Name: Un protocole de préférence de Place conditionnée pour la mesure de l’Incubation des envies chez les Rats (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 11 s
Description: Découvrez le protocole de préférence de place conditionnée à la morphine pour mesurer l'incubation des envies chez le rat. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes sous-jacents de la toxicomanie et de la mémoire de récompense.

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Ce travail a été soutenu par National Fondation sciences naturelles de Chine (FNSNC) 31741058 (Y.Z.), des subventions gouvernementales de Shenzhen (JCYJ20170818162613877 et JCYJ20170818163217196) et la Chine postdoctorales Science Foundation Grant 2017 M 622826 (K.Z.).

Les procédures expérimentales ont été effectuées conformément aux directives de la garde nationale et l’utilisation des animaux et les expériences ont été approuvées par le Comité de l’urbanisme à Shenzhen Institutes of Advanced Technology, chinois et d’institutionnels animalier Académie des Sciences.
1. animal accoutumance
<ol><li>Obtenir des rats adultes mâles de laboratoire sur des animaux et de les entretenir sous un cycle lumière/obscurité de 12 h (lumière sur de 07:00 à 19:00) avec un accès gratuit à la nourriture et l’eau.</li>
	<li>Manipuler les animaux en jouant avec eux ou leur tapoter deux fois par jour pendant deux semaines avant les expériences.</li>
	<li>Attribuer au hasard animaux en groupes de sérum physiologique ou de la morphine.</li>
</ol>2. préparation de drogue
<ol><li>Préparer de chlorhydrate de morphine 10 mg/ml et injecter des rats par voie intrapéritonéale (i.p.) à un volume de 1 mL/kg.</li>
	<li>Comme contrôle, injecter des rats avec du sérum physiologique à un volume de 1 mL/kg.</li>
</ol>3. appareil de PPC
<ol><li>Construire un appareil de PPC de trois chambres avec repères tactiles différentes (étage) et tester de préférence initiale des rats aux deux chambres à côté. L’appareil se compose de deux chambres grand côté noir (30 cm x 25 cm × 30 cm, L × W × H) et une chambre blanche (11 cm x 25 cm x 30 cm, L × W × H) intercalaire avec sol en PVC blanc lisse. Les deux chambres ont des textures de sol différentes comme repères somatosensoriels : une avec un étage de plexiglass de grille, l’autre avec un plancher de PVC rugueux.</li>
	<li>Varier la combinaison des repères tactiles pour s’assurer que l’appareil est impartial, puisqu’un appareil partial est sensible à ce qui donne des résultats faussement positifs4. NOTE : Un problème méthodologique important dans la conception de l’appareil de PPC est si l’appareil est « biaisée » ou « non biaisée »4. Si un groupe de rats inexpérimentés ne montre aucune préférence initiale pour la chambre d’un côté plutôt qu’un autre, l’appareil est considéré comme « non biaisée ». Dans le cas contraire, considérer comme « partiales »13.</li>
</ol>4. procédure du RPC
<ol><li>Mettre en place le paradigme du RPC induite par la morphine principalement selon les précédentes études21,22 , avec modification du conditionnement des points dans le temps, nombre de séances de conditionnement, de conditionnement de période d’essai et d’essai des moments20 . Une brève description est donnée ci-dessous, dont la planification expérimentale est représentée dans la Figure 1.</li>
	<li>Phase de préconditionnement<ol>
<li>Pendant cette phase (jour 1 à 3), enlever les portes de la guillotine pour permettre le libre accès à l’ensemble de l’appareil et placez l’animal dans le compartiment intermédiaire.</li>
		<li>Enregistrer l’activité des animaux pendant 15 min.</li>
