Name: Évaluation globale de l’efficacité et l’innocuité de la délivrance de médicaments ciblés Placenta en utilisant trois méthodes complémentaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Découvrez une méthode d'évaluation de la délivrance de médicaments ciblés placenta utilisant l'imagerie in vivo, l'échographie haute fréquence et la HPLC chez la souris gestante. Cette technique permet un suivi en temps réel et une mesure précise pour la nanomédecine.

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Ce travail a été soutenu par des subventions de la Fondation nationale des Sciences naturelles (81771617) et les sciences naturelles Fondation la Province du Guangdong (2016A030313178) attribué à X.F. ; une subvention provenant du Fonds de recherche fondamentale Shenzhen (JCYJ20170413165233512) attribué à X.F ; Développement humain de la National Institutes of Health, sous attribution numéro R01HD088549 et Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health (le contenu est la seule responsabilité des auteurs et ne représentent pas nécessairement l’officiel vues de la National Institutes of Health) à N.N.

Toutes les expériences de souris scrupuleusement les protocoles (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232) approuvés par la protection des animaux et utilisation Comité de Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Académie chinoise des Sciences.
1. synthèse de nanoparticules de polymère lipidique A ciblé placentaire Sulfate de chondroïtine
<ol><li>Synthétiser des nanoparticules de lipide-polymère MTX - et ICG-chargés (MNPs et INPs respectivement) et plCSA-BP-conjugué des nanoparticules (plCSA-MNPs et plCSA-INPs) comme décrit en détaillent ailleurs18.</li>
</ol>2. in vivo d’imagerie par Fluorescence
<ol><li>
Préparation des souris enceintes
	<ol>
<li>Placer les femelles souris CD-1 (8-12 semaines) avec un mâle fertile de la même souche dans une cage (mâle : femelle = 1:2) dans l’après-midi et la vérification vaginale branche suit matin. Si on observe un plug vaginal, qualifier la souris embryonnaire jour 0.5 (E0.5).</li>
		<li>Souris enceintes maison seuls dans une chambre exempts de micro-organismes pathogènes animale avec un h de lumière/10 14 h obscurité cycle et donnent librement accès à la nourriture et l’eau jusqu'à E14.5.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Injection intraveineuse de nanoparticules
	<ol>
<li>Avant l’intervention, stériliser les nanoparticules par filtration à travers un filtre de seringue 0,22 μm. Peser la souris enceinte à E11.5 pour déterminer la quantité et le volume d’injection de nanoparticules. Remarque : Le volume d’injection de nanoparticules doit être inférieure à 1 % (poids/volume) du poids du corps de la souris enceinte. Par exemple, le volume d’injection de nanoparticules doit être inférieur à 0,25 mL chez une souris de 25 g.</li>
		<li>Pour dilater la veine caudale, chauffer la queue pendant 5-10 min avec un coussin chauffant.</li>
		<li>Avant l’injection, aspirer l’INPs ou plCSA-INPs dans une seringue à insuline 28 g.</li>
		<li>Transférer la souris enceinte à un dispositif de maintien qui retient la souris tout en permettant l’accès à la veine caudale. Nettoyer la queue avec un tampon imbibé d’alcool. Puis insérer la seringue dans la veine caudale. Injecter lentement l’INPs ou plCSA-INPs (équivalent ICG 5 mg/kg) avec une pression uniforme sur 5-10 s. Remarque : S’arrêter si une cloque apparaît sur la queue, car ce résultat indique que l’aiguille n’est pas dans la veine de l’injection. Seringues ne doivent pas être partagées entre les souris pour réduire au minimum la transmission de la maladie et la contamination croisée.</li>
		<li>Enregistrer le temps d’injection. Pendant ce temps, appliquez une légère pression sur le site d’injection jusqu'à l’arrêt du saignement, qui prend normalement de 30 à 60 s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Imagerie in vivo 
	<ol>
<li>30 min après l’injection, les souris enceintes utilisant la fluorescence in vivo , système d’imagerie d’image.</li>
		<li>Anesthésier les souris enceintes avec un débit d’oxygène de 1,0 L/min et isoflurane à 2-4 % dans une enceinte associée de l’unité d’anesthésie et vérifier l’anesthésie complète de lents et une respiration régulière. Puis, les déplacer dans la chambre d’imagerie. Placez les souris enceintes anesthésiés dans la chambre d’imagerie, de garder les animaux en position couchée.</li>
		<li>Placez un cône de nez sur la bouche et le nez pour permettre à l’inhalation de 1 à 2 % isoflurane avec un débit d’oxygène de 1,0 L/min pour maintenir l’anesthésie.</li>
		<li>Sélectionnez Paramètres 2D-fluorescence et photographiques afin d’imager les signaux de fluorescence ICG. Régler l’exposition auto et les longueurs d’onde d’excitation/émission de 710/820 nm.</li>
		<li>À la fin de la procédure d’imagerie, éteignez l’afflux d’isoflurane pour arrêter l’anesthésie et les souris enceintes soigneusement regagner leur cage.</li>
		<li>48 h après l’injection de nanoparticules, anesthésier les souris enceintes avec isofluorane et puis sacrifier le barrage par dislocation cervicale. Ramassez les foetus et les placentas avec une pincette de Graefe, Graefe forceps de tissue et ciseaux de dissection.</li>
		<li>Placer le placenta et le fœtus dans la chambre d’imagerie et l’image à l’aide de la méthode décrite à l’étape 2.3.4.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. HFUS évaluation du développement embryonnaire
<ol><li>
Modèles animaux
	<ol>
<li>Obtenir et préparer les souris enceintes comme indiqué au point 2.1.</li>
		<li>Utilisez HFUS à des souris enceintes image à 6,5 E (protocoles 3.2 et 3.3.3). Tout d’abord, confirmer la grossesse en visualisant les embryons jour E6.5 et puis au hasard d’allouer les souris enceintes en trois groupes : le groupe MNP, MNP-plCSA groupe et groupe de solution saline tamponnée au phosphate (PBS).</li>
