Détection de l’activité de la Phospholipase C dans l’homogénat de cerveau de l’abeille
14 septembre 2018
Pour tester les effets inhibiteurs des agents pharmacologiques sur la phospholipase C (PLC) dans différentes régions du cerveau de l’abeille, nous présentons une analyse biochimique pour mesurer l’activité du PLC dans ces régions. Cet essai pourrait être utile pour comparer l’activité PLC entre les tissus, ainsi que chez les abeilles présentant des comportements différents.
Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences telles que si et comment les activités du PLC dans différentes régions du cerveau sont impliquées dans la fonction cérébrale de l’abeille. Le principal avantage de cette technique est que les chercheurs peuvent facilement préformer une expérience avec les installations de laboratoire standard que ce protocole ne nécessite que des manipulations de base. Pour commencer, placez un tube de 50 ml contenant des abeilles sur la glace pendant 30 minutes pour anesthésier les abeilles. Ensuite, préparez l’étape de dissection en pliant un morceau de cire dentaire en deux et en le plaçant dans un plat en plastique. Au microscope binoculaire, utiliser des pinces à épiler pour séparer la tête de l’abeille de son corps. Ensuite, fixez la tête sur la cire dentaire et insérez des épingles à insectes à la base de chaque antenne pour maintenir l’intérieur de la tête en position ascendante. Ensuite, versez suffisamment de solution saline sur la tête pour la couvrir. À l’aide d’une pince à épiler, retirez l’antenne. Après cela, utilisez un scalpel pour faire une coupe horizontale près des bases de l’antenne et une coupe longitudinale à la frontière des yeux composés. Faire une coupe horizontale en haut de la tête et enlever la cuticule pour ouvrir une fenêtre sur le cerveau. Ensuite, utilisez des pinces à épiler pour enlever l’œil de retin de l’ossicle et la trachée de la surface intérieure du cerveau. Ensuite, insérez les pinces directement sous la cuticule oculaire pour enlever le tissu conjonctif entre la cuticule des yeux composés et l’œil de retin. Après cela, enlever la cuticule et l’œil de retin des yeux composés. Ensuite, utilisez la pince à épiler pour enlever soigneusement le reste de la trachée de la surface intérieure du cerveau. Ensuite, couper le tissu conjonctif entre le cerveau et autour des tissus et disséquer le cerveau de la capsule de la tête. À l’aide de la pince à épiler, peler la trachée de la surface postérieure du cerveau. Ensuite, utilisez un scalpel pour couper la connexion entre les corps de champignons ou MBs et d’autres régions du cerveau à côté des lobes verticaux. Placez les BM disséqués et les tissus cérébraux restants dans des tubes de 1,5 ml et congelez-les rapidement avec de la glace sèche. Tout d’abord, ajouter 10ml de tampon d’homogénéisation au tissu cérébral gelé. Utilisez une peselle en plastique pour homogénéiser manuellement le tissu dans le tube de 1,5 ml. Après cela, transférer la solution tissulaire homogénéisée au tissu suivant dans le lot et répéter le processus d’homogénéisation. Ensuite, ajouter 30
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Aperçu
Cette étude présente un dosage biochimique conçu pour mesurer l'activité de la phospholipase C (PLC) dans différentes régions du cerveau de l'abeille. Le dosage vise à faciliter la comparaison de l'activité PLC entre divers tissus et parmi des abeilles présentant des comportements variés.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Biochimie
- Biologie du comportement
Contexte
- La phospholipase C (PLC) joue un rôle crucial dans la signalisation cellulaire.
- La compréhension de l'activité de la PLC peut fournir des informations sur le fonctionnement cérébral et le comportement.
- Les abeilles sont utilisées comme organisme modèle pour l'étude des processus neurobiologiques.
- Des études comparatives peuvent révéler comment différents comportements influencent l'activité de la PLC.
Objectif de l'étude
- Développer un dosage fiable pour mesurer l'activité de la PLC dans les régions cérébrales de l'abeille domestique.
- Comparer l'activité de la PLC entre différents tissus.
- Étudier la relation entre l'activité de la PLC et le comportement de l'abeille.
Méthodes utilisées
- Développement de tests biochimiques pour la mesure de l'activité de la PLC.
- Prélèvement d'échantillons à partir de différentes régions cérébrales d'abeilles.
- Analyse quantitative des niveaux d'activité de la PLC.
- Évaluations comportementales des abeilles afin de les corréler avec l'activité de la PLC.