		<li>Calculer le temps passé dans les chambres des deux côté jour 3 sous la ligne de base et se réfèrent à ceci comme T0.</li>
		<li>Supprimer les rats qui entrez moins de - quatre fois à une des chambres à côté de l' expérience23 comme ces rats sont susceptibles d’avoir des problèmes au bien-être général (p. ex., fourrure sale et ayant des tumeurs). Vérifier l’état de santé des animaux pendant la période expérimentale ensemble.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Phase de conditionnement Remarque : La phase de conditionnement comprend 6 jours (4 à 9).<ol>
<li>Pour les sujets conditionné par la morphine, injecter des rats i.p. avec morphine (10 mg/kg) ou une solution saline (1 mL/kg) alternativement dans les séances du matin (09:00) et soir (19:00) (10 h d’intervalle).</li>
		<li>Confiner les rats après chaque injection à sa drogue-apparié (non préférés) ou chambre (préférée) couplé à la solution saline pendant 45 min (Figure 1 b).</li>
		<li>Maintenir le système d’enregistrement vidéo. NOTE : D’après notre expérience, environ 5 % des rats ont la dépression respiratoire après la première injection de morphine (10 mg/kg). Dans un tel cas, pour augmenter le taux de survie des rats de dépression respiratoires, sortir le rat de la chambre de conditionnement, sortir sa langue et le mettre sur un papier de soie blanc dans sa cage maison.</li>
		<li>Pour les contrôles conditionnée par une solution saline, donner des rats injections salines (1 mL/kg) avant l’exposition à une chambre latérale de l’appareil de la RPC au cours de la séance du matin et de l’autre côté au cours de la session du soir pour 45 min/session en ligne avec groupe morphine (Figure 1 C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Phase de test<ol>
<li>Pendant cette phase, enlever les portes de la guillotine pour permettre le libre accès à l’ensemble de l’appareil et placez l’animal dans le compartiment intermédiaire de les laisser explorer librement l’appareil entier pendant 15 min.</li>
		<li>Enregistrer leur activité durant cette 15 min.</li>
		<li>Effectuer trois essais après le conditionnement, c'est-à-dire tester 1 (T1), 2 (T2) et essai 3 (T3), 2 jours, 10 jours et 18 jours après la dernière session de climatisation dans un État exempt de morphine, respectivement (Figure 1 a).</li>
		<li>Varier les essais points dans le temps pour différents buts expérimentaux. Remarque : Afin de minimiser le nombre de rats requis, une conception intra-sujet est employée. Toutefois, afin d’exclure l’effet de l’extinction, un entre l’objet design est requis.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig1.jpg"> Figure 1 : procédures expérimentales. (A) procédures expérimentales de l’ensemble du processus du RPC. B Annexe expérimentale de la phase de conditionnement du groupe morphine. Expérimental (C) calendrier de la phase de conditionnement du groupe salin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig1large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
5. analyse
<ol><li>Calculer le score de RPC dans morphine(saline) du groupe : score de RPC = le temps passé dans la chambre (non préférés) jumelé à la drogue / le temps total passé dans les deux chambres de climatisation.</li>
	<li>Effectuer l’analyse des données des scores de la RPC et les entrées aux chambres à côté des méthodes statistiques appropriées à l’aide de SPSS.</li>
	<li>Présenter toutes les données comportementales comme moyenne ± SEM, SEM correspondant à l’erreur-type de la moyenne. En considération les valeurs de p &lt; 0,05 comme statistiquement significative et indiquer par des astérisques (*) et octothorpesin (#) dans les chiffres.</li>
</ol>

