Name: Appareil pour la récolte de tissus Microcolumns (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Apprenez à récolter des tissus cutanés de pleine épaisseur avec un appareil à microcolonnes minimisant les cicatrices au site donneur. Cette technique permet une collecte efficace pour la recherche en régénération tissulaire.

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Ce travail a été soutenu en partie par l’armée, marine, NIH, armée de l’Air, VA et Health Affairs pour soutenir l’effort de l’AFIRM II, sous le no Award. W81XWH-13-2-0054. L’activité médicale Acquisition de recherche de l’armée d’États-Unis, 820 Chandler Street, Fort Detrick, MD 21702-5014 est le Bureau d’acquisition attribution et l’administration. Opinions, les interprétations, les conclusions et les recommandations sont celles de l’auteur et ne sont pas nécessairement approuvées par le ministère de la défense.

Tous les travaux impliquant des animaux vivants et des échantillons de tissus d’origine animale ont été approuvés par le Massachusetts général hôpital institutionnels et animalier utilisation Comité (IACUC).
1. production de la récolte des aiguilles
<ol><li>Programme d’installation de la phase de production<ol>
<li>Fixez un connecteur luer lock femelle sur un poste et monter le post sur une platine de rotation jusqu'à ce que le raccord luer lock au centre de la scène (Figure 1A).</li>
		<li>Positionner cette première étape de rotation verticale et montez-la perpendiculairement sur une étape de la deuxième rotation horizontale (Figure 1B).</li>
		<li>Monter la platine de rotation horizontale sur une scène de la traduction de deux axes (Figure 1B).</li>
		<li>Fixer la combinaison sur une surface stable, comme une carte de test optique.</li>
		<li>Séparément, monter un outil rotatif sur la même maquette, avec l’outil positionné en parallèle avec la maquette et à environ la même hauteur que le raccord luer lock sur la scène de combinaison de rotation/translation (Figure 1C).</li>
		<li>Installer deux disques à tronçonner concentriquement sur l’outil rotatif (un grain plus petit, plus faible diamant disque à tronçonner sur un disque à tronçonner Pierre grain plus gros, plus haut) (Figure 1D). Remarque : Sur un 9 mm, différence entre les diamètres des deux roues est généralement suffisant.</li>
		<li>Position une imposte d’origine avec un bras réglable l’outil rotatif, avec la lumière qui vise les molettes.</li>
		<li>Pour améliorer la visualisation, placez un microscope à dissection sur le paramétrage de la production pour que l’oculaire se concentre sur les plaques de coupe (Figure 1C). NOTE : Alternativement, utilisateurs peuvent porter lunettes loupe.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Remodelage de la pointe de l’aiguille<ol>
<li>Portez des lunettes de protection et un masque chirurgical évitant de fines particules métalliques dans les yeux ou des voies respiratoires.</li>
		<li>Choisissez des aiguilles hypodermiques de la jauge de grosseur, basé sur les conditions expérimentales.</li>
		<li>Marquez la longueur prévue sur chaque aiguille récolte. Remarque : Pour la récolte de peau de porc, les aiguilles de 8 mm sont généralement suffisantes ; Bien que, la durée peut varier en fonction des besoins expérimentaux (e.g., épaisseur des tissus de la peau cible, calibre de l’aiguille). Généralement, une aiguille de calibre 19 fonctionne bien pour la peau de porc.</li>
		<li>Abaisser l’aiguille perpendiculairement à l’outil rotatif sous tension, à l’aide du bord du disque à découper extérieure à couper l’excédent de longueur de l’aiguille, au point marqué à l’étape 1.2.3.</li>