Résultats principaux
- Mesure réussie de l'activité de la PLC dans différentes régions cérébrales.
- Des variations de l'activité de la PLC ont été observées chez des abeilles présentant des comportements différents.
- Le test a démontré sa fiabilité pour les études comparatives.
- Les résultats suggèrent un lien entre l'activité de la PLC et les différences comportementales.
Conclusions
- Le test mis au point est un outil précieux pour la recherche en neurosciences.
- La compréhension de l'activité de la PLC peut approfondir les connaissances sur le comportement des abeilles.
- De futures études pourraient explorer les implications de l'activité de la PLC chez d'autres espèces.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle dans l'industrie
La détection quantitative de l'activité de la phospholipase C (PLC) dans des régions cérébrales spécifiques permet de réduire les risques mécanistiques liés aux hypothèses sur la signalisation neuronale dans les systèmes modèles. Ce protocole soutient la validation précoce des cibles en reliant l'activité biochimique à la fonction cérébrale propre à chaque région, éclairant ainsi la continuité translationnelle entre les phénotypes moléculaires et comportementaux. L'approche offre une plateforme d'analyse évolutive et non radioactive pour la neurobiologie comparative et l'interrogation pharmacologique.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Permet d'étudier la PLC comme cible fonctionnelle dans les circuits neuronaux liés au comportement.
- Contribue à l'atténuation des risques biologiques en quantifiant l'activité enzymatique dans des régions cérébrales distinctes.
- Facilite une corrélation prédictive entre les cibles moléculaires et les phénotypes d'ordre supérieur.
Développement de tests et criblage
- Propose un système d'essai fluorogène validé pour la mesure de l'activité de la PLC dans des homogénats tissulaires.
- Permet une quantification reproductible de la modulation pharmacologique de l'activité de la PLC.
- Facilite la standardisation et l'extensibilité de l'essai pour le criblage de composés dans des contextes neurobiologiques.
Recherche translationnelle et préclinique
- Associe les données biochimiques aux phénotypes comportementaux chez un organisme modèle.
- Permet une continuité entre la découverte moléculaire et la validation préclinique de cibles neuronales.
- Facilite l'avancement ajusté au risque de composés neuroactifs fondé sur des preuves mécanistiques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ce dosage de l'activité de la PLC s'inscrit dans la phase initiale de découverte jusqu'au continuum préclinique, permettant la vérification d'hypothèses et la validation pharmacologique dans des modèles de tissu nerveux.
- Biologie de la découverte : Quantifie l'activité de la PLC afin de préciser son implication dans les voies fonctionnelles du cerveau.
- Écrantage : Fournit des résultats quantitatifs reproductibles pour l'évaluation d'agents pharmacologiques.
- Analytique : Propose des mesures basées sur la fluorescence permettant des comparaisons directes entre régions cérébrales et conditions expérimentales.
- Recherche translationnelle : Établit un lien entre l'activité moléculaire et les résultats comportementaux dans les systèmes modèles.
- Réutilisation en milieu professionnel : Offre un test non radioactif largement applicable pour diverses études en neurobiologie.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive dans la validation des cibles neuronales et la réduction des risques mécanistiques.
- Valeur opérationnelle : Simplifie la réalisation des tests grâce à une infrastructure de laboratoire standard et à des réactifs plus sûrs.
- Valeur stratégique : Améliore les décisions d'aller/arrêt en reliant l'activité biochimique aux résultats fonctionnels.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque des cibles et composés neuroactifs.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en neuroanatomie et en dissection tissulaire pour un prélèvement spécifique aux régions.
- Requiert un accès à des lecteurs de plaques à fluorescence et à des réactifs biochimiques standards.
- Exige une standardisation interéquipes pour la reproductibilité des tests et la comparabilité des données.
- Peut être adapté à d'autres systèmes modèles moyennant une optimisation du protocole selon le type de tissu.
- Des interférences potentielles dues à la fluorescence endogène ou à l'absorbance du tissu doivent être contrôlées.
Foire aux questions en biopharmacie
Chapters in this video
0:04
Title
0:39
Dissection of the Honeybee Brain
2:59
Preparation of Brain Homogenates
4:21
PLC Reaction in Brain Homogenates
5:28
Detection of Fluorescence Resulting from PLC Activity
5:56
Results: PLC Activities With and Without PLC Inhibitors in the Mushroom Bodies and Other Brain Regions
7:25
Conclusion