<ol><li>Leshner, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction+is+a+brain+disease%2C+and+it+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Addiction is a brain disease, and it matters.</a> Science. 278 (5335), 45-47 (1997).</li>
<li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/npp2009110">Neurocircuitry of Addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li>
<li>Zhu, Y., Wienecke, C. F., Nachtrab, G., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thalamic+input+to+the+nucleus+accumbens+mediates+opiate+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A thalamic input to the nucleus accumbens mediates opiate dependence.</a> Nature. 530 (7589), 219-222 (2016).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+paradigm%3A+a+comprehensive+review+of+drug+effects%2C+recent+progress+and+new+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues.</a> Progress in Neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+%28CPP%29+paradigm%3A+update+of+the+last+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).</li>
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<li>Lin, X., Wang, Q., Cheng, Y., Ji, J., Yu, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+protein+expression+profiles+in+the+amygdala+during+the+process+of+morphine-induced+conditioned+place+preference+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Changes of protein expression profiles in the amygdala during the process of morphine-induced conditioned place preference in rats.</a> Behavioural Brain Research. 221 (1), 197-206 (2011).</li>
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<li>Vanderschuren, L. J., Everitt, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+seeking+becomes+compulsive+after+prolonged+cocaine+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drug seeking becomes compulsive after prolonged cocaine self-administration.</a> Science. 305 (5686), 1017-1019 (2004).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ici, une méthode qui utilise un paradigme de RPC de la morphine est décrite pour implanter la mémoire à long terme de récompense dans rat avec repères somatosensoriels comme contexte conditionné. Pour construire ce une mémoire à long terme de récompense, un précédent protocole21 avec un appareil de PPC équilibré est modifié et les sessions de sérum physiologique et de la morphine sont ensemble au moins 10 h dehors. En outre, plusieurs séances de conditionnement sont ajoutés pendant la phase de conditionnement pour améliorer l’apprentissage associatif. Mis à part les scores de la RPC, les entrées des deux chambres sont mesurées et la configuration des entrées accrues aux chambres côté est similaire à celle des réponses actives accrues dans le paradigme de l’auto-administration.
Plusieurs facteurs influent sur la mise en place du paradigme du RPC mentionné ci-dessus. Un des facteurs clés sont la conception de l’appareil : rats en général doivent avoir une préférence similaire aux deux chambres de côté pour s’assurer que l’appareil est équilibré. Un appareil déséquilibré peut masquer l’acquisition de la RPC en raison de la préférence initiale élevée à un côté chambre13. Par conséquent, préférence extrême à une chambre latérale (plus de 90 % du temps total dans l’une des chambres à deux côté) doit être évitée lors du choix de la texture de la parole ou d’autres indices contextuels. À des fins expérimentales différentes, les expérimentateurs peuvent équilibrer l’appareil de PPC en modifiant les stimuli contextuels. Pour les appareils équilibré, deux façons de conception expérimentale sont couramment utilisés4. Une façon partiale est aux médicaments de paire avec la chambre non préférés avec tous les sujets ; une façon impartiale consiste à coupler la moitié des animaux avec des médicaments dans la chambre non préférés, l’autre moitié avec la chambre préférée. Les deux manières peuvent établir des RPC13 mais études17,25 , avec la conception de ce dernier exclut toujours beaucoup de sujets en raison de leur forte préférence pour la chambre d’un côté. Comme il existe une vulnérabilité individuelle au drug addiction26,27,28 , une conception biaisée a été choisie dans cette étude pour échapper à l’exclusion de sujets sains. Une limitation de conception biaisée est l’effet de préférence incompatible aux chambres à côté. Comme illustré à la Figure 2, rats du groupe salin ont cohérente faibles scores