Name: Microdialyse d’acides aminés excitateurs durant les enregistrements EEG en se déplaçant librement des Rats (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Découvrez la microdialyse d'acides aminés excitateurs couplée à l'EEG chez le rat en mouvement libre. Cette méthode permet d'analyser la libération de glutamate et d'aspartate dans l'hippocampus ventral.

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Les auteurs tiennent à remercier Anna Binaschi, Paolo Roncon et Eleonora Palma pour leur contribution aux manuscrits publiés en priorité.

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans ce travail, nous montrons comment un enregistrement continu de la vidéo-EEG couplé avec la microdialyse peut être effectué dans un modèle expérimental d’ELT. Techniques d’enregistrement de vidéo-EEG sont utilisés pour diagnostiquer correctement les différentes phases de la progression de la maladie chez les animaux et la technique de la microdialyse est utilisée pour décrire les changements dans la libération de glutamate qui se produisent dans le temps (aucuns changements n’ont été trouvés pour aspartate dans une é...

Pour donner un aperçu de la déficience fonctionnelle d’induite par le glutamate excitateur et la neurotransmission inhibitrice GABAergique, ayant pour résultat des saisies spontanées dans l’épilepsie du lobe temporal (TLE), nous avons systématiquement suivi des concentrations extracellulaires de GABA1 et plus tard les niveaux de glutamate et l’aspartate2 par microdialyse dans l’hippocampe ventral de rats à divers moments de la maladie naturelle du cours, c'est-à-dirependant le développement et la progression de l’épilepsie. Nous avons profité du modèle TLE, pilocarpine chez les rats, qui imite la maladie très précisément en termes de changements comportementaux, électrophysiologique et histopathologiques3,4 et nous avons une corrélation entre la concentration dialyse aminés acides à ses différentes phases : la phase aiguë après l’insulte épileptogène, la phase de latence, le temps de la première saisie spontanée et la chronique phass5,6,7. Encadrant les phases de la maladie a été activée par la surveillance à long terme de vidéo-EEG et l’EEG précis et caractérisation clinique des crises spontanées. Application de la technique de la microdialyse associées au contrôle de vidéo-EEG à long terme nous a permis de proposer des hypothèses mécanistiques de neuropathologie TLE. En résumé, la technique décrite dans ce manuscrit permet l’appariement des altérations neurochimiques dans une zone du cerveau définie avec le développement et la progression de l’épilepsie chez un modèle animal.
Couplés, constituées d’une électrode de profondeur juxtaposée à une canule microdialyse, sont souvent employés dans des études de recherche de l’épilepsie où les changements dans les neurotransmetteurs, métabolites ou des substrats énergétiques doivent être corrélée à l’activité neuronale. Dans la grande majorité des cas, il est utilisé en comportement librement les animaux, mais il peut être également effectuée d’une manière similaire à des êtres humains, par exemple, chez des patients épileptiques pharmaco-résistante, objet d’une enquête d’électrode profondeur avant la chirurgie,8. Les enregistrement EEG et dialyse collection peuvent être effectués séparément (par exemple, l’implantation de l’électrode dans un hémisphère et la microdialyse sonde dans l’autre hémisphère ou même effectuer la microdialyse dans un groupe d’animaux lors de l’exécution l’EEG seule dans un autre groupe d’animaux). Toutefois, les électrodes de couplage aux sondes peut présenter des avantages multiples : il simplifie la chirurgie stéréotaxique, limite les dommages aux tissus d’un seul hémisphère (tout en laissant l’autre, intact, comme un contrôle pour des études histologiques) et homogénéiser les résultats que ces proviennent de la même région du cerveau et le même animal.
En revanche, la préparation de l’appareil de sonde-électrode microdialyse couplés exige des compétences et le temps si c’est fait maison. On pourrait passer des quantités relativement élevées d’argent si acheté sur le marché. En outre, quand des sondes microdialyse (pointes de test sont généralement de 200 à 400 µm de diamètre et de 7 à 12 mm de long)9et des électrodes EEG (extrémités des électrodes sont généralement de 300 à 500 µm de diamètre et assez longtemps pour atteindre la structure du cerveau d’intérêt10) sont couplé, cet appareil monté représente un objet relativement lourd et encombrant sur un côté de la tête, ce qui est gênant pour les animaux et sujette à être perdu surtout quand il est connecté à la pompe de dialyse et le système d’enregistrement EEG fil dur. Cet aspect est plus pertinent chez les animaux épileptiques qui sont difficiles à manipuler et moins adaptative pour les sessions de microdialysis. Les techniques chirurgicales adéquates et des soins postopératoires appropriés peuvent entraîner des implants de longue durée qui incommode animaux minime et devraient être poursuivis pour des expériences de combinatoire microdialyse-EEG10,11, 12.