		<li>Injecter le PBS, MNPs ou plCSA-MNPs (1 mg/kg équivalent MTX) dans les veines de la queue des souris enceintes tous les deux jours à partir de E6.5 comme indiqué au point 2.2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Préparation pour l’imagerie
	<ol>
<li>24 h après l’injection de nanoparticules, image les souris enceintes à l’aide de la HFUS système d’imagerie.</li>
		<li>Anesthésier les souris enceintes comme indiqué au point 2.3.2. Activer les contrôles de température intégré de la plate-forme d’imagerie et de préchauffer la plate-forme à 37 et 42 ° C. Fixez les souris enceintes dans une position en décubitus dorsal sur la plate-forme à l’aide de ruban adhésif.</li>
		<li>Place du cône de nez connecté à l’appareil d’anesthésie sur le museau. Appliquer 2 % isoflurane avec un débit d’oxygène de 1,0 L/min à maintenir stable anesthésie.</li>
		<li>Enlever les poils de l’abdomen à l’aide d’une crème dépilatoire chimiquement. Effacer la crème résiduelle soigneusement avec de la gaze imbibée d’eau et ensuite enduire acoustique gel de couplage de l’abdomen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Procédure d’imagerie
	<ol>
<li>Placer le transducteur de 40 MHz dans le bras mécanique.</li>
		<li>Ajustez la position du transducteur pour obtenir des images longitudinales du fœtus et du placenta avec la région d’intérêt situé dans la zone focale.</li>
		<li>
Analyse et imagerie en Mode B Remarque : Voir film 1.<ol>
<li>Cliquez sur le bouton Mode B et baisser le transducteur sur l’abdomen jusqu'à ce que le fœtus et le placenta entreront en vue. Appuyez sur Scan/gel pour lancer/arrêter d’imagerie, appuyez sur Cine stocker pour stocker la boucle ciné et appuyez sur trame de stocker pour stocker des images de trame.</li>
			<li>Cliquez sur le bouton de mesure pour analyser la longueur sac gestationnel (GS), longueur de croupe Couronne foetale (CRL), diamètre biparietal (BPD), circonférence abdominale (AC), diamètre placentaire (DP) et l’épaisseur placentaire (PT).</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Analyse et imagerie Doppler-PW Remarque : Voir film 1.<ol>
<li>En utilisant le même scan projection, cliquez sur le bouton PW , placez la zone de volume d’échantillonnage dans le centre de l’artère ombilicale et appuyez sur Scan/gel pour initier l’imagerie. Cliquez sur Cine stocker afin de recueillir des images de l’artère ombilicale.</li>
			<li>Cliquez sur le bouton de mesure pour calculer la vitesse de pointe de l’artère ombilicale (UA).</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Analyse et imagerie en mode Doppler couleur
		<ol>
<li>En utilisant le même scan projection, cliquez sur le bouton de couleur et ajuster la position du transducteur pour obtenir des images du coeur foetal. Appuyez sur Scan/gel pour initier l’imagerie et Cine stocker pour recueillir des images.</li>
			<li>Cliquez sur le bouton de mesure pour calculer le rythme cardiaque fœtal (HR).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. analyse par CLHP
<ol><li>
Préparation du tissu
	<ol>
<li>Injecter les souris enceintes avec une dose unique de MNPs ou plCSA-MNPs (équivalent MTX 1 mg/kg) à la fin de grossesse (par exemple., E14.5) comme indiqué au point 3.1.3.</li>
		<li>Après 24h, anesthésier les souris par une injection intrapéritonéale d’avertin à 240 μg/poids (g). S’assurer que pas de réponse à une pincée de pied pour vérifier que les souris sont complètement anesthésiés.</li>
		<li>Vaporiser la région de la poitrine avec 75 % d’éthanol. Effectuer la perfusion cardiaque (couper les oreillettes droites et perfuse par le ventricule gauche) comme décrit dans le détail19,20 avec 50 mL de sérum physiologique 0,9 % glacée pendant 10 min enlever des nanoparticules non liés.</li>
		<li>Euthanasier le barrage. Faire une césarienne pour collecter le foetus et le placenta avec une pincette de Graefe, disséquant les ciseaux et pinces à tissus Graefe et stocker les tissus à-80 ° C avant l’analyse.</li>
		<li>Préparer la solution d’homogénéisation (10 % d’acide perchlorique) et continuer sur la glace. Recueillir environ 200 mg de tissu et ajouter 500 μl de solution d’homogénéisation à chaque échantillon. Homogénéiser les échantillons à l’aide d’un homogénéisateur à pleine vitesse pour 30 s et répéter cette procédure deux fois.</li>
		<li>Centrifuger les échantillons à 14 000 x g pendant 20 min à 4 ° C. Filtrer le surnageant (environ 300 μL) à travers un filtre de 0,45 μm de seringue et transférer le liquide obtenu dans un flacon HPLC. Placer les flacons d’échantillon dans un bac d’échantillonneur automatique pour injection.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Élaboration de normes
	<ol>
<li>Préparer la solution suivante pour la phase mobile : acétonitrile (88:12, v/v) et 40 mM potassium phosphate dibasique (pH 4,5). Filtrer la solution à travers un filtre de seringue de taille de pore 0,45 μm et transférer le liquide obtenu dans une bouteille propre de réservoir HPLC. Remarque : Ajuster le pH à 0,1 M d’acide phosphorique. Utiliser la vibration ultrasonique pendant 15 min pour dégazer la phase mobile chaque fois avant d’utiliser.</li>
		<li>Peser 10 mg du MTX dans un tube à centrifuger 1,5 mL. Ajouter 1 mL d’hydroxyde de sodium 1 M.</li>
		<li>Vortex à grande vitesse jusqu'à ce que le MTX se dissout complètement. Note : Ceci est l’étalon primaire et peut être conservé à-20 ° C pendant plusieurs mois.</li>
		<li>Pour créer l’étalon secondaire de MTX (500 μg/mL), diluer 50 μL de l’étalon primaire de 950 μL de la phase mobile. Remarque : Conserver sur la glace jusqu'à l’utilisation et de préparer les frais du jour. Il est important d’utiliser la phase mobile pour l’élaboration de normes afin d’éviter les pics résultant du mélange des solutions dissemblables après injection de l’échantillon.</li>
