PCR quantitative du bactériophage T7 de criblage

Cette méthode pourrait aider à résoudre les problèmes clés dans les domaines de la virologie et de la microbiologie liés à l’énumération des bactériophages à partir d’échantillons complexes et de diagnostics et thérapeutiques à base de bactériophage. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet une quantification efficace et précise du temps d’un grand nombre d’échantillons provenant d’expériences de biopannage d’affichage de phages qui ne sont pas réalisables avec les essais traditionnels. Rashmi Mohanty et Jasmim Leal, étudiants diplômés de mon laboratoire, démontreront la procédure.

Après avoir conçu les amorces et créé une concentration de stock, obtenir l’ADN de phage T7 de référence à une concentration de 0,1 microgramme par microlitre. En utilisant de l’eau ultrapure, diluer en série cet ADN décuplé, d’un million de femtogrammes par microlitre à un femtogramme par microlitre dans des tubes PCR de 0,2 millilitre. Préparer 20 microlitres de chaque concentration, en s’assurant de changer les pointes de pipette et vortex les tubes entre chaque étape de la dilution.