de RPC pour la chambre initiale non préférés. Ainsi, la possibilité que préférence incompatible aux chambres côté pourrait affecter les notes du RPC dans le groupe morphine est exclue par les réglages saline. Pour éviter l’effet du plafond de la chambre préférée, nous utilisons la chambre initiale non préférés comme la chambre appariés de la morphine. Pour éviter l’effet de la nouveauté et du stress sur la préférence de base aux chambres à côté, trois séances de conditionnement sont effectuées, et la troisième session est utilisée comme référence. Le quatrième facteur est l’intervalle entre la morphine et de séances de salines. Dans notre paradigme, nous choisissons des intervalles d’au moins 10 heures pour éviter l’effet de retrait dans la période de conditionnement saline. La dose de morphine est également un facteur important. Très faibles doses de morphine, tels que 0,01 mg/kg6, n’induisent pas de préférence de place. Une dose de 10 mg/kg induites par la plus haute du score RPC17 chez le rat et est couramment utilisée dans la rat morphine RPC études17,21,23. Toutefois, 10 mg/kg de morphine (i.p.) pouvait induire une dépression respiratoire chez environ 5 % des rats. Des doses plus faibles de la morphine, par exemple de 5 mg/kg, pourraient être utilisés dans de futures études. Pour d’autres espèces, comme la musaraigne d’arbre, tolérance aux médicaments devrait considérer lors de la construction le paradigme de la RPC. Étant donné que la musaraigne d’arbre se développe rapide tolérance à la morphine, une augmentation des doses de morphine doivent être utilisés pendant le conditionnement phase29,30.
Avec le protocole modifié, une mémoire à long terme de récompense est mis en place pendant au moins 18 jours après 6 jours de conditionnement11 (Figure 2). Les études futures devraient mesurer si RPC pourrait être maintenu pendant une longue période. Rechutes répétées est l’obstacle majeur dans le traitement de la toxicomanie. Stress, signaux environnementaux et drogues pouvaient induire la rechute. Après extinction de la mémoire de la RPC, ce modèle pourrait être utilisé pour modéliser la rechute induite par le stress ou les médicaments.
Les entrées aux chambres dans le groupe morphine jumelé à la drogue a augmenté dans l’abstinence période11 (Figure 3), qui est similaire avec les réponses actives accrues dans le paradigme de l’auto-administration. Cependant, entrées dans la chambre saline-couplé augmente également avec le paradigme du RPC dans les rats et les musaraignes d’arbre11, qui est différent à partir des réponses inactifs du paradigme auto-administration. Cette différence pourrait en raison des principes sous-jacents différents des deux paradigmes : l’un est le conditionnement classique, l’autre est conditionnement opérant. En outre, musaraignes d’arbre avec de la nourriture Qu'au RPC expériences n’ont pas montré un tel modèle d’une augmentation des entrées30. Donc, les entrées accrues aux deux chambres côté chez les animaux expérimentés morphine sont censées représenter couvé envie de médicaments. Bien que la limitation de l’utilisation de mesures répétées chez un sujet ne peut être exclue, la configuration des entrées accrues a été conservée dans les rats11, musaraignes d’arbre11,30 et singes31. Néanmoins, une entre la conception du sujet pendant l’abstinence période est fortement recommandé pour les futures études d’exclure l’effet de l’extinction des mesures répétées.
Mis à part les entrées accrues, des scores de RPC avec de faibles doses de morphine (1 mg/kg et 3 mg/kg) augmente progressivement au cours de la période d’abstinence17. Ces résultats suggèrent que le paradigme de la RPC pourrait aussi modéliser l’incubation du phénomène de soif. Toutefois, un score de RPC accru peut représenter également une mémoire accrue pour le stimulus conditionné. Dans cet aspect, entrées aux chambres côté dans un appareil de trois compartiments, qui ressemblent aux réponses actives dans le paradigme de l’auto-administration, ressemblent davantage à la recherche de drogues ou de l’effet gratifiant de médicaments. Il serait intéressant de vérifier les tendances des entrées aux chambres de côté pendant la période d’abstinence dans les paradigmes de RPC de rat de faibles doses de morphine. Futures études avec d’autres médicaments et de la souris doivent être faits pour vérifier si ce phénomène est conservé dans l’ensemble de drogues d’abus/espèces.