		<li>Apporter de nouvelles dilutions pour créer les normes (tableau 1). Stocker les normes sur la glace et préparer les frais du jour. Exécuter les normes en série avec les échantillons expérimentaux.</li>
	</ol>
</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Nombre</td>
			<td>Concentration finale (μg/mL)</td>
			<td>500 μg/mL norme μL</td>
			<td>Phase(μL) mobile</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>0,5</td>
			<td>1</td>
			<td>999</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>998</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>2.5</td>
			<td>5</td>
			<td>995</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>10</td>
			<td>20</td>
			<td>980</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>25</td>
			<td>50</td>
			<td>950</td>
		</tr>
<tr>
<td>6</td>
			<td>50</td>
			<td>100</td>
			<td>900</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td>100</td>
			<td>200</td>
			<td>800</td>
		</tr>
</tbody></table>Tableau 1. Préparation de la courbe d’étalonnage pour MTX. La concentration finale de solution étalon de MTX est de 0,5 à 100 μg/mL.
<ol start="3"><li>
Instrumentation HPLC et paramètres d’opération Remarque : Les échantillons ont été analysés sur un système HPLC équipé d’une pompe solvant, un détecteur par spectrophotométrie UV (313 nm) et une colonne C18 (250 × 4.6 mm, taille des particules 5 μm).<ol>
<li>Allumez le dégazeur HPLC pour chasser l’air du système. Tournez le flux, l’équilibration de la colonne avec la phase mobile pendant 30 min réduire le bruit de la ligne de base.</li>
		<li>Régler la température de la colonne à 25 ° C, injecter 20 volumes d’échantillon μL à un débit de 1 mL/min, puis cliquez sur la Méthode Run pour démarrer l’analyse.</li>
		<li>Lorsque les essais sont terminés, modifier manuellement la phase mobile d’acétonitrile qualité HPLC. Fonctionner pendant environ 15 min protéger le système. Remarque : Pour effectuer cette étape suivant la durée recommandée peut entraîner des dommages à la colonne.</li>
		<li>Pour une analyse quantitative, calculer les aires sous les pics MTX standards d’intérêt en utilisant le logiciel de système de CLHP.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Rodger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Association+of+Factor+V+Leiden+and+Prothrombin+Gene+Mutation+and+Placenta-Mediated+Pregnancy+Complications%3A+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis+of+Prospective+Cohort+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies.</a> PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).</li>
<li>Rodger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+thrombophilia+and+pregnancy+complications+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+%26+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Inherited thrombophilia and pregnancy complications revisited.</a> Obstetrics & Gynecology. 112 (2 Pt 1), 320-324 (2008).</li>
<li>Brenner, B., Aharon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombophilia+and+adverse+pregnancy+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Thrombophilia and adverse pregnancy outcome.</a> Clinics in Perinatology. 34 (4), 527-541 (2007).</li>
<li>Fisk, N. M., McKee, M., Atun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relative+and+absolute+addressability+of+global+disease+burden+in+maternal+and+perinatal+health+by+investment+in+R%26D%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Medicine+%26+International+Health%22%5BJournal%5D)">Relative and absolute addressability of global disease burden in maternal and perinatal health by investment in R&D.</a> Tropical Medicine & International Health. 16 (6), 662-668 (2011).</li>
<li>Fisk, N. M., Atun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Market+failure+and+the+poverty+of+new+drugs+in+maternal+health%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Market failure and the poverty of new drugs in maternal health.</a> PLOS Medicine. 5 (1), e22(2008).</li>
<li>Kaitu'u-Lino, T. uJ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticle+delivery+of+doxorubicin+into+placental+tissues+to+treat+ectopic+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticle delivery of doxorubicin into placental tissues to treat ectopic pregnancies.</a> Endocrinology. 154 (2), 911-919 (2013).</li>
<li>King, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-homing+peptides+as+tools+for+targeted+delivery+of+payloads+to+the+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Tumor-homing peptides as tools for targeted delivery of payloads to the placenta.</a> Science Advances. 2 (5), e1600349(2016).</li>
<li>Beards, F., Jones, L. E., Charnock, J., Forbes, K., Harris, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+Homing+Peptide-microRNA+Inhibitor+Conjugates+for+Targeted+Enhancement+of+Intrinsic+Placental+Growth+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placental Homing Peptide-microRNA Inhibitor Conjugates for Targeted Enhancement of Intrinsic Placental Growth Signaling.</a> Theranostics. 7 (11), 2940-2955 (2017).</li>
<li>Cureton, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+Targeting+of+a+Novel+Vasodilator+to+the+Uterine+Vasculature+to+Treat+Impaired+Uteroplacental+Perfusion+in+Pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Selective Targeting of a Novel Vasodilator to the Uterine Vasculature to Treat Impaired Uteroplacental Perfusion in Pregnancy.</a> Theranostics. 7 (15), 3715-3731 (2017).</li>
<li>Paul, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+the+human+and+mouse+uterus+using+immunoliposomes+targeted+to+the+oxytocin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to the human and mouse uterus using immunoliposomes targeted to the oxytocin receptor.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (3), e281-e283 (2017).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 8 (10), 2765-2781 (2018).</li>