		<li>Connectez l’aiguille raccourcie et arrondi pour le connecteur luer lock femelle sur le stade de la production.</li>
		<li>Ajuster l’étape de rotation horizontale pour que l’aiguille soit à un angle de 12° parallèle pour les plaques de coupe sur l’outil rotatif (en changeant l’angle affectera la force nécessaire à l’insertion de l’aiguille).</li>
		<li>Allumez l’imposte et ajuster sa position tout en observant l’aiguille sous grossissement, jusqu'à ce que la lumière est réfléchie de la ligne médiane (dans la longueur) de l’aiguille.</li>
		<li>Mettez l’outil rotatif, puis utilisez l’étape de traduction pour faire avancer l’aiguille vers l’intérieur (diamant) coupe disque (Figure 2A).</li>
		<li>Garder, avançant l’aiguille doucement contre le disque de coupe jusqu'à ce que le disque a TRONCONNER atteigne environ la ligne médiane de l’aiguille (comme visualisées par réflexion de la lumière zénithale le long de la ligne médiane).</li>
		<li>Déplacez lentement la surface coupée de l’aiguille de la roue intérieure de diamant sur la roue extérieure de pierre à aiguille coupe la surface avec un vernis plus fin (Figure 2B).</li>
		<li>Retirer l’aiguille du disque à découper.</li>
		<li>L’étape de rotation verticale, faire tourner l’aiguille de 180°.</li>
		<li>Répétez les étapes 1.2.9-1.2.10 pour remodeler l’autre côté de l’aiguille. Remarque : L’aiguille doit maintenant avoir deux pointes de longueur approximativement égale (Figure 2 et 2D).</li>
		<li>Retirez l’aiguille du stade de la production.</li>
		<li>Nettoyer l’intérieur ennuyer avec un fil métallique qui est légèrement plus petit que le diamètre intérieur de l’aiguille.</li>
		<li>À l’aide d’un bâton de bois pointu (e.g., en brisant la fin du petit bâton en bois sur un coton-tige), éliminer les bavures qui peuvent être encore attachés aux bords de l’aiguille nouvellement formé. NOTE : Les aiguilles de récolte peut être électropoli et stérilisé par autoclave, si nécessaire.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. récolte de tissus de peau
<ol><li>Utiliser les aiguilles de récolte pour recueillir des microcolumns de peau de ex vivo des tissus ou des animaux vivants.</li>
	<li>Pour ex vivo peau tissulaire qui est mince (surtout des échantillons où la graisse sous-cutanée est manquant ou a été réglée de suite), placez le tissu cible sur l’ouverture d’un tube à centrifuger 50 mL ou empiler deux morceaux de tissu sur le dessus de l’autre, pour éviter d’endommager le n eedle conseils en les frappant contre des surfaces dures. Remarque : En vivo récolte d’animaux vivants, il est recommandé que l’épinéphrine et lidocaïne locale administré par injection intradermique d’analgésie et de réduire les saignements.</li>
	<li>Assembler le dispositif récolte selon la quantité de microcolumns nécessaire, tel que décrit ci-dessous.</li>
	<li>Option de volume faible-moyen :<ol>
<li>Pour récolter des petites et moyennes quantités de microcolumns, il suffit de remplir une seringue standard (10 à 20 mL seringues fonctionnent généralement bien) avec un soluté physiologique et branchez-le à une aiguille de récolte.</li>
		<li>Complètement Insérez l’aiguille récolte dans la peau du donneur, puis se rétracter.</li>
		<li>Pousser sur le piston de la seringue pour vider une solution saline à travers l’aiguille récolte et expulser la microcolonne qui se loge dans le trou de l’aiguille.</li>
