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DOI: 10.3791/58192-v
Ivanna Karina Olivares-Marin1, Juan Carlos González-Hernández2, Carlos Regalado-Gonzalez1, Luis Alberto Madrigal-Perez3
1Department of Chemistry,Universidad Autónoma de Querétaro, 2Department of Biochemical Engineering,Instituto Tecnológico de Morelia, 3Department of Biochemical Engineering,Instituto Tecnológico Superior de Ciudad Hidalgo
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Nous présentons ici un protocole afin d’évaluer le métabolisme respiratoire et fermentatif en ajustant la croissance exponentielle des Saccharomyces cerevisiae à l’équation de croissance exponentielle. Calcul des paramètres cinétiques permet le dépistage des influences de substances/composés sur la fermentation ou la respiration mitochondriale.
Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines biotechnologiques et biomédicaux tels que la base moléculaire derrière les effets de Warburg et de Crabtree. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet l’étude à haut débit des effets de certaines substances dans le métabolisme respiratoire et fermentatif. Commencez par inoculer un tube conique de 15 millilitres contenant trois millilitres de cellules de levure froides et stériles d’extrait de levure peptone dextrose, ou bouillon YPD, avec 250 microlitres de cellules de levure S.cerevisiae conservés en glycérol à 20 degrés Celsius négatifs.
Incuber la levure pendant la nuit dans un shaker orbital à 30 degrés Celsius et 200 rpm. pour strier sur un plat petri rempli d’agar de 60 millilitres et de 2 %, le lendemain matin. Culture du plat à 30 degrés Celsius jusqu’à ce que des colonies isolées soient observées.
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