<li>Fan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+monitoring+of+placenta-specific+transgene+expression+by+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Noninvasive monitoring of placenta-specific transgene expression by bioluminescence imaging.</a> PloS One. 6 (1), e16348(2011).</li>
<li>Murata, M., Tahara, K., Takeuchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+in+vivo+imaging+of+surface-modified+liposomes+to+evaluate+their+behavior+after+pulmonary+administration%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Real-time in vivo imaging of surface-modified liposomes to evaluate their behavior after pulmonary administration.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 86 (1), 115-119 (2014).</li>
<li>Ito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+whole-body+multimodality+imaging+of+gastric+cancer+peritoneal+metastasis+combining+fluorescence+imaging+with+ICG-labeled+antibody+and+MRI+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastric+Cancer%22%5BJournal%5D)">New whole-body multimodality imaging of gastric cancer peritoneal metastasis combining fluorescence imaging with ICG-labeled antibody and MRI in mice.</a> Gastric Cancer. 17 (3), 497-507 (2014).</li>
<li>Mazza, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome-Indocyanine+Green+Nanoprobes+for+Optical+Labeling+and+Tracking+of+Human+Mesenchymal+Stem+Cells+Post-Transplantation+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Liposome-Indocyanine Green Nanoprobes for Optical Labeling and Tracking of Human Mesenchymal Stem Cells Post-Transplantation In Vivo.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (21), (2017).</li>
<li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PloS One. 8 (10), e77205(2013).</li>
<li>Spurney, C. F., Leatherbury, L., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+ultrasound+database+profiling+growth%2C+development%2C+and+cardiovascular+function+in+C57BL%2F6J+mouse+fetuses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">High-frequency ultrasound database profiling growth, development, and cardiovascular function in C57BL/6J mouse fetuses.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 17 (8), 893-900 (2004).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.jove.com/video/58209/synthesis-characterization-placental-chondroitin-sulfate-plcsa">Synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate A (plCSA) -targeting lipid-polymer nanoparticles.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2018).</li>
<li>Devraj, K., Guerit, S., Macas, J., Reiss, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+In+Vivo+Blood-brain+Barrier+Permeability+Assay+in+Mice+Using+Fluorescently+Labeled+Tracers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), (2018).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mononuclear+cells+from+the+central+nervous+system+of+rats+with+EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mononuclear cells from the central nervous system of rats with EAE.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 527(2007).</li>
<li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology. 20 (3), 180-193 (2005).</li>
<li>Frangioni, J. V. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1367593103001091">In vivo near-infrared fluorescence imaging.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 7 (5), 626-634 (2003).</li>
<li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kuhl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Biology+and+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38(2014).</li>
<li>Khankin, E. V., Hacker, M. R., Zelop, C. M., Karumanchi, S. A., Rana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+high-frequency+ultrasonography+to+evaluate+cardiovascular+and+uteroplacental+blood+flow+in+mouse+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Pregnancy+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Intravital high-frequency ultrasonography to evaluate cardiovascular and uteroplacental blood flow in mouse pregnancy.</a> Pregnancy Hypertension. 2 (2), 84-92 (2012).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatric Research. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
<li>Pallares, P., Gonzalez-Bulnes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+ultrasonographic+characterization+of+phenotypic+changes+during+embryo+development+in+non-anesthetized+mice+of+different+genotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Non-invasive ultrasonographic characterization of phenotypic changes during embryo development in non-anesthetized mice of different genotypes.</a> Theriogenology. 70 (1), 44-52 (2008).</li>
<li>Parvani, J. G., Gujrati, M. D., Mack, M. A., Schiemann, W. P., Lu, Z. -R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+%CE%B23+integrin+by+targeted+ECO%2FsiRNA+nanoparticles+inhibits+EMT+and+metastasis+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Silencing β3 integrin by targeted ECO/siRNA nanoparticles inhibits EMT and metastasis of triple-negative breast cancer.</a> Cancer Research. 75 (11), 2316-2325 (2015).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li>
<li>Jenkins, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+imaging+%28BLI%29+to+improve+and+refine+traditional+murine+models+of+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent imaging (BLI) to improve and refine traditional murine models of tumor growth and metastasis.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 20 (8), 733-744 (2003).</li>
<li>Keelan, J. A., Leong, J. W., Ho, D., Iyer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+safety+considerations+of+nanoparticle-mediated+drug+delivery+in+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and safety considerations of nanoparticle-mediated drug delivery in pregnancy.</a> Nanomedicine. 10 (14), 2229-2247 (2015).</li>
</ol>