		<li>Pour accélérer le processus de récolte, répétez l’étape 2.4.2 3 à 5 fois avant d’expulser le microcolumns à l’étape 2.4.3. Remarque : Il est souvent commode d’expulser le microcolumns dans une crépine de cellule standard pour faciliter la collecte ultérieure des microcolumns.</li>
		<li>Si les aiguilles sont encrassés, augmenter la pression sur le piston d’expulser le tissu collé et de retirer le sabot. Si tout simplement une pression croissante est insuffisante, insérer un fil métallique à travers l’ouverture de pointe de l’aiguille pour effacer le sabot dans l’aiguille alésage.</li>
		<li>Garder la microcolumns immergé dans salin ou moyenne avant utilisation pour éviter la dessiccation. Remarque : Avec un opérateur expérimenté, la méthode décrite ci-dessus peut servir à récolter des microcolumns à un taux d’environ 1 microcolonne par seconde.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Option gros volumes :<ol>
<li>Créer un simple dispositif d’aspiration assistée qui peut être construits pour faciliter la collecte de grandes quantités de microcolumns. Remarque : Le dispositif se compose d’une récolte aiguille, seringue de 20 mL avec embout de luer lock, adaptateur d’aspiration généralement utilisé pour la liposuccion (Figure 3A) et le flacon d’aspiration stérile.</li>
		<li>Retirer le piston de la seringue de 20 mL.</li>
		<li>Connecter la seringue à l’adaptateur d’aspiration.</li>
		<li>Terminer l’assemblage en attachant une récolte aiguille sur la seringue (Figure 3B).</li>
		<li>Utilisez un morceau de tuyau d’aspiration stérile pour brancher l’adaptateur d’aspiration sur un flacon d’aspiration stérile. Assurez-vous que l’appareil de récolte est connecté à une entrée de boîte métallique qui permet au liquide de s’écouler dans le bac sans entrave (qui peut nécessitent une connexion à un port cartouche est marqué pour la sortie plutôt que d’apport).</li>
		<li>Connectez l’appareil à une source de pression négative. Remarque : La pression nécessaire dépend à l’aiguille diamètre et longueur, comme décrit précédemment8. Pour l’appareil décrit dans ce manuscrit, le système d’aspiration dans les salles d’opération typiques est généralement suffisant.</li>
		<li>Connecter une récolte aiguille sur la seringue.</li>
		<li>Récolter le microcolumns en insérant la récolte de l’aiguille dans la peau. Remarque : Le microcolumns sera aspiré la seringue par aspiration, puis déversés dans la cuve d’aspiration.</li>
		<li>Par intermittence, trempez l’aiguille récolte dans un récipient de sérum physiologique stérile pendant la procédure de récolte pour purger le système. Remarque : Cette chasse d’eau saline facilite le transport de la microcolonne et veille à ce qu’ils vous hydrater. Par ailleurs, un adaptateur luer de CFP raccordable au raccord luer lock de la seringue et à travers un tube de connexion, également à un sac de goutte à goutte saline de pendaison.</li>
		<li>Garder sous la main un fil métallique ou aiguille, qui est légèrement plus petit que le diamètre intérieur de l’aiguille de la récolte de calibre plus petit. Si l’aiguille est bouché, il peut être effacée en insérant le fil métallique dans le trou de l’aiguille.</li>
		<li>Lorsque la quantité désirée de microcolumns ont accumulé dans la cuve, débranchez l’appareil de succion, puis versez le contenu de la cuve d’aspiration dehors à travers un filtre pour recueillir les microcolumns.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Après la récolte, appliquer un onguent antibiotique topique sur les sites donneurs. NOTE : Pansements supplémentaires ne sont généralement pas nécessaires pour les sites donneurs.</li>
</ol>