Les avantages et les limites de la technique de la microdialyse ont été examinées en détail par de nombreux chercheurs en neurosciences. Son principal avantage sur les autres en vivo perfusion techniques (p. ex., débit rapide push pull ou perfusion corticale coupe) est un petit diamètre de la sonde qui couvre une superficie relativement précise des intérêts13,14, 15. Deuxièmement, la membrane de la microdialyse crée une barrière physique entre le tissu et le perfusat ; par conséquent, les substances de poids moléculaire élevé ne se croisent pas et n’interfèrent pas avec l’analyse16,17. En outre, le tissu est protégé contre l’écoulement turbulent du perfusat18. Un autre avantage important est la possibilité de modifier le flux du perfusat pour maximiser la concentration de l’analyte dans le perfusat (c'est-à-dire, le processus de microdialyse peut être bien défini mathématiquement et peuvent être modifié pour le rendement élevé concentration de l’analyte dans l’échantillon)19. Enfin, la technique peut servir pour infuser les drogues ou les substances pharmacologiquement actives dans les tissus d’intérêt et de déterminer leur effet sur le site de l’intervention20. En revanche, microdialyse a un temps de résolution limitée (généralement plus de 1 min à cause du temps nécessaire pour le prélèvement d’échantillons) par rapport aux capteurs électrochimiques ou biologiques ; C’est une technique invasive qui provoque des lésions tissulaires ; elle compromet l’équilibre neurochimique au sein de l’espace autour de la membrane en raison du gradient de concentration continue de toutes les substances solubles qui pénètre dans le milieu de perfusion avec l’analyte d’intérêt. Enfin, la technique de la microdialyse est fortement influencée par les limites des techniques analytiques utilisées pour la quantification des rejets de substances dans le milieu de perfusion9,21,22,23 . La chromatographie liquide haute performance (HPLC) après que dérivatisation avec orthophthaldialdehyde pour l’analyse de glutamate et l’aspartate dans des échantillons biologiques a été bien validé24,25,26 , 27 et sa discussion approfondie est hors de la portée de ce manuscrit, mais les données produites à l’aide de cette méthode seront décrite en détail.
Lorsqu’effectué correctement et sans modification de la composition du perfusat, microdialyse peut fournir des informations fiables sur les taux de base de la libération des neurotransmetteurs. La plus grande partie des niveaux basales est probablement le résultat de l’effet d’entraînement émetteur du synapses9. Car dans bien des cas l’échantillonnage simple du neurotransmetteur dans l’espace synaptique supplémentaire n’est pas suffisant pour poursuivre les objectifs d’une enquête, la microdialyse technique peut être également employée pour stimuler les neurones ou à les priver d’importants ions physiologiques tels que K+ ou Ca2 +, afin d’évoquer ou d’empêcher la libération du neurotransmetteur.
Forte stimulation de K+ est souvent utilisée en neurobiologie pour stimuler l’activité neuronale non seulement chez les animaux éveillés, mais aussi dans des cultures primaires et organotypique. L’exposition d’un système nerveux sain à des solutions contenant de fortes concentrations de K+ (40-100 mM) évoque l’efflux de neurotransmetteurs28. Cette capacité des neurones à fournir une version supplémentaire en réponse à K haute+ peut être compromise aux animaux épileptiques1 et aux autres de29,de maladies neurodégénératives30. De même, le Ca2 + la privation (obtenue en perfusant les solutions gratuites Ca2 + ) est utilisée pour établir le calcium-dépendante libèrent des neurotransmetteurs plus mesurées par microdialyse. On croit généralement que libération de Ca2 + dépendante est d’origine neuronale, considérant que la libération de Ca2 + indépendante originaire de glia, mais de nombreuses études a soulevé une polémique sur la signification du Ca2 +-mesures sensibles de par exemple glutamate ou GABA9: ainsi, si possible, il est conseillé d’appuyer les études microdialyse microcapteur études, car ces derniers ont une résolution spatiale supérieure et les électrodes permet de se rapprocher de synapses31.
Concernant microdialysis études chez l’animal épileptique, il est important de souligner que les données obtenues de la plupart d'entre eux comptent sur la surveillance vidéo ou vidéo-EEG des saisies, c'est-à-direde la présence transitoire des signes et/ou symptômes anormaux excessive ou synchrone l’activité neuronale dans le cerveau32. Il y a quelques détails d’électrographiques saisies chez les animaux traité de pilocarpine qui devraient être examiné lors de la préparation de l’expérience. Les crises spontanées sont suivis d’activité déprimée avec fréquentes EEG intercritiques pointes3 et se produisent dans les clusters33,34. Sham opéré non-épilepsie animaux peut-être présenter des activité de saisie type35 et donc les paramètres pour l’évaluation des enregistrements EEG devraient être normalisés36 et, si possible, le calendrier des sessions de la microdialyse doit être bien défini. Enfin, nous recommandons fortement conformément aux principes et normes méthodologiques pour la surveillance de vidéo-EEG chez les rongeurs adultes de contrôle décrits par les experts de la Ligue internationale contre l’épilepsie et l’American Epilepsy Society dans leurs rapports très récents37 ,,38.
Nous décrivons ici la microdialyse du glutamate et aspartate en parallèle avec les enregistrements de vidéo-EEG à long terme chez les animaux épileptiques et leur analyse dans le dialysat par HPLC. On mettra l’accent sur les étapes critiques du protocole qu’on devrait prendre soin de, pour un meilleur résultat.

