Fabrication d’anisotrope polymères artificiels cellules présentatrices d’Activation des cellules T CD8 +

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’ingénierie aminé. Par exemple, quel est le rôle des propriétés physiques des particules sur les interactions et l’activation des cellules immunitaires biomatériaux. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet un contrôle indépendant de la taille et de la forme des particules biomimétiques.

Les implications de cette technique s’étendent vers la thérapie du cancer car il s’agit d’une thérapie par particule disponible sur le marché qui peut causer des réponses immunitaires à base de cellules in vivo. Bien que cette méthode puisse fournir un aperçu de l’aminothérapie contre le cancer, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes. Comme les maladies infectieuses ou le diabète de type 1.

Pour la synthèse des microparticules, commencez par peser 100 milligrammes d’acide poly(lactique-co-glycolique) ou PLGA, dans un flacon de scintillation et en dissolvant le PLGA en cinq millilitres de dichloromethane par vortex. Placez un homogénéiseur dans un bécher contenant 50 millilitres d’alcool polyvinyle à 1 %, ou solution PVA, de sorte que l’homogénéiseur soit le plus près possible du fond du bécher sans le toucher. Allumez l’homogénéiseur à la vitesse appropriée et ajoutez la solution PLGA au bécher pour une minute d’homogénéisation.

À la fin de l’homogénéisation, verser la solution polyvinyle de microparticules PLGA dans un bécher contenant 100 millilitres de solution PVA à 5% sur une plaque de remue-tout dans une hotte chimique et remuer la solution pendant au moins quatre heures. Lorsque le solvant s’est évaporé, versez la solution de particules dans des tubes coniques de 50 millilitres et recueillez les particules par centrifugation. Remplacer le supernatant dans chaque tube par 20 millilitres d’eau déionisée et suspendre à nouveau les particules par vortex.

Ensuite, apportez le volume final dans chaque tube jusqu’à 50 millilitres avec de l’eau fraîche déionisée et lavez les particules deux fois de plus comme nous venons de le démontrer. Pour la synthèse des nanoparticules, dissoudre 200 milligrammes de PLGA en cinq millilitres de dichloromethane et placer une sonde sonicator dans un bécher contenant 50 millilitres de solution PVA de 1% sur la glace sans toucher le fond du bécher. Commencez la sonication à 12 watts et ajoutez immédiatement la solution PLGA au bécher pour une sonication de deux minutes pour générer des nanoparticules d’un diamètre d’environ 200 nanomètres.

Après la sonication, versez la solution nanoparticule PLGA de 1 % d’alcool polyvinyle dans un bécher contenant 100 millilitres de solution 5 PVA sur une plaque de remue-remuer pendant quatre heures d’évaporation du solvant dans une hotte chimique. Lorsque tout le solvant est évaporé, versez la solution de particules dans des tubes coniques de 50 millilitres pour centrifugation afin d’éliminer les microparticules et d’enlever les supernatants. Ensuite, transférez les nanoparticules dans des tubes de centrifugeuse à grande vitesse pour trois lavages dans de l’eau déionisée comme démontré.

Pour la fabrication de particules polymériques, après le dernier lavage, suspendre à nouveau les particules dans environ un millilitre d’eau désionisée fraîche et ajouter une solution de coulée de film aux particules à une concentration finale de 2,5 milligrammes par millilitre de particules. Transférer la suspension de particules en aliquots de 10 millilitres dans des boîtes de Pétri rectangulaires de 75 par 50 millimètres pour un étirement unidimensionnel. Ou en aliquots de 15 millilitres en boîtes de Pétri carrées de 100 par 100 millimètres pour des étirements bidimensionnels.

Après séchage pendant la nuit dans une hotte chimique, utiliser des pinces à épiler pour enlever les films et couper les bords avec des ciseaux. Pour les étirements 1D, placez les deux bords courts d’un film entre deux morceaux de caoutchouc néoprène pour monter sur les blocs d’aluminium d’un axe d’un dispositif automatisé d’étirement à couches minces. Ensuite, utilisez une clé Allen pour visser les poignées métalliques sur le dessus du caoutchouc pour maintenir le film en place.