X.F. et B.Z. sont inventeurs sur la demande de brevet PCT/CN2017/108646 soumis par SIAT qui couvre une méthode de livraison de médicaments spécifiques placenta et son application. Tous les autres auteurs déclarent qu’ils n’ont pas des intérêts concurrents.

Dans ce manuscrit, nous décrivent un système de trois-méthode pour déterminer si les nanoparticules plCSA-BP-guidées sont un outil efficace pour cibler l’administration de médicaments pour le placenta. L’utilisationdes in vivo de l’imagerie pour surveiller le signal infrarouge de ICG fluorescent a confirmé la spécificité ciblage placentaire de plCSA-BP. Using HFUS et HPLC, nous avons démontré que plCSA-BP-conjugué des nanoparticules peuvent délivrer efficacement MTX uniquement à la cellules du placenta, pas pour...

Complications de la grossesse induite par le placenta, y compris la prééclampsie, perte fœtale, placentaire et petit âge gestationnel (SGA), sont communs et conduisent à l’importante morbidité maternelle et foetale et mortalité1,2, 3et très peu de médicaments ont fait leurs preuves pour être efficace pour traiter la grossesse troubles4,5. L’élaboration de stratégies pour la livraison de médicaments ciblés placenta plus sélectif et plus sécuritaire pendant la grossesse reste difficile en pharmacothérapie modernes.
Ces dernières années, plusieurs rapports ont mis l’accent sur l’administration ciblée des médicaments aux tissus utéro de nanoparticules de revêtement avec des peptides ou des anticorps comme outils axés sur le placenta. Ceux-ci incluent un facteur de croissance épidermique anti receptor (EGFR)6 anticorps, tumeur-homing peptides (CGKRK et iRGD)7, axés sur le placenta peptides8, peptides d’axés sur la vascularisation placentaire9 et anticorps contre le récepteurs de l’ocytocine10.
Ici, nous démontrons qu’un peptide synthétique placentaire chondroïtine sulfate A liaison (plCSA-BP) peut être utilisé pour l’administration ciblée de nanoparticules et leurs charges utiles de drogue avec le placenta11. Les nanoparticules plCSA-BP-guidées complètent l’utéro déclarée méthodes de ciblage parce qu’ils ciblent les trophoblastes placentaires.
Comme une méthode non invasive, l’imagerie in vivo a été utilisé pour contrôler l’expression des gènes spécifiques placenta en souris12et vert d’indocyanine (ICG) a été largement utilisé pour suivre les nanoparticules à l’aide de systèmes13, l’imagerie de fluorescence 14,15. Ainsi, nous avons injecté par voie intraveineuse des nanoparticules plCSA-BP-conjugué chargés avec ICG (plCSA-INPs) pour visualiser la distribution de plCSA-INP chez les souris enceintes avec un imageur de fluorescence. Nous avons ensuite injectée par voie intraveineuse méthotrexate (MTX)-chargé de plCSA-NPs dans souris gravides. Échographie de haute fréquence (HFUS), non invasive, l’autre en temps réel d’imagerie outil16,17 a été utilisé pour surveiller le développement foetal et placentaire chez les souris. Enfin, nous avons utilisé chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) pour quantifier la distribution MTX dans le placenta et le fœtus.
Dans ce protocole, nous décrivons en détail le système de trois-méthode utilisé pour évaluer l’efficacité de la délivrance des médicaments ciblés placenta par nanocarriers plCSA-BP-guidé.

