13 octobre 2018
Nous décrivons ici la méthodologie détaillée requise pour mener des expériences d’apprentissage (SEFL) de peur stress améliorée, un modèle préclinique de trouble de stress post-traumatique, chez les rats et les souris. Le modèle utilise des aspects de la crainte pavlovien climatisation et froid comme un indice de la peur accrue chez les rongeurs.
Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences comportementales, telles que la façon de mieux comprendre les mécanismes biologiques sous-jacents du SSPT. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est robuste, fiable, quantitative, et peut être effectuée chez plusieurs espèces. Commencez par mettre en place un ensemble de chambres de conditionnement de la peur pour servir de contexte A, et un deuxième ensemble de chambres de conditionnement de la peur pour servir de contexte B.Place chaque chambre de conditionnement de la peur à l’intérieur d’un cubicule atténuant sonore pour empêcher l’intrusion du bruit extérieur.
Placez ensuite les planchers de grille dans chaque chambre de conditionnement de peur pour la livraison de choc de pied, utilisant un modèle différent de grille pour chaque contexte pour différencier la texture de plancher entre les contextes. Ensuite, placez des inserts triangulaires en plexiglas noir dans le contexte B pour différencier la disposition interne des deux contextes. Essuyez les murs et les portes de la chambre et pulvérisez les casseroles sous les planchers de grille avec une solution de nettoyage diluée.
Après le nettoyage du plancher du réseau, connectez un générateur de choc et un brouilleur capables de fournir un choc d’amplitude de 1 milliamp ou inférieur à chaque plancher de grille pour la livraison de choc du pied. Enfin, utilisez un multimètre pour tester le courant livré par le générateur de choc en plaçant chaque sonde sur une barre différente du plancher de la grille, et en confirmant que l’amplitude de choc souhaitée est produite. Le premier jour, installez le contexte A avec des planchers de grille et de la lumière visible.
Assurez-vous que le multimètre est fixé à différentes barres pour confirmer l’amplitude de choc souhaitée. Transportez les animaux du vivarium à la salle expérimentale dans leurs cages placées sur un chariot, et placez-les individuellement dans les quatre chambres de conditionnement de la peur. Pour les expériences sur la souris, utilisez le générateur de choc et les brouilleurs pour délivrer 10 chocs au pied d’une seconde et un milliamp présentés au hasard pendant plus de 60 minutes à travers les planchers de grille des chambres contenant des sujets conditionnés par traumatisme.
Pour les expériences sur les rats, utilisez le générateur de choc et les brouilleurs pour délivrer 15 chocs à pied d’une seconde et un milliamp présentés au hasard pendant plus de 90 minutes à travers les barres de grille des chambres contenant des sujets conditionnés par traumatisme. Après 90 minutes pour le rat, ou 60 minutes pour les expériences de souris, retournez tous les animaux dans leurs cages et retournez rapidement au vivarium. Le deuxième jour, mettre en place le contexte A et transporter les animaux à la salle expérimentale comme cela a été fait le premier jour.
Placez les animaux dans leur contexte A pendant huit minutes, sans livraison de choc, et enregistrez le comportement pendant toute la session. Après huit minutes, retournez tous les animaux dans leurs cages et retournez rapidement au vivarium. Le troisième jour, mettre en place le contexte B avec un ensemble différent de planchers de grille de ceux utilisés dans le contexte A et noir triangulaire ou blanc inserts en plexiglas incurvé.
Utilisez la lumière infrarouge ou proche infrarouge si nécessaire pour éclairer les chambres, et vérifiez l’amplitude de choc avec le multimètre. Essuyez les chambres et pulvérisez les casseroles sous les planchers de grille avec la solution non utilisée dans le contexte A.Next, transportez les animaux du vivarium à la salle expérimentale dans une baignoire en plastique noir, et placez-les individuellement dans des chambres de conditionnement de la peur. Après une période de référence de 180 secondes, livrer soit une seule seconde, un choc milliamp pied pour les rats, ou un seul deux secondes, un choc milliamp pied pour les souris, à tous les animaux.
Ensuite, retirez tous les animaux 30 secondes après l’accouchement par choc et retournez rapidement au vivarium. Au quatrième jour de la procédure, mettre en place le contexte B comme cela a été fait le troisième jour. Transportez les animaux du vivarium à la salle expérimentale dans le même transport que le troisième jour.
Placez les animaux dans le contexte B pendant huit minutes sans livraison de choc, et enregistrez le gel vidéo tout au long de la session. Enfin, retirez tous les animaux après huit minutes et retournez rapidement au vivarium. Les résultats indiquent que les animaux dans l’état de trauma ont montré des niveaux sensiblement plus élevés de congélation dans le contexte A comparé aux contrôles d’aucun trauma, indiquant l’acquisition de la crainte au contexte de trauma.
Le trauma et aucun animal de trauma n’ont montré des niveaux minimaux de congélation qui n’ont pas différé les uns des autres. En outre, les animaux de trauma ont montré la réactivité inférieure de choc comparée aux contrôles d’aucun trauma, et les animaux de trauma ont montré une plus grande congélation comparée aux contrôles d’aucun trauma, indiquant que l’exposition au stresseur traumatique a augmenté la crainte immédiatement après le stresseur doux. Suivant cette procédure, d’autres méthodes comme le labyrinthe surélevé plus, champ ouvert, et la boîte claire-foncée peuvent être exécutées afin de répondre aux questions additions comme comment le trauma affecte des phénotypes anxieux-comme.
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Cet article décrit la méthodologie permettant de réaliser des expériences d'apprentissage de la peur amplifiée par le stress (SEFL), un modèle préclinique pour l'étude du trouble de stress post-traumatique (PTSD) chez les rongeurs. L'approche intègre un conditionnement classique de la peur et évalue les réponses de peur à travers le comportement de figement.
L'apprentissage de la peur exacerbé par le stress (SEFL) fournit un modèle préclinique solide pour étudier les mécanismes de dysrégulation de la peur pertinents pour la validation ciblée du trouble de stress post-traumatique (PTSD). Ce modèle permet une évaluation quantitative de la sensibilisation de l'apprentissage de la peur induite par un traumatisme, soutenant ainsi la réduction des risques mécanistiques en phase précoce de découverte. En reproduisant une hypermnésie de la peur à long terme suite à un stress aigu, le SEFL contribue à l'évaluation de l'engagement ciblé et de la modulation des voies dans des systèmes pertinents pour la maladie.
SEFL s'inscrit dans le continuum de découverte allant de la validation de l'hypothèse sur la cible jusqu'à l'optimisation du candidat médicamenteux et à l'évaluation de l'efficacité préclinique, en particulier pour les cibles du SNC modulant les réponses de peur et de stress.