqués isotopes stables sont ajoutés à un échantillon d’intérêt avec une matrice spécifique (p. ex., sérum). Isotopes marqués normes peuvent distinguer de leurs homologues non étiquetées, à savoir l’analyte d’intérêt, en raison de différents poids moléculaires de la molécule naturelle et leurs produits de fragmentation, appelés une transition ion-pour-fille-ion parent. Comme composés marqués isotopes ont un comportement physico-chimique globalement presque identique par rapport à leurs homologues non étiquetées, ils sont des étalons internes idéales pour la SM/SM, ce qui permet une quantification de l’analyte presque indépendante de matrice avec un degré élevé de 15de précision. De nos jours, nombreux stables isotopes marqués normes interne qui peuvent être utilisés pour la quantification de petites molécules, y compris la TDM d’antimicrobiens, sont disponibles dans le commerce.
La séparation chromatographique de l’antibiotique analyser dans le protocole décrit est réalisée avec une colonne en phase inversée C8 alkyl-longueur de la chaîne analytique (100 mm x 2,1 mm, 3 µm taille des particules). Au cours du développement de la méthode, les éléments de la matrice normalisée standard interne pour tous les analytes était de 94,6 % à 105,4 %, avec un coefficient de variation de ≤8.3 %14.

<table><tbody><tr><td>chlorhydrate de céfépime</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1097636</td><td>USP Étalon de référence</td></tr><tr><td>méropénème trihydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y0001252</td><td>EP Étalon de référence</td></tr><tr><td>ciprofloxacine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17850</td><td></td></tr><tr><td>chlorhydrate de moxifloxacine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML1581</td><td></td></tr><tr><td>linézolide</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td></td><td></td>L466500</tr><tr><td>pipéracilline sel sodique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93129</td><td></td></tr><tr><td>céfépime-13C12D3 sulfate</td><td>Alsachim</td><td>C1297</td><td>Étalon interne marqué par un isotope pour le mécropénème-D6</td></tr><tr><td></td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>M225617</td><td>Étalon interne marqué par isotope pour le mécopénème</td></tr><tr><td>ciprofloxacine-D8</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>C482501</td><td>Étalon interne marqué d’un isotope pour le chlorhydrate de ciprofloxacine</td></tr><tr><td>moxifloxacine-13C1D3</td> Toronto <td>Research Chemicals</td><td>M745003</td><td>Étalon interne marqué d’un isotope pour la moxifloxacine</td></tr><tr><td>linézolide-D3</td> Toronto <td>Research Chemicals</td><td>L466502</td><td>Étalon interne marqué d’un isotope pour</td></tr> la <tr><td>pipéracilline-D5</td><td>de Toronto Research Chemicals</td><td>P479952</td><td>Étalon interne marqué d’un isotope norme pour pipéracilline</td></tr><tr><td>méthanol</td><td>JT Baker</td><td>8402</td><td></td></tr><tr><td>Eau de qualité HPLC</td><td>JT Baker</td><td>4218</td><td></td></tr><tr><td>Acide formique</td><td>Biosolve</td><td>6914132</td><td></td></tr><tr><td>acide acétique</td><td>Biosolve</td><td>1070501</td><td></td></tr><tr><td>formiate d’ammonium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70221-25G-F</td><td></td></tr><tr><td>tert-Butyl méthyl éther</td><td>Merck</td><td>101845</td><td></td></tr><tr><td>Fortis 3 &mu ; m C8 100 * 2,1 mm</td><td>Fortis</td><td>F08-020503</td><td></td></tr><tr><td>Prifilter enrobé de Ti-PEEK (2 &mu ; m)</td><td>Chromsystems</td><td>15011</td><td></td></tr><tr><td>2795 Système HPLC Alliance</td><td>Waters</td><td>176000491</td><td></td></tr><tr><td>Quattro micro API Tandem Système quadripolaire</td><td>Waters</td><td>720000338</td><td></td></tr><tr><td>QuanLynx 4.1 Logiciel</td> d’évaluation <td>Waters</td><td>/</td><td>Data fourni par le fabricant du spectromètre</td></tr><tr><td>de</td><td></td><td></td><td></td></tr> masse</tbody></table>

multiplex suivi thérapeutique pharmacologique par dilution isotopique hplc-ms/ms des antibiotiques dans les maladies graves

Multiplex Therapeutic Drug Monitoring by Isotope-dilution HPLC-MS/MS of Antibiotics in Critical Illnesses

Il y a une demande croissante pour le suivi thérapeutique pharmacologique des antibiotiques dans de nombreuses installations cliniques, en particulier en ce qui concerne la mise en œuvre de programmes d’intendance aux antibiotiques de l’hôpital.
Dans les travaux en cours, nous présentons un Protocole multiplex haute performance liquid chromatography-spectrométrie de masse (HPCL-MS/MS) pour la quantification du céfépime, méropénem, ciprofloxacine, la moxifloxacine, linézolide et pipéracilline, couramment utilisés antibiotiques dans les unités de soins intensifs. La méthode était déjà complètement validée conformément aux lignes directrices de l’Agence européenne des médicaments.
Après un nettoyage rapide d’échantillon, les analytes sont séparés sur une colonne CLHP en phase inverse C8 en 4 minutes et quantifiés avec stables isotopes marqués internes normes correspondantes dans électrospray (ESI +) spectrométrie de masse en réaction multiples le temps de surveillance (MRM). La méthode présentée utilise une instrumentation simple offrant des conditions chromatographiques uniformes, ce qui permet le suivi quotidien et robuste thérapeutique antibiotique dans les laboratoires cliniques. La courbe d’étalonnage s’étend sur la plage de concentration pharmacocinétiques, donc y compris les montants antibiotiques à proximité de la concentration minimale inhibitrice (CMI) des bactéries sensibles et les concentrations maximales (Cmax) qui sont obtenues avec un bolus schémas d’administration. Sans la nécessité de la dilution du sérum avant le nettoyage de l’échantillon, l’aire sous la courbe pour un antibiotique administré peut être obtenue par le biais de mesures multiples.