<ol><li>Sun, B. K., Siprashvili, Z., Khavari, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+skin+grafting+and+treatment+of+cutaneous+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Advances in skin grafting and treatment of cutaneous wounds.</a> Science. 346 (6212), 941-945 (2014).</li>
<li>Singh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenging+the+Conventional+Therapy%3A+Emerging+Skin+Graft+Techniques+for+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Challenging the Conventional Therapy: Emerging Skin Graft Techniques for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 136 (4), 524-530 (2015).</li>
<li>Tam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractional+Skin+Harvesting%3A+Autologous+Skin+Grafting+without+Donor-site+Morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery.+Global+Open%22%5BJournal%5D)">Fractional Skin Harvesting: Autologous Skin Grafting without Donor-site Morbidity.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. Global Open. 1 (6), 47(2013).</li>
<li>Tam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+full-thickness+skin+by+microcolumn+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of full-thickness skin by microcolumn grafting.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (10), 2796-2805 (2017).</li>
<li>Huang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+hair+and+other+skin+appendages%3A+A+microenvironment-centric+view%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Regeneration of hair and other skin appendages: A microenvironment-centric view.</a> Wound Repair and Regeneration. 24 (5), 759-766 (2016).</li>
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<li>Rettinger, C. L., Fletcher, J. L., Carlsson, A. H., Chan, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+epithelialization+and+improved+wound+healing+metrics+in+porcine+full-thickness+wounds+transplanted+with+full-thickness+skin+micrografts%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Accelerated epithelialization and improved wound healing metrics in porcine full-thickness wounds transplanted with full-thickness skin micrografts.</a> Wound Repair and Regeneration. 25 (5), 816-827 (2017).</li>
<li>Franco, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/270571598_Fractional_Skin_Harvesting_Device_Operational_Principles_and_Deployment_Evaluation">Fractional skin harvesting: device operational principles and deployment evaluation.</a> Journal of Medical Devices. 8 (4), 041005(2014).</li>
<li>Rasmussen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+autologous%2Fallogeneic+constructs+for+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Military+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric autologous/allogeneic constructs for skin regeneration.</a> Military Medicine. 179, 8 Suppl 71-78 (2014).</li>
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<li>Wong, V. W., Levi, B., Rajadas, J., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+niches+for+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Stem cell niches for skin regeneration.</a> International Journal of Biomaterials. 2012, 926059(2012).</li>
<li>Manstein, D., Herron, G. S., Sink, R. K., Tanner, H., Anderson, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractional+photothermolysis%3A+a+new+concept+for+cutaneous+remodeling+using+microscopic+patterns+of+thermal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Surgery+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fractional photothermolysis: a new concept for cutaneous remodeling using microscopic patterns of thermal injury.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 34 (5), 426-438 (2004).</li>
<li>Iriarte, C., Awosika, O., Rengifo-Pardo, M., Ehrlich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+applications+of+microneedling+in+dermatology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical%2C+Cosmetic+and+Investigational+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Review of applications of microneedling in dermatology.</a> Clinical, Cosmetic and Investigational Dermatology. 10, 289-298 (2017).</li>
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<li>Manuskiatti, W., Fitzpatrick, R. E., Goldman, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effectiveness+and+side+effects+of+carbon+dioxide+laser+resurfacing+for+photoaged+facial+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Long-term effectiveness and side effects of carbon dioxide laser resurfacing for photoaged facial skin.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 40 (3), 401-411 (1999).</li>
</ol>