La toxicomanie est une maladie chronique1 avec plusieurs différents stades2: hyperphagie/intoxication, retrait/negative affect et préoccupation/anticipation. Dans la phase initiale hyperphagie/intoxication du cycle de dépendance drogue, sujets prennent des médicaments en raison de l’armature effect2. Dans la phase d’affect de retrait/négatif, sujets d’expérience négatives États somatiques et émotionnelles du retrait de la drogue, qui promouvoir des mécanismes de renforcement négatif associées au développement de la toxicomanie3. Dans la scène de préoccupation/anticipation, sujets rétablissement la recherche de drogue après extinction, ce qui pourrait être déclenchée par les indices liés à la drogue ou facteurs de stress. Dans les études animales de la toxicomanie, lieu conditionné paradigmes de préférence (RPC) sont utilisés pour simuler l’effet positif de renfort de médicaments4,5,6 et, par conséquent, il est utilisé pour modéliser la phase initiale de la drogue cycle de la dépendance. La morphine, un membre de la famille des opioïdes, produit un effet de renforcement positif en activant les récepteurs opioïdes dans le cerveau7,8.
Le paradigme du RPC est basé sur le principe du classique (pavlovien) conditionnement et couramment utilisé pour mesurer l’effet gratifiant de drogues d’abus, tels que la morphine4,5,9,10, en raison de son facile disponibilité dans les laboratoires. Un paradigme de RPC typique comprend trois phases : phases de pré-conditionnement, de climatisation et de test. Au cours de la phase de conditionnement, les propriétés enrichissantes d’un médicament (stimulus inconditionnel) sont associées à un ou plusieurs stimuli contextuels neutres, qui gagner propriétés enrichissantes après plusieurs jumelages de conditionnement et servent de stimulus conditionné. Pendant la phase de test, préférence des animaux pour les compartiments jumelés à la drogue sont mesurées et consignées comme leur mémoire de récompense. Pour cette raison, le paradigme du RPC est également utilisé pour étudier les mécanismes d’apprentissage et de mémorisation. Pour établir une mémoire à long terme de la récompense de la morphine, variables qui influent sur l’établissement de la RPC ont été ajustés et optimisés avec le dessous protocole décrit11. Des stimuli contextuels sont une combinaison de visuels, tactiles et repères de l’odeur. Variations de stimuli contextuels et essais points dans le temps sont élaborées selon des fins de recherche différents. Par exemple dans notre précédente étude12les repères somatosensoriels (textures de sol différents) ont été utilisées principalement comme stimuli contextuels pour enquêter sur le rôle de la partie caudale de l’insula, une région du cerveau avec fonction somesthésique, dans le cadre de l’acquisition et l’entretien de la mémoire à long terme de récompense. La conception de l’appareil et l’affectation des rats aux côtés de préféré/non préférentiels affectent la mise en place de la RPC. Un appareil de trois chambres au lieu d’un appareil à deux chambres est utilisé dans les dessous de protocole pour éviter des choix forcés. L’équilibre des deux chambres et l’attribution initiale des animaux dans leur affecte l’acquisition de RPC4,13. Ainsi, un plan équilibré des chambres côté et biaisée cession d’animaux sont appliquées dans le présent protocole en vue d’acquérir une préférence de place forte. Maintien de la mémoire à long terme de récompense nécessite plusieurs essais de déconditionnement pendant la phase de conditionnement. Pour réduire le coût du temps pendant la phase de conditionnement, deux essais de déconditionnement par jour sont effectués et des injections de morphine/saline sont contrebalancées pour éviter l’effet de retrait aigu de la morphine dans les essais appariées saline4.
Rétablissement des modèles animaux14 ont été établis pour modéliser la scène préoccupation/anticipation du cycle de dépendance de drogue. RPC est également utilisé pour étudier le rétablissement qui modélise la rechute à addictives5. Rechute est un des obstacles dans le traitement de la toxicomanie. Envie est une cause de rechutes répétées. La soif de drogues augmente constamment au cours de la période d’abstinence, un phénomène appelé incubation d’envie15,16. L’incubation de soif est largement étudiée dans le paradigme de l’auto-administration de drogue mais pas le paradigme de la RPC. L’utilisation du paradigme du RPC afin de refléter l’incubation des envies a d’abord été proposée par Li et al. 17. leurs résultats17 a montré que les scores de la RPC de faibles doses de morphine (1 mg/kg et 3 mg/kg), mais pas une forte dose (10 mg/kg) a augmenté progressivement pendant les 14 premiers jours d’abstinence. De même, les souris injectées avec une faible dose de cocaïne ont montré une augmentation des scores de RPC au fil du temps,18. Les scores du RPC accrues des faibles doses de morphine ont été utilisés afin de tenir compte des envies couvés17. Durée passée dans tant nombre d’entrées dans l’environnement associés aux drogues est suggéré pour refléter les réponses conditionné se renforcent dans le paradigme de RPC19. La plupart des études récentes permet de directement ou indirectement reflètent le temps consacré à la drogue-jumelé chambres tandis que le nombre d’entrées aux chambres à côté comme un paramètre est souvent négligé des scores du RPC. Pour ces raisons, une dose de morphine 10 mg/kg a été utilisée et le nombre d’entrées a été mesuré dans notre étude11. Les résultats montrent que les entrées des rats aux chambres côté augmenté sensiblement au cours de la période d’abstinence11. Cela indique que les scores de la RPC et nombre d’entrées sont des paramètres utiles pour évaluer la soif accrue de médicaments et le paradigme de la RPC s’applique pour modéliser l’incubation du phénomène de soif. Toutefois, afin de réduire le nombre d’animaux nécessaires, un groupe d’animaux expérimentés la morphine est testé à plusieurs reprises ; ainsi, l’effet d’extinction ne pouvait être exclu avec le courant dans la conception de l’objet. A entre la conception du sujet suivant le même protocole peut surmonter cette limitation.
La section suivante décrit le protocole RPC qui établie la mémoire à long terme de récompense et modélisé une soif accrue. Brièvement, après trois jours de pré-conditionnement, les rats passent par six jours de climatisation avec deux essais de déconditionnement par jour et sont ensuite testés à des moments différents après le dernier essai de conditionnement. Dans ce paradigme de la RPC, une boîte de trois-chambre polychlorure de vinyle (PVC) utilisée comme l’appareil de PPC est construite et le plancher de l’appareil est équilibré. L’appareil se compose de deux chambres grand côté noir (30 cm x 25 cm × 30 cm, L × W × H) et une chambre blanche (11 cm x 25 cm x 30 cm, L × W × H) intercalaire avec sol en PVC blanc lisse. Les deux chambres ont des textures de sol différentes comme repères somatosensoriels : une avec un étage de plexiglass de grille, l’autre avec un plancher de PVC rugueux.