En utilisant le protocole décrit, un chromatogramme typique est représenté sur la Figure 2. Selon l’United States Pharmacopeia (USP) chromatographie lignes directrices16, le volume mort de colonne dans le système actuel a été déterminé avec ~0.22 mL et le volume de la colonne extra (y compris l’injecteur, tuyaux et connecteurs) avec ~0.08 mL, ce qui donne un volume de braquage de ~0.30 mL. Les facteurs de rétention calculée pour tous l...

Nous présentons ici un protocole de basé sur la spectrométrie de masse en tandem pour la quantification des antibiotiques fréquemment utilisés dans les unités de soins intensifs, nommément céfépime, méropénem, ciprofloxacine, la moxifloxacine, linézolide et pipéracilline.

Multiplex suivi thérapeutique pharmacologique par dilution isotopique HPLC-MS/MS des antibiotiques dans les maladies graves

There is an ever-increasing demand for the therapeutic drug monitoring of antibiotics in many clinical facilities, particularly with regard to the ...

La surveillance thérapeutique des antibiotiques est de plus en plus reconnue comme un élément important pour la mise en œuvre de programmes nationaux et locaux de gestion des antibiotiques. Pour répondre à cette demande croissante de surveillance des antibiotiques thérapeutiques dans les établissements médicaux, nous présentons un protocole de quantification des antibiotiques en circulation qui vise à ajuster la posologie à la sensibilité des agents pathogènes impliqués. Le protocole présenté basé sur la spectrométrie de masse a été optimisé pour la quantification des antibiotiques les plus couramment utilisés dans les unités de soins intensifs, à savoir le céfépime, le méropénème, la ciprofloxacine, la moxifloxacine, le linézolid et la pipéracilline.En raison de la large plage d’étalonnage, la méthode peut également être utilisée pour calculer l’aire pharmacocinétique sous la courbe d’un antibiotique administré. Avec un délai d’exécution total d’environ 30 minutes, le protocole présenté est adapté à la surveillance quotidienne des antibiotiques thérapeutiques dans les laboratoires cliniques. Épilez d’abord neuf volumes de sérum sans médicament avec un volume de solutions de pointe

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Non ciblée métabolomique fournit une hypothèse générer instantané d'un profil métabolique. Ce protocole démontrera l'extraction et l'analyse des métabolites provenant de cellules, le sérum ou les tissus. Une gamme de métabolites sont interrogés par extraction en phase liquide-liquide, microflow UltraPerformance chromatographie liquide / haute résolution spectrométrie de masse (UPLC-HRMS) couplé à un logiciel d'analyse différentielle.

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Nous décrivons ici un test de chromatographie liquide-spectrométrie de masse en tandem (HPLC-MS/MS) à haute performance pour quantifier l’immunosuppresseur tacrolimus dans des taches de sang séché à l’aide d’une simple étape manuelle de précipitation des protéines et d’une extraction en colonne en ligne.

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marquage isotopique de précurseur combiné et le marquage isobare (cPILOT) est une stratégie de protéomique quantitative qui améliore les capacités de multiplexage échantillon d'étiquettes isobares. Ce protocole décrit l'application de cPILOT aux tissus à partir d'un modèle de souris de la maladie d'Alzheimer et les contrôles de type sauvage.

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Nous décrivons ici un protocole à l’aide de microdissection de saisie de laser couplée à l’analyse de LC/MS dans l’espace-quantifier des distributions de médicaments au sein des granulomes de tuberculose pulmonaire. L’approche a largement applicables à la quantification des concentrations du médicament dans les tissus à haute détails spatiaux.

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Nous décrivons ici une méthode de haut-débit pour la surveillance des médicaments complète qui permet la résolution améliorée et la détection de grands panneaux de drogues d’abus et de leurs métabolites, avec contrôle de la qualité basé sur l’injection multisegment-capillaire spectrométrie de masse à l’électrophorèse.

Surveillance des médicaments haut débit et complet à l’aide de la spectrométrie de masse de l’électrophorèse capillaire-Injection Multisegment

L’étiquetage isotopique combiné des précurseurs et le marquage isobarique (cPILOT) est une stratégie améliorée de multiplexage d’échantillons qui est capable d’augmenter le nombre d’échantillons qui peuvent être analysés simultanément avec les étiquettes isobariques disponibles. L’incorporation d’une plate-forme robotique a considérablement augmenté le débit expérimental, la reproductibilité et la précision quantitative.

Multiplexage automatisé de l’échantillon à l’aide de l’étiquetage isotopique combiné des précurseurs et du marquage isobarique (cPILOT)

La spectroscopie par résonance magnétique nucléaire (RMN) est utilisée pour identifier la dérégulation des métabolites chez les patients atteints de diverses maladies. Cette technique permet de quantifier les métabolites dérangés, démêlant ainsi les informations physiopathologiques. Ici, nous décrivons la procédure étape par étape de l’approche basée sur la RMN pour la caractérisation métabolique des patients.

Identification et quantification des métabolites dérangés chez les patients gravement malades à l’aide de la métabolomique basée sur la RMN

Découvrez une méthode HPLC-MS/MS par dilution isotopique pour le suivi thérapeutique pharmacologique des antibiotiques en réanimation. Ce protocole permet d'ajuster les dosages selon la sensibilité des pathogènes en 30 minutes.

Multiplex suivi thérapeutique pharmacologique par dilution isotopique HPLC-MS/MS des antibiotiques dans les maladies graves

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