Les auteurs sont des coïnventeurs sur les brevets concernant la technologie décrite dans cet article, de qui ils ont reçu un octroi de licences et les redevances auprès de leur institution, Massachusetts General Hospital. J. Tam consulte également de Medline Industries, Inc., qui détient la licence commerciale pour cette technologie.

Les méthodes décrites ici sont destinées à permettre le regroupement des tissus microcolumns en quantité suffisante pour en vivo grandes études animales, utilisant des outils faits de fournitures de laboratoire disponibles dans le commerce. Cet appareil a été utilisé précédemment dans la récolte de tissus excisés de peau humaine4,9 , mais aussi de peau de porcs sur pied3. Les paramètres spécifiques décrits sont ceux qui se sont ré...

Une greffe de peau autologue est le pilier de cicatrisation, mais il est limité par la rareté du site donneur et de la morbidité, conduisant à des efforts concertés au cours des dernières décennies pour développer de nouvelles options thérapeutiques pour remplacer une greffe de peau classique1,2 . Nous avons récemment mis au point une autre méthode de récolte de la peau afin de valoriser les avantages d’une greffe de peau pleine épaisseur tout en réduisant la morbidité du site donneur. En recueillant la pleine épaisseur peau sous la forme de petites (~0.5 mm de diamètre) « microcolumns », les sites donneurs sont en mesure de guérir rapidement et sans laisser de cicatrices dans des circonstances normales (pour les exceptions possibles, voir la section débat ci-dessous)3. Microcolumns peut être appliqué directement sur la plaie lits pour accélérer la fermeture de la plaie, réduire la contraction3et de restaurer une gamme variée de types de cellules épidermiques et dermiques et des structures fonctionnelles annexielle4, dont la plupart ne manquent pas dans une greffe de peau split-épaisseur classique ou actuelle bioengineered peau substituts5. La capacité de microcolumns pour augmenter la guérison et de leurs sites donneurs pour guérir sans laisser de cicatrices ont tous deux été indépendamment validés par d’autres groupes de recherche6,7.
Nous avons déjà développé un système de récolte de laboratoire pour permettre le regroupement des microcolumns à échelle8; Cependant, ce système est composé de nombreux composants personnalisés qui ne sont pas largement disponibles. Ici, nous décrivons en détail le processus car produisant récolte des aiguilles, ainsi que des systèmes de collecte simple, issus pour la plupart des composants sur étagère, qui peuvent être utilisés pour réaliser de grands volumes de récolte. L’appareil décrit dans ce manuscrit est adapté pour in vitro et travail animale, mais pas pour une utilisation chez l’homme. Un appareil clinique avec autorisation de la FDA pour l’application de cette technique chez l’homme est disponible dans le commerce mais n’est pas abordé en détail ici.

<table><tbody><tr><td>Roue diamantée</td><td>Dremel</td><td>545</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille hypodermique (19G)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-840-98</td><td>D’autres tailles d’aiguilles peuvent être utilisées, en fonction des besoins expérimentaux</td></tr><tr><td>Roue à pierre</td><td>Dremel</td><td>540</td><td></td></tr><tr><td>Seringue (20mL avec luer lock)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-124-967</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateur d’aspiration</td><td>Tulip Medical</td><td>PA20BD</td><td>En option, pour la récolte à grand volume</td></tr><tr><td>Cartouche d’aspiration</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-898-212</td><td>En option, pour la récolte à grand volume. Stériliser avant utilisation.</td></tr><tr><td>Tubulure</td><td>d’aspiration Medline</td><td>DYND50216H</td><td>En option, pour la récolte de gros volumes</td></tr></tbody></table>

appareil pour la récolte de tissus microcolumns

Apparatus for Harvesting Tissue Microcolumns

Ce manuscrit décrit le processus de production pour un appareil de laboratoire, fabriqué à partir de composants sur étagère, qui peuvent être utilisés pour recueillir des microcolumns du tissu cutané de pleine épaisseur. La petite taille de le microcolumns permet aux donateurs sites guérir rapidement sans provoquer de donneuse, cicatrices, alors que la récolte pleine épaisseur tissulaire permet l’incorporation de tous les composants cellulaires et extracellulaires du tissu cutané, y compris ceux liée avec les régions cutanées plus profondes et les structures cutanées annexielle, qui doivent encore être reproduit avec succès en utilisant des tissus classiques, techniques d’ingénierie. Le microcolumns peut être appliqué directement sur les plaies de la peau pour augmenter la guérison, ou ils utilisable comme source de cellules/tissus autologues pour autres approches d’ingénierie tissulaire. Les aiguilles de récolte sont faites en modifiant les aiguilles hypodermiques standards et ils peuvent être utilisés seuls pour la récolte de petites quantités de tissu ou couplés à un système de collection axée sur l’aspiration simple (également fait partir de fournitures de laboratoire couramment disponibles) pour grand volume de récolte pour faciliter les études sur des modèles animaux grands.

Les aiguilles récolte devraient être en mesure de recueillir des microcolumns des tissus de la peau pleine épaisseur avec environ un taux de réussite de 80 à 90 %, et chaque microcolonne devrait contenir, épiderme, derme et quelques graisse sous-cutanée (Figure 4). Si le taux de réussite de la récolte est faible, ou s’il devient difficile d’insérer une aiguille dans le tissu, puis une nouvelle aiguille est probablement nécessaire. Si le taux de réussite pour ...