<table><tbody><tr><td>CD-1 souris</td><td>Beijing Vital River</td><td>201</td><td>Femelle (8-12 semaines)</td></tr><tr><td>Seringue à insuline</td><td>BD</td><td>328421</td><td>pour injection IV</td></tr><tr><td>Absolu</td><td>d’éthanol Sinopharm 10009218 chimique</td><td></td><td>pour la synthèse de nanoparticules</td></tr><tr><td>Lécithine de soja</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>441601</td><td>pour la synthèse de nanoparticules</td></tr><tr><td>DSPE-PEG-COOH</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880125</td><td>pour la synthèse de nanoparticules</td></tr><tr><td>PLGA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>719897</td><td>pour la synthèse de nanoparticules</td></tr><tr><td>Processeur à ultrasons</td><td>Sonics</td><td>VCX130</td><td>pour la synthèse de nanoparticules</td></tr><tr><td>Méthotrexate (MTX)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900324</td><td>pour la synthèse de nanoparticules</td></tr><tr><td>Vert d’indocyanine (ICG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1340009</td><td>pour in vivo imagerie</td></tr><tr><td>saline tamponnée au phosphate (PBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH30028.01</td><td></td></tr><tr><td>IVIS instrument de spectre</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>pour l’imagerie in vivo</td></tr><tr><td>Gel de transmission d’ultrasons</td><td>Guanggong</td><td>ZC4252418</td><td>pour l’imagerie par ultrasons</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Lunan Pharmaceutical</td><td>I0040</td><td>pour maintenir l’anesthésie</td></tr><tr><td>Crème dépilatoire</td><td>Nair</td><td>TMG001</td><td>pour l’enlèvement de la fourrure</td></tr><tr><td>Transducteur 40 MHz</td><td>VisualSonics</td><td>MS550S</td><td>pour l’imagerie par</td></tr><tr><td>ultrasons Système d’imagerie par ultrasons à haute fréquence</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo2100</td><td>pour l’imagerie par ultrasons</td></tr><tr><td>Avertin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>pour l’anesthésie Pompe</td></tr><tr>à<td>seringue</td><td>Mindray</td><td>SK-500III</td><td>pour perfusion cardiaque</td></tr><tr><td>solution saline à 0,9 %</td><td>Meilunbio</td><td>MA0083</td><td>pour perfusion cardiaque</td></tr><tr><td>Tubes en polypropylène 1,5 mL</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C-80</td><td></td></tr> <tr><td>&deg ; C congélateur</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88600V</td><td></td></tr><tr><td>Centriguge</td><td>Cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Acide perchlorique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>311421</td><td>pour précipiter les protéines</td></tr><tr><td>Homogénéisateur</td><td>SCIENTZ</td><td>SCIENTZ-48</td><td>pour l’homogénéisation des tissus</td></tr><tr><td>Filtre à seringue (0,45 &mu ; m)</td><td>Millipore</td><td>SLHV033RS01</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium</td><td>Sinopharm 10019763 chimique</td><td></td><td>pour résoudre</td></tr><tr><td>les flacons MTX HPLC</td><td>Eaux</td><td>670650620</td><td>pour HPLC</td></tr><tr><td>Phosphate de potassium dibasique</td><td>Sinopharm Chemical</td><td>20032117</td><td>pour HPLC</td></tr><tr><td>Acétonitrile</td><td>JK 932537 chimique</td><td></td><td>pour HPLC</td></tr><tr><td>C18 colonne</td><td>Eaux</td><td>186003966</td><td>pour HPLC</td></tr><tr><td>Système HPLC</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>pour HPLC</td></tr></tbody></table>

Évaluation globale de l’efficacité et l’innocuité de la délivrance de médicaments ciblés placenta en utilisant trois méthodes complémentaires