<table><tbody><tr><td>Électrode bi-torsadée à 3 canaux</td><td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginie, États-Unis</td><td>MS333/3-B/SPC</td><td></td></tr><tr><td>Canule de guidage</td><td>de matériau Agn Tho’s, Lindig&ouml ;, Suède</td><td>MAB 4.15.IC</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Résine KK2 Plastik</td><td>Elettra Sport, Lecco, Italie</td><td>KK2</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Super Attack gel Loctite</td><td>Henkel Italia Srl, Milano, Italie</td><td>2047420_71941</td><td>matériel</td></tr><tr><td>Imalgene-Kétamine</td><td>Merial, Toulouse, France</td><td>221300288 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Sigma, Milan, Italie</td><td>X1251</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Isoflurane-Vet</td><td>Merial, Toulouse, France</td><td>103120022 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Altadol 50 mg/ ml - tramadol</td><td>Formevet, Milan, Italie</td><td>103703017 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Gentalyn 0,1 % crm - gentamycine</td><td>MSD Italia, Rome, Italie</td><td>20891077 (AIC)</td><td></td></tr><tr><td>Matériau ciment dentaire rapide simplex</td><td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, Royaume-Uni</td><td>ACR811</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>GlasIonomer CX-Plus Cement</td><td>Shofu, Kyoto, Japon</td><td>PN1167</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Porte-clip de sonde</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ;, Suède</td><td>p/n 100 5001</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Histoacryl&reg ; Blue Topical Skin</td><td>Adhesive TissueSeal, Ann Arbor, Michigan, USA</td><td>TS1050044FP</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Valium 10 mg/2 ml - diazépam</td><td>Roche, Monza, Italie</td><td>019995063 (AIC)</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Seringue de 1 mL avec aiguille 25G</td><td>Vetrotecnica, Padoue, Italie</td><td>11.3500.05</td><td>Matériau</td></tr> aiguille <tr><td>d’alimentation flexible pour rat 17G</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ; Suède</td><td>7206</td><td></td></tr><tr><td>Matériau Appareil Grass Technology</td><td>Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, Californie, États-Unis</td><td>M665G08</td><td>Équipement (amplificateur AS40, boîtier de tête, câbles d’interconnexion, téléfacteur modèle RPSA S40)</td></tr><tr><td>acquisition de données modulaire et&nbsp ; système d’analyse MP150</td><td>Biopac, Goleta, Californie, États-Unis</td><td>MP150WSW</td><td>Système</td></tr> de <tr><td>vidéosurveillance numérique</td><td>AverMedia Technologies, Fremont, Californie, États-Unis</td><td>V4.7.0041FD</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>sonde de microdialyse</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ; Suède</td><td>MAB 4.15.1.Cu</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>sonde de microdialyse</td><td>Synaptech, Colorado Springs, Colorado, États-Unis</td><td>S-8010</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>chauffe-moteur</td><td>Grant