Nous décrivons ici un protocole pour la production de la récolte du site aiguilles qui peuvent servir à recueillir des tissus de la peau pleine épaisseur sans causer de donateurs cicatrices. Les aiguilles peuvent être combinés avec un système de collecte simple pour atteindre de gros volumes de récolte.

Appareil pour la récolte de tissus Microcolumns

This manuscript describes the production process for a laboratory apparatus, made from off-the-shelf components, that can be used to collect microcolumns ...

Cette méthode peut aider à répondre aux questions essentielles dans le domaine de régénération des tissus cutanés qui est de savoir comment remplacer les différents types de cellules et les structures qui sont contenues dans la peau naturelle. Le principal avantage de cette technique est que la peau autologue pleine épaisseur peut être recueillie avec la morbidité minimale de site de donneur. Bill Farinelli, associé de recherche dans notre laboratoire, démontrera la procédure.Commencez cette procédure par la configuration de l’étape de production telle que décrite dans le protocole de texte. Installez deux roues de coupure concentriquement sur l’outil rotatif. Utilisez une plus petite roue de coupe de diamant de grille inférieure au-dessus d’une plus grande roue de coupure de pierre de grille plus élevée.Placez une source lumineuse aérienne avec un bras réglable au-dessus de l’outil rotatif avec la lumière dirigée vers les roues de coupe. Pour améliorer la visualisation, placez un microscope disséquant au-dessus de la configuration de production de sorte que l’oculaire soit concentré sur les disques de coupe. Lors du remodelage de la pointe de l’aiguille, portez des lunettes de protection et un masque chirurgical pour empêcher les particules métalliques fines d’entrer dans les yeux ou les voies respiratoires.Choisissez des aiguilles hypodermiques de la taille appropriée de la jauge en fonction des exigences expérimentales. Marquer la longueur prévue sur chaque aiguille de récolte. Abaissez l’aiguille perpendiculairement à l’outil rotatif avec la puissance sur l’utilisation du bord du disque de coupe externe pour couper la longueur excédentaire de l’aiguille au point marqué.Connectez l’aiguille émoussée raccourcie au connecteur femelle de serrure de Luer sur l’étape de production. Ajustez l’étape de rotation horizontale de sorte que l’aiguille soit à un angle de 12 degrés parallèle aux disques de coupe sur l’outil rotatif. Allumez la lumière aérienne et ajustez sa position tout en observant l’aiguille sous grossissement jusqu’à ce que la lumière soit réfléchie hors de la ligne médiane de l’aiguille.Puissance sur l’outil rotatif. Ensuite, utilisez l’étape de traduction pour avancer l’aiguille vers le disque de coupe interne. Continuez à avancer l’aiguille lentement contre le disque de coupe jusqu’à ce que le disque de coupe atteigne approximativement la ligne médiane de l’aiguille.Déplacez lentement la surface de l’aiguille coupée de la roue intérieure en diamant sur la roue extérieure en pierre pour terminer la surface de l’aiguille coupée avec un poli plus fin. Retirer l’aiguille du disque de coupe. À l’aide de l’étape de rotation verticale, faites pivoter l’aiguille à 180 degrés.Répétez ces étapes pour remodeler l’autre côté de l’aiguille. Maintenant, retirez l’aiguille de l’étape de production. Nettoyez l’alésage intérieur avec un fil métallique légèrement plus petit que le diamètre intérieur de l’aiguille.À l’aide d’un bâton en bois tranchant, retirer les bavures qui peuvent encore être fixées aux bords de l’aiguille nouvellement formée. Lorsqu’un volume élevé de microcoumns est nécessaire, retirez le piston d’une seringue de 20 millilitres. Attachez ensuite la seringue à un adaptateur d’aspiration.Terminer l’assemblage en attachant une aiguille de récolte à la seringue. Utilisez un morceau de tube d’aspiration stérile pour connecter l’adaptateur d’aspiration à une boîte d’aspiration stérile. Assurez-vous que l’appareil de récolte est relié à une entrée de boîte qui permet au fluide de s’écouler dans la boîte sans entrave.Connectez maintenant l’appareil à une source de pression négative. Récolter les microcoumns en insérant l’aiguille de récolte dans la peau. Tremper par intermittence l’aiguille de récolte dans un récipient de solution saline stérile pendant la procédure de récolte pour rincer le système.Gardez sous la main un fil métallique ou une aiguille légèrement plus petit que le diamètre intérieur de l’aiguille de récolte. Si l’aiguille est obstruée, elle peut être déblayée en insérant le fil métallique dans l’alésage de l’aiguille. Lorsque la quantité désirée de microcoumns s’est accumulée dans la boîte, déconnectez l’appareil de l’aspiration.Versez ensuite le contenu de la boîte d’aspiration à travers un filtre pour recueillir les microcoumns. On y voit une aiguille de récolte finie vue de l’avant et du côté. Notez les deux points de coupe à la pointe.Les aiguilles de récolte devraient être en mesure de recueillir des microcoumns à partir de tissus cutanés de pleine épaisseur avec un taux de réussite d’environ 80 à 90 %. Dans ce chiffre, les marques de contrôle représentent un millimètre. Chaque microcoumn doit contenir de l’épiderme, du derme et de la graisse sous-cutanée.Les microcoumns peuvent être appliqués directement à la cicatrisation des plaies ou ils peuvent être combinés avec différents matériaux matriciels pour produire des constructions combinées. Les microcoumns peuvent également être maintenus en culture pour des études in vitro. Tout en effectuant une récolte à fort volume, il est important de se rappeler d’incorporer une chasse d’eau saline intermittente.Bien que cette méthode ait été conçue pour la réparation des plaies cutanées, un principe similaire pourrait être appliqué à d’autres systèmes organiques tels que les muscles où la greffe de tissu autologue est nécessaire.