<table><tbody><tr><td>Morphine</td><td>Shenyang Première usine</td><td></td><td></td>pharmaceutique</tr><tr><td>Appareil CPP / Caméra</td><td>Anlai Technology Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS</td><td>IBM Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

un protocole de préférence de place conditionnée pour la mesure de l’incubation des envies chez les rats

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Des principales causes des poussées répétées sont une soif de la drogue. Médicament soif augmente progressivement au cours de la période d’abstinence, un phénomène appelé incubation des envies de drogue. Nous décrivons ici un protocole de préférence (RPC) lieu de morphine conditionné pour la mesure de l’incubation des envies chez les rats. Dans le présent protocole, un paradigme CPP employant principalement cues somatosensoriels est utilisé pour établir une mémoire à long terme de la récompense de la morphine. Une boîte de RPC de trois chambres qui se distingue dans la texture du fond de la chambre est construite. Tout d’abord, les animaux sont testés pour leur préférence de base pour les deux chambres pour trois jours consécutifs. Puis, ils sont des injections intrapéritonéales de morphine/solution saline et mis dans leur chambre non préféré/préférés pendant 45 min. Après 6 jours de conditionnement, leur préférence pour les chambres côté est testée à différents moments pendant 15 minutes après la dernière séance de conditionnement. Avec ce paradigme, la mémoire de la récompense de la morphine pourrait durer pendant au moins 18 jours. Pour vérifier que le protocole susmentionné peut modéliser une soif accrue, le nombre d’entrées dans les deux chambres est compté au cours de la période d’abstinence. Les résultats montrent que les entrées augmente, ce qui suggère que le paradigme de la RPC pourrait imiter l’incubation de soif. Les études à venir peuvent utiliser ce modèle pour étudier les mécanismes neuronaux qui sous-tendent la mémoire à long terme et l’incubation des envies.