Pour les étirements 2D, monter les quatre bords sur quatre blocs d’aluminium pour étirer le film sur les deux axes mesurer et enregistrer la longueur du film entre les blocs d’aluminium sur un axe pour un étirement D ou les deux axes pour l’étirement 2D et calculer la distance nécessaire pour étirer le film dans une ou deux directions en fonction de l’étirement du pli désiré. Placez ensuite le dispositif d’étirement chargé de film dans un four à 90 degrés Celsius à côté d’un plus grand bécher d’une petite quantité d’eau pour amener le film à la température plus de 10 minutes. Lorsque l’étirement est terminé, laisser refroidir le film à température ambiante pendant 20 minutes.

Pour les étirements 1D, découpez le film du dispositif d’étirement sur les bords. Pour les étirements 2D, découpez et sauvez le carré central du film qui est uniformément étiré sur les deux axes. Placez les films dans des tubes coniques de 50 millilitres avec pas plus de deux films par tube et ajoutez environ 25 millilitres d’eau déionisée à chaque tube pour le vortex.

Lorsque les films se sont dissous, lavez les particules trois fois dans de l’eau déionisée comme démontré. Re-suspendre les particules dans environ un millilitre d’eau fraîche déionisée par tube après le dernier lavage. Puis congeler les particules à moins 80 degrés Celsius pendant une heure ou la nuit lyophilisation.

Le lendemain matin, suspendez à nouveau les micro ou nanoparticules lyophilisées à 20 milligrammes par millilitre dans un tampon MES fraîchement préparé avec vortex. Ajouter 100 microlitres de la solution de particules à un tube de micro centrifugeuse en polypropylène contenant 900 microlitres de tampon MES et ajouter 100 microlitres de solution EDC NHS fraîchement préparée. Mélanger les particules en vortexant et incuber les particules sur un onduleur à température ambiante pendant 30 minutes.

À la fin de l’incubation, recueillir les particules par centrifugation et suspendre à nouveau les granulés de microparticules dans un millilitre de PBS en vortexant ou en suspendant à nouveau les nanoparticules en un millilitre de PBS par cinq secondes de sonication à deux à trois watts. Ensuite, ajoutez huit microgrammes d’un signal approprié une protéine et 10 microgrammes d’anticorps ANTI souris CD28 aux microparticules, ou 16 microgrammes du signal une protéine et 20 microgrammes d’anti souris CD28 aux nanoparticules. Porter le volume final de chaque tube à 1,1 millilitre avec PBS et incuber les particules pendant la nuit sur un onduleur à quatre degrés Celsius.

Le lendemain, lavez les particules trois fois dans de l’eau désionisée comme démontré. Ces nano et microparticules PLGA ont été synthétisées à l’aide des techniques d’émulsion unique telles que démontrées et photographiées à l’aide de la microscopie électronique de transmission et de balayage. Après homogénéisation, les microparticules ont démontré un diamètre moyen d’environ trois micromètres.

Les microparticules sphériques ont eu une ration d’aspect d’environ un, alors que les particules ellipsoidal étirées de 1D ont eu un rapport d’aspect plus grand d’environ trois et demi et les particules ellipsoidal oblat étirées 2D ont eu un rapport d’aspect d’environ 1.2, maintenant approximativement un rapport d’aspect d’un. Les résultats d’efficacité de conjugaison révèlent les quantités semblables de protéine à la surface de l’antigène micro-artificiel sphérique et ellipsoidal présentant des cellules, ou AAPC et nano-AAPC, démontrant que le couplage de protéine pendant la synthèse d’AAPC se produit d’une manière dépendante de concentration. L’AAPC ellipsoidal prolate s’est trouvé pour induire des niveaux plus élevés de prolifération de cellules T aux doses sous-saturantes que l’AAPC sphérique avec la meilleure séparation réalisée à une dose de milligramme de 01.

Après sept jours, le comptage manuel des lymphocytes T a révélé que l’AAPC ellipsoidal prolate stimule plus efficacement les lymphocytes T par rapport à leurs homologues sphériques à l’échelle micro et nano d’une manière dépendante de la dose. Après cette procédure, l’AAPC peut être administré in vivo pour évaluer leur efficacité thérapeutique et leur pharmacocinétique. Après son développement, cette technique a permis aux chercheurs du domaine de l’immuno-ingénierie d’explorer l’effet de l’anisotropie sur l’efficacité de l’AAPC.