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Bioingénierie

Cette vidéo décrit la technique d’obtention d’une cellule unique à partir d’une population cellulaire hétérogène à l’aide de la microdissection par capture laser. La cellule isolée peut être utilisée pour d’autres études génomiques ou des recherches sur le cancer.

Échantillonnage de cellules uniques à l’aide de la microdissection par capture laser : une technique pour récolter des cellules cibles d’une population cellulaire hétérogène

Dans cette vidéo, nous présentons le protocole permettant d’obtenir une poudre de matrice extracellulaire finement broyée à partir de tissu décellularisé lyophilisé par cryobroyage. L’ECM en poudre conserve sa composition biochimique et peut être utilisé pour la synthèse de microsupports.

Cryobroyage de tissus décellularisés : une technique pour obtenir de fines poudres de matrice extracellulaire

Cette vidéo montre le procédé de fabrication de microsupports dérivés de la matrice extracellulaire par électropulvérisation. Ces microtransporteurs simulent le microenvironnement spécifique au tissu natif et sont stables dans les modèles de culture cellulaire in vitro 3D à long terme.

Fabrication de bioéchafaudages par électropulvérisation : une technique pour générer des échafaudages de microporteurs dérivés de la matrice extracellulaire de tissus décellularisés

Dans cette vidéo, nous démontrons l’extraction de métabolites à partir d’un rein de donneur pré-récolté, à l’aide d’une sonde SPME. Les métabolites extraits peuvent être utilisés pour effectuer des analyses métabolomiques et lipidomiques afin d’évaluer la qualité de l’organe pour la transplantation.

Microextraction en phase solide : une technique basée sur des sondes pour l’extraction d’échantillons à partir de tissus greffés

Cette vidéo montre une méthode pour générer des échafaudages d’astrocytes tridimensionnels dans des micro-colonnes d’hydrogel. L’intérieur des microcolonnes est recouvert de collagène. Des astrocytes sont introduits, qui adhèrent au collagène et, avec une incubation supplémentaire, s’auto-assemblent en un échafaudage tridimensionnel.