Instruments, Cambridge, Angleterre</td><td>QBD2</td><td></td></tr><tr><td>Équipement agitateur</td><td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, Mestre, Italie</td><td>711</td><td></td></tr><tr><td>Équipement pompe à perfusion</td><td>Univentor, Zejtun, Malte</td><td>864</td><td>équipement</td></tr><tr><td>tube en polyéthylène à alésage fin</td><td>Smiths Medical International Ltd., Keene, New Hampshire, États-Unis</td><td>800/100/100/100</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>des adaptateurs de tubes bleus</td><td>Agn Tho’s, Lindig &ouml ; Suède</td><td>1002</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>adaptateurs de tubes rouges</td><td>Agn Tho’s, Lindig &ouml ; Suède</td><td>1003</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Seringue de 2,5 mL avec aiguille 22G</td><td>Chemil, Padoue, Italie</td><td>S02G22</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>bouchon de flacon</td><td>Cronus, Labicom, Olomouc, République tchèque</td><td>VCA-1004TB-100</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>septum</td><td>Thermo Scientific, Rockwoood, Tennessee, États-Unis</td><td>National C4013-60 8 mm TEF/SIL</td><td>septum Matériau</td></tr><tr><td>insert en verre avec ressort inférieur</td><td>Supelco, Sigma, Milan, Italie</td><td>27400-U</td><td>Matériau</td></tr> flacon <tr><td>d’échantillonneur automatique</td><td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, Monza, Italie</td><td>C4013-2</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Contrôleur de système Smartline manager 5000 et unité de dégazage</td><td>Knauer, Berlin, Allemagne</td><td>V7602</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Pompe à gradient quaternaire Smartline 1000</td><td>Knauer, Berlin, Allemagne</td><td>Équipement</td><td></td></tr> <tr><td>V7603détecteur spectrofluoré</td><td>Shimadzu, Kyoto, Japon</td><td>RF-551</td><td></td></tr><tr><td>Équipement colonne chromatographique</td><td>Knauer, Berlin, Allemagne</td><td>25EK181EBJ</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>pré-colonne chromatographique</td><td>Knauer, Berlin, Allemagne</td><td>P5DK181EBJ</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>solution de phase mobile A</td><td>0,1 M tampon de phosphate de sodium, pH 6,0</td><td></td><td>Solution</td></tr><tr><td>solution de phase mobile B</td><td>Tampon phosphate de sodium à 40 % 0,1 M, 30 % méthanol, acétonitrile à 30 %, pH 6,5</td><td></td><td></td></tr><tr>Solution<td>Composition de la solution Ringer</td><td>en mM : MgCl2 0,85, KCl 2,7, NaCl 148, CaCl2 1,2, 0,3 % BSA</td><td></td><td></td></tr><tr>Solution modifiée Composition de la<td>solution Ringer</td><td>en mM : MgCl2 0,85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0,3 % BSA</td><td></td><td>Solution</td></tr><tr><td>saline</td><td>0,9 % NaCl, ph ajusté à 7,0</td><td></td><td>Solution</td></tr><tr><td>de saccharose</td><td>10 % de saccharose dans de l’eau</td><td></td> distillée <td>Solution</td></tr></tbody></table>