Les résultats représentatifs suivants montrent qu’une morphine que RPC peut être établi avec succès par le protocole décrit ci-dessus et la mémoire à long terme de récompense la morphine (Figure 2) peut être maintenue. Le nombre d’entrées aux chambres à côté, analogues au nombre de réponses actives dans le paradigme de l’auto-administration, reflète la propriété renfort de morphine. L’augmentation du nombre d’entrées (Figure 3), indiquant l’incubation de la soif, a été observé à l’aide de ce paradigme de RPC de la morphine.
Mémoire du RPC pourrait durer au moins 18 jours après la dernière séance de conditionnement.
Vingt et un rat dans le groupe morphine et 10 rats du groupe salin ont été utilisés pour tester l’expression de la mémoire à long terme enrichissante. Une ANOVA mixte ont révélé des différences significatives dans l’interaction entre le groupe et test (F (3,87) = 4.973, p = 0,003), tester (F (3,87) = 18.237, p &lt; 0,001) et groupe (F (1,29) = 11.413, p = 0,002). Des différences significatives entre les tests (F (3,60) = 46.628, p &lt; 0,001) dans le groupe morphine mais pas de saline group(F(3,27) = 1,576, p = 0,218) ont été détectés par une ANOVA à plusieurs reprise. L’analyse de comparaison multiple avec ajustement de Bonferroni ont montré des différences significatives entre les trois tests et T0 dans le groupe morphine. Comme illustré à la Figure 2, la mémoire de récompense de morphine a duré au moins 18 jours et a diminué dans une tendance dépendante du temps. Les données proviennent d’une précédente étude publiée11.
Entrées des compartiments latéraux dans le groupe morphine augmenté progressivement
Groupe de morphine Pour tester la tendance des entrées, groupe (couplé à la solution saline et la morphine-jumelé) comme facteur inter-sujets et test (T0, T1, T2 et T3) comme facteur intra-sujets ont été fixées pour une ANOVA mixte. Aucune différence significative dans l’interaction entre le groupe et test (F (2.311,92.449) = 1,915, p = 0,147) et groupe (F(1,40) = 0,898, p = 0,349), mais la signification en test (F(2.311,92.499) = 24.243, p &lt; 0,001), ont été détectés. L’analyse de comparaison multiple avec test de différence (LSD) moins importante a montré des différences significatives entre T1 et T0 (p &lt; 0,001), T2 et T0 (p &lt; 0,001) et T3 et T0 (p &lt; 0,001) dans le groupe morphine dans entrées jumelé à la morphine. En ce qui concerne compartiments couplé à la solution saline, significations statistiques existaient entre T2 et T0 (p = 0,002) et de T3 et de T0 (p = 0,003) mais pas de T1 et T0 (p = 0,246), qui est semblable au modèle d’incubation d’héroïne envie24. En général, entrées aux chambres à côté de la morphine groupe accrue temps-dépendante.
Rats entrés plus fréquemment dans le compartiment associé à la morphine que compartiment saline-jumelée à T1 (t(1,21) =-2.833, p = 0,010) et T2 (t(1,21) =-4.458, p = 0,0002) mais pas de T3 (t(1,21) =-0.471, p = 0,642) (à deux queues jumelé tests t).
Groupe salin Similaires avec le groupe de la morphine, une mixte ANOVA a été appliquée et ne révèle aucune différence significative dans l’interaction entre le groupe et test (F(3,54) = 0,345, p = 0,793), tester (F(3,54) = 1.793, p = 0.159) et groupe (F(1,18) = 0,151, p = 0,702). Ainsi, les entrées des chambres à côté du groupe salins étaient stables au fil du temps.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig2.jpg"> Figure 2 : mémoire du RPC peut durer au moins 18 jours, mais diminue avec le temps. Rétention de la mémoire du RPC dans le groupe morphine (n = 21) et le groupe salin (n = 10) a été évaluée en mesurant le score du RPC pour plusieurs points dans le temps après conditionnement dernier (T1, 2 jours ; T2, T3, 18 jours et 10 jours). Toutes les valeurs des scores de la RPC sont moyenne ± SEM. ### indique p &lt; 0,001 et ## signifie p &lt; 0,01 comparée groupe salin ; indique le p &lt; 0,001 comparée à T0 dans le groupe morphine. Ce chiffre a été modifié par Sun et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig2large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig3.jpg"> Figure 3 : entrées des chambres-groupes de morphine et solution saline. Entrées aux deux chambres de côté dans le groupe morphine (n = 21) et le groupe salin (n = 10) ont été évaluées à plusieurs points dans le temps après le dernier conditionnement (T1, 2 jours ; T2, T3, 18 jours et 10 jours) et par rapport à T0. Toutes les valeurs d’entrées sont moyenne ± SEM Dans le groupe morphine (A), entrées du côté de la morphine-jumelé augmenté très sensiblement de T1 à T3 tout en entrées de chambre saline-jumelée seulement augmenté de T2. T apparié teste avec la morphine-couplé et jumelé à une solution saline habitacle ont montré une augmentation très significative en T1 et en T2. Dans le groupe salin (B), il n’y a aucun changement significatif dans les entrées des deux côtés. Ce chiffre a été modifié par Sun et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig3large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>

Ici, un protocole de préférence (RPC) de lieu de morphine conditionné est décrit pour mesurer l’incubation des envies chez les rats.