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

Aucun des traitements efficaces n’existent actuellement pour les complications associées à placenta pendant la grossesse, et élaborer des stratégies visant l’administration ciblée des médicaments pour le placenta tout en minimisant les effets secondaires foetus et maternels reste difficile. NANOPARTICULES ciblées transporteurs offrent de nouvelles possibilités pour traiter les troubles placentaires. Nous avons récemment démontré qu’un peptide synthétique placentaire chondroïtine sulfate A liaison (plCSA-BP) pourrait servir à orienter les nanoparticules pour libérer des médicaments le placenta. Dans ce protocole, nous décrivons en détail un système pour évaluer l’efficacité de la délivrance de médicaments pour le placenta par plCSA-BP qui emploie trois méthodes distinctes utilisées en combinaison : in vivo de l’imagerie, échographie de haute fréquence (HFUS) et haute performance chromatographie en phase liquide (HPLC). L’utilisation in vivo nanoparticules d’imagerie, plCSA-BP-guidé ont été visualisées dans les placentas d’animaux vivants, tandis que HFUS et HPLC ont démontré que le plCSA-BP-conjugué nanoparticules efficacement et précisément livré méthotrexate pour le placenta. Ainsi, une combinaison de ces méthodes peut servir comme un outil efficace pour l’administration ciblée des médicaments pour le placenta et le développement de nouvelles stratégies de traitement pour plusieurs complications de la grossesse.

Dans ce manuscrit, les nanoparticules plCSA-BP-conjugué chargés de MTX (plCSA-MNPs) ou GIC (plCSA-INPs) ont été par voie intraveineuse injectées à des souris enceintes. In vivo de l’imagerie a révélé des signaux forts de ICG dans la région de l’utérus 30 min après l’injection de plCSA-INP. L’INPs ont été essentiellement localisés dans la région du foie et la rate (Figure 1 a). 48 h après l’injection de plCSA-INP, souris gravides ont été sacrifiés, ré...

Les auteurs décrivent un système qui utilise trois méthodes pour évaluer l’innocuité et l’efficacité de l’administration de médicaments ciblés placenta : in vivo de l’imagerie pour surveiller l’accumulation de nanoparticules, échographie de haute fréquence pour surveiller le développement placentaire et foetal et de la CLHP pour quantifier les medicaments au tissu.

Évaluation globale de l’efficacité et l’innocuité de la délivrance de médicaments ciblés Placenta en utilisant trois méthodes complémentaires