Une méthode in vitro pour générer des échafaudages d’astrocytes dans des micro-colonnes d’hydrogel

Source : Struzyna, L. A. et. al., Anatomically Inspired Three-dimensional Micro-tissue Neural Networks for Nervous System Reconstruction, Modulation, and Modeling. J. Vis. Exp. (2017)Cette vidéo démontre le développement de réseaux neuronaux issus de micro-tissus à l’aide d’une micro-colonne d’hydrogel avec un noyau de matrice extracellulaire. Les agrégats neuronaux ensemencés adhèrent, étendent les projections et forment des réseaux neuronaux structurés, contribuant ainsi aux progrès du...

Développement d’un réseau neuronal issu d’une micro-ingénierie tissulaire à l’aide d’une micro-colonne à base d’hydrogel

Les leucocytes marginaux-pulmonaires présentent des caractéristiques uniques et des fonctions immunologiques distinctes par rapport aux autres populations de leucocytes. Nous décrivons ici le prélèvement sélectif de cette sous-population de leucocytes pulmonaires, par perfusion forcée des poumons chez le rat et la souris. Les leucocytes pulmonaires marginaux semblent essentiels pour déterminer la susceptibilité aux maladies transmissibles par le sang et les maladies pulmonaires.

Récolte sélective de Marginating-pulmonaires Leucocytes

Les leucocytes marginaux-hépatiques présentent des caractéristiques uniques et des fonctions immunologiques distinctes par rapport aux autres populations de leucocytes. Nous décrivons ici une méthode de récolte sélective de cette population spécifique de cellules hépatiques, par perfusion forcée du foie de rats ou de souris. Les leucocytes hépatiques marginaux semblent essentiels pour déterminer la susceptibilité aux maladies hépatiques et aux métastases.

Récolte sélective de Marginating-hépatiques Leucocytes

Ce manuscrit détaille la fabrication de réseaux de neurones fabriqués par micro-tissus: des constructions tridimensionnelles de taille de micromètre composées de trajets axonaux longs alignés couvrant une ou plusieurs populations neuronales agrégées enfermées dans un hydrogel tubulaire. Ces échafaudages vivants peuvent servir de relais fonctionnels pour reconstruire ou moduler les circuits neuronaux ou comme bancs biofidéliques imitant la neuroanatomie de la matière grise et blanche.

Réseaux de neurones conçus par micro-tissus tridimensionnels inspirés anatomiquement pour la reconstruction, la modulation et la modélisation du système nerveux

Nous vous présentons le développement des faisceaux auto-assemblés, en trois dimensions du corps alignés longitudinalement astrocytaires cellulaires et des processus dans un enrobage de nouveaux biomatériaux. Ces engineered « vie échafaudages », présentant le diamètre micron-échelle mais qui s’étend de centimètres de longueur, peut servir de bancs d’essai pour étudier les mécanismes du développement neurologique ou faciliter la neurorégénération en direction de la migration neuronale et/ou...

Dimensions des tissus conçus alignement Astrocyte réseaux pour récapituler les mécanismes du développement et de faciliter la régénération du système nerveux

Ce protocole décrit une méthode rentable pour accélérer l’extraction d’ADN plasmidique. En utilisant des racks personnalisés imprimés en 3D compatibles avec des rotors à plaques à godets pivotants standards, les chercheurs peuvent traiter jusqu’à 48 colonnes de rotation avec des capuchons ou jusqu’à 116 colonnes de rotation sans capuchons simultanément, réduisant significativement le temps de manipulation par rapport aux méthodes manuelles de microcentrifugeuse.

Extraction d’ADN de colonne à débit moyen utilisant des racks à 24 puits

Apprenez à récolter des tissus cutanés de pleine épaisseur avec un appareil à microcolonnes minimisant les cicatrices au site donneur. Cette technique permet une collecte efficace pour la recherche en régénération tissulaire.

Appareil pour la récolte de tissus Microcolumns

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