Un protocole de préférence de Place conditionnée pour la mesure de l’Incubation des envies chez les Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Cette méthode peut aider à répondre à certaines questions clés dans le domaine de la toxicomanie sur les envies de consommation de drogues et l’incubation de la réponse envie. Avec seulement six jours de conditionnement de morphine, la réponse conditionnée de mémoire de préférence de place peut être prolongée à 18 jours pour l’observation des phénomènes d’envie dans le modèle de rat. Les implications de ce modèle de conditionnement de morphine de rat s’étendent vers la poursuite de notre compréhension des mécanismes sous-jacents de l’incubation des fringales.Avant de commencer la procédure, construire un appareil de préférence de place conditionné à trois chambres composé de deux grandes chambres latérales noires de 30 x 25 par 30 centimètres. Et un blanc 11 par 25 par 30 centimètres chambre moyenne, avec un lisse, plancher blanc en PVC. Ajoutez ensuite différents indices tactiles aux chambres latérales pour tester les préférences initiales du rat.Pour le pré-conditionnement des animaux, retirez les portes de guillotine pour permettre un accès gratuit à l’ensemble de l’appareil. Et placez un rat dans la chambre du milieu. Enregistrez l’activité de l’animal pendant 15 minutes, en calculant le temps passé dans les deux chambres latérales le troisième jour comme base de référence.Pour le conditionnement des animaux, injecter le groupe de rats conditionnés à la morphine avec un millilitre par kilogramme de 10 milligrammes par millilitre morphine hydrochlorure IP le matin. Et avec un millilitre par kilogramme salin 10 heures plus tard, tous les jours pendant six jours. Placer chaque rat dans sa chambre préférée jumelée, non préférée ou saline appropriée pendant 45 minutes immédiatement après chaque injection.Pour l’essai des animaux conditionnés à la morphine, les jours deux, 10 et 18 après la dernière séance de conditionnement, retirez les portes de guillotine pour permettre un accès gratuit à l’ensemble de l’appareil. Et enregistrez l’activité de chaque animal pendant 15 minutes après le placement dans la chambre centrale pour l’exploration libre de l’appareil entier dans un état libre de morphine. La rétention de mémoire de la préférence de place conditionnée dans les groupes morphine et salin est évaluée en mesurant le score conditionné de préférence de place à plusieurs points de temps après la dernière session de conditionnement.Le nombre d’entrées dans les chambres latérales est analogue au nombre de réponses actives dans le paradigme de l’auto-administration, reflétant la propriété de renforcement de la morphine et avec un nombre accru d’entrées indiquant l’incubation de l’envie. Comme il est illustré, une préférence de place conditionnée à la morphine peut être établie avec succès à l’aide de ce protocole. Induire une mémoire de récompense de morphine à long terme pour un jusqu’à 18 jours après la dernière séance de conditionnement.Lorsque vous essayez cette procédure, il est important de se rappeler de choisir d’équilibrer les repères tactiles. Suite à cette procédure, d’autres mesures comme la réintégration après chaque conditionnement peuvent être effectuées. Pour répondre à d’autres questions sur la question de savoir si la réintégration sous l’incubation de l’envie ont des mécanismes sous-jacents similaires.Après la réintégration, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’ajout de médicaments pour explorer l’incubation de l’envie dans les paradigmes de préférence de place conditionnés par les rats.

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Recherche

JoVE Journal

Behavior

Comportement

Opérant de médicaments auto-administration et de préférence de place conditionnée (RPC) des procédures sont expansive utilisé en recherche pour le modèle diverses composantes de renforcement de drogue, la consommation et la dépendance chez l'homme. Dans ce rapport, nous avons combiné des méthodes traditionnelles de RPC et de l'auto-administration que d'une nouvelle approche pour étudier le renforcement de drogue et la toxicomanie chez les rats.

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Découvrez le protocole de préférence de place conditionnée à la morphine pour mesurer l'incubation des envies chez le rat. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes sous-jacents de la toxicomanie et de la mémoire de récompense.

Un protocole de préférence de Place conditionnée pour la mesure de l’Incubation des envies chez les Rats

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