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la nanomédecine sur l’efficacité et l’innocuité d’un médicament chargé sur des nanoparticules administrées à la mère et au fœtus. Le principal avantage de cette technique est qu’elle facilite une mesure biochimique précise de la quantité de médicament délivrée dans le placenta. Les implications de cette technique s’étendent au traitement des complications de la grossesse médiées par le placenta, car il est important d’assurer un ciblage précis de l’administration du médicament au placenta.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car l’évaluation par ultrasons à haute fréquence du développement embryonnaire nécessite de la patience et de l’expérience pour être maîtrisée. Pour l’injection intraveineuse de nanoparticules, transférez une souris enceinte embryonnaire Day 14.5 avec des veines de la queue dilatées par la chaleur dans un dispositif de contention et nettoyez la queue avec un tampon d’alcool. Insérez ensuite l’extrémité de l’aiguille d’une seringue à insuline de calibre 28 dans une veine de queue dilatée, et appuyez lentement sur le piston pendant cinq à 10 secondes avec une pression uniforme pour libérer les nanoparticules dans la veine de la queue.30 minutes après l’injection, placez la souris enceinte anesthésiée dans la chambre d’imagerie d’un système d’imagerie par fluorescence in vivo en position couchée. Sélectionnez la fluorescence 2D et les paramètres photographiques appropriés pour l’imagerie des signaux de fluorescence vert d’indocyanine, et réglez l’exposition à l’auto et les longueurs d’onde d’excitation et d’émission à 710 et 820 nanomètres, respectivement. Ensuite, imaginez l’animal et remettez la souris enceinte dans sa cage.48 heures après l’injection, utilisez la pince Graefe, la pince à tissus Graefe et des ciseaux de dissection pour prélever les fœtus et les placentas, et imagez les tissus prélevés comme cela vient d’être démontré pour l’ensemble de l’animal. Pour l’évaluation échographique à haute fréquence du développement embryonnaire, 24 heures après l’injection de nanoparticules, fixez la mère enceinte anesthésiée sur une plate-forme d’imagerie par ultrasons préchauffée à 37 à 42 degrés Celsius en position couchée, et placez le transducteur de 40 mégahertz dans le bras mécanique. Ajustez ensuite la position du transducteur pour obtenir des images longitudinales du fœtus et du placenta avec la région d’intérêt dans la zone focale.Pour l’imagerie et l’analyse en mode B, sélectionnez le mode B et abaissez le transducteur sur l’abdomen jusqu’à ce que le fœtus et le placenta soient visibles. Cliquez sur Scan/Freeze pour lancer et arrêter l’imagerie, Cine Store pour stocker la boucle ciné et Frame Store pour stocker les images de l’image. Cliquez ensuite sur Mesurer pour analyser la longueur du sac gestationnel, la longueur de la couronne fœtale, la longueur de la croupe, le diamètre bipariétal, la circonférence abdominale, le diamètre placentaire et l’épaisseur placentaire.Pour l’imagerie et l’analyse Doppler à ondes de pouls, à l’aide de la même projection de balayage, cliquez d’abord sur Couleur, puis sélectionnez Onde de pouls et placez la boîte de volume d’échantillonnage au centre de l’artère ombilicale. Cliquez sur Scan/Freeze pour lancer l’imagerie et sur Cine Store pour collecter les images de l’artère ombilicale. Cliquez ensuite sur Mesurer pour calculer la vitesse de crête de l’artère ombilicale.Pour l’imagerie et l’analyse en mode Doppler couleur, à l’aide de la même projection de balayage, cliquez sur Couleur et ajustez la position de la sonde pour obtenir des images du cœur fœtal comme illustré. Cliquez ensuite sur Mesurer pour calculer la fréquence cardiaque fœtale de la boucle d’image ciné enregistrée. Pour l’analyse par chromatographie liquide à haute pression, ou HPLC, injectez d’abord une dose unique de nanoparticules à une souris enceinte Embryonic Day 14.5.Après 24 heures, perfuser le cœur de l’animal gravide avec 50 millilitres de solution saline glacée à 0,9 % pendant 10 minutes pour éliminer toutes les nanoparticules non liées, et recueillir les fœtus et les placentas pour les stocker à moins 80 degrés Celsius. Le jour de l’analyse, ajoutez 500 microlitres de solution d’homogénéisation fraîchement préparée à chaque échantillon de tissu de 200 milligrammes, et homogénéisez les échantillons deux fois à pleine vitesse pendant 30 secondes par dissociation. Après la deuxième homogénéisation, centrifugez les échantillons et filtrez les surnageants à travers un filtre à seringue de 0,45 micromètre dans un flacon HPLC.Placez les flacons d’échantillon dans un plateau d’échantillonnage automatique pour l’injection, puis allumez le dégazeur HPLC pour évacuer l’air du système. Ensuite, activez le flux pour équilibrer la colonne avec la phase mobile pendant 30 minutes afin de réduire le bruit de base, et réglez la température de la colonne à 25 degrés Celsius. Injectez ensuite des volumes d’échantillon de 20 microlitres à un débit d’un millilitre par minute dans les 30 minutes, puis cliquez sur Exécuter la méthode pour commencer l’analyse.Une fois les cycles terminés, remplacez manuellement la phase mobile par de l’acétonitrile de qualité HPLC et faites fonctionner l’acétonitrile pendant environ 15 minutes pour protéger le système. L’imagerie in vivo révèle de forts signaux verts d’indocyanine dans le tissu utérin 30 minutes après l’injection placentaire de nanoparticules conjuguées à la fluorescence liée au sulfate de chondroïtine, tandis que les nanoparticules non liées se localisent principalement dans les régions hépatique et splénique. 48 heures après l’injection, un signal fluorescent est observé dans le placenta d’animaux injectés de nanoparticules liées au sulfate de chondroïtine placentaire, sans qu’aucun signal ne soit détecté chez le fœtus.La surveillance par ultrasons à haute fréquence d’animaux injectés de nanoparticules conjuguées à la fluorescence liée au sulfate de chondroïtine placentaire révèle une diminution significative des principaux jalons de développement fœtaux et placentaire. Il est intéressant de noter que le traitement avec des nanoparticules liées au méthotrexate altère également légèrement le développement fœtal et placentaire, ce qui indique que les nanoparticules peuvent améliorer l’administration du méthotrexate au placenta via l’effet de perméabilité et de rétention accru. La mesure des concentrations de méthotrexate par HPLC indique un temps de rétention de sept minutes dans le placenta de souris injectées de nanoparticules liées au méthotrexate.24 heures après l’injection, les taux placentaires de méthotrexate dans le groupe injecté de nanoparticules liées au méthotrexate sont significativement inférieurs à ceux mesurés dans le groupe placentaire de sulfate de chondroïtine et de nanoparticules liées au méthotrexate, sans qu’aucun méthotrexate n’ait été détecté chez les fœtus de ce dernier. Le méthotrexate peut encore être détecté dans le placenta 48 heures après l’injection de sulfate de chondroïtine placentaire et de nanoparticules liées au méthotrexate, démontrant que le sulfate de chondroïtine placentaire et les nanoparticules liées au méthotrexate ne peuvent pas traverser le placenta, minimisant ainsi les effets indésirables potentiels sur le fœtus. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler que le placenta commence à se former vers le jour embryonnaire 9 1/2, et donc l’expérience d’imagerie in vivo est mieux réalisée le jour embryonnaire 10 1/2 ou plus tard.Après cette procédure, d’autres méthodes telles que la coloration et l’analyse par immunofluorescence peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur la localisation des nanoparticules dans le placenta. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la médecine de la reproduction pour explorer la possibilité d’un traitement ciblant le placenta dans les complications de la grossesse.

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Évaluation globale de l’efficacité et l’innocuité de la délivrance de médicaments ciblés Placenta en utilisant trois méthodes complémentaires (Vidéo) | JoVE Journal

Évaluation globale de l’efficacité et l’innocuité de la délivrance de médicaments ciblés Placenta en utilisant trois méthodes complémentaires

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