microdialyse d’acides aminés excitateurs durant les enregistrements eeg en se déplaçant librement des rats

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialyse est une technique bien établie neuroscience qui met en corrélation les changements de neurologiquement actives substances diffusant dans l’espace interstitiel du cerveau avec le comportement et/ou des résultats spécifiques d’une pathologie (par exemple, saisies pour l’épilepsie). Lors de l’étude de l’épilepsie, la technique de la microdialyse est souvent associée à court terme ou même à long terme vidéo-électroencéphalographie (EEG suivi afin d’évaluer la fréquence des crises spontanées, de gravité, de progression et de regroupement). La microdialyse-EEG combiné repose sur l’utilisation de plusieurs méthodes et instruments. Ici, nous avons réalisé en vivo microdialyse et continue vidéo-EEG, enregistrement de moniteur glutamate et aspartate l’écoulement au fil du temps, dans les différentes phases de l’histoire naturelle de l’épilepsie dans un modèle de rat. Cette approche combinée permet l’appariement des changements dans la libération des neurotransmetteurs, avec des étapes spécifiques de l’évolution de la maladie et la progression. La concentration d’acides aminés dans le dialysat est déterminée par chromatographie liquide. Nous décrivons ici les méthodes et les grandes lignes les principales mesures de précaution un devraient prendre pendant en vivo microdialyse-EEG, avec une attention particulière à la chirurgie stéréotaxique, stimulation basale et élevé de potassium au cours de la microdialyse, profondeur enregistrement de l’électrode EEG et analyse de chromatographie liquide à haute performance de l’aspartate et du glutamate dans le dialysat. Cette approche peut être adaptée pour tester une variété de médicaments ou d’une maladie induite par les changements des concentrations physiologiques de l’aspartate et du glutamate dans le cerveau. Selon la disponibilité d’un test analytique approprié, il peut servir de plus pour tester différentes molécules solubles lorsque vous employez des enregistrement EEG en même temps.

Récupération de la sonde
Le recouvrement moyen (c.-à-d., la teneur moyenne des acides aminés dans le perfusat sous forme de pourcentage du contenu dans un volume égal de solution flacon) était 15,49 ± 0,42 % à un débit de 2 μL/min et 6,32 ± 0.64 à 3 μL/min pour le glutamate et 14,89 ± 0,36 % à un débit de 2 ΜL/min et 10.13 ± 0,51 à 3 μL/min pour l’aspartate lors de l’utilisation de la sonde de membrane de cuprophane. Si v...

Nous décrivons ici une méthode pour en vivo microdialyse analyser le communiqué de l’aspartate et du glutamate dans l’hippocampe ventral de rats épileptiques et non-épilepsie, en combinaison avec des enregistrements EEG. Les concentrations extracellulaires de l’aspartate et le glutamate peuvent être corrélées avec les différentes phases de la maladie.

Microdialyse d’acides aminés excitateurs durant les enregistrements EEG en se déplaçant librement des Rats

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les neurosciences telles que les altérations de la neurochimie au cours de l’histoire naturelle des maladies neurologiques. Le principal avantage de la technique eEG de microdialyse proposée est qu’une telle approche combinée permet l’appariement des changements dans la libération de neurotransmetteur dans les étapes spécifiques du développement et de la progression de la maladie. Commencez par allumer l’amplificateur placé à l’extérieur de la cage faraday.Ouvrez le logiciel EEG et démarrez l’acquisition d’EEG et observez le signal EEG produit par des câbles non connectés. Ensuite, connectez l’animal au système d’enregistrement EEG attaché en tenant la tête de l’animal entre deux doigts tendus d’une main et en vissant les connecteurs au piédestal de l’électrode à l’aide de l’autre main libre. Réglez un facteur d’amplification sur chaque canal de l’amplificateur en fonction du signal d’électrode d’un seul animal de sorte que le signal EEG est à l’échelle.Laissez ensuite l’animal explorer la nouvelle cage pendant au moins une heure sous l’observation directe du chercheur. Ajustez le câble en fonction de la marchandise de l’animal et assurez-vous que les câbles n’interfèrent pas avec les mouvements de l’animal et sa posture couchée. Enfin, vérifiez le cadrage d’image correct sur les caméras vidéo, puis démarrez l’enregistrement vidéo EEG.Commencez par préparer les sondes de microdialyse pour la première utilisation selon le guide de l’utilisateur du fabricant et remplissez-les avec la solution de Ringer. Ensuite, coupez 10 centimètres de long morceaux de tube FEP et les connecter à l’entrée et la sortie cannulas de la sonde en utilisant les adaptateurs de tubes de différentes couleurs. Assurez-vous que le tube touche les adaptateurs sans espace mort dans toutes les connexions.Retirez la canule factice de son guide à l’aide de la pince à épiler en tenant fermement la tête de l’animal. Insérez la sonde de microdialyse dans la canule guide et utilisez de l’argile de modélisation pour raffermissant davantage la canule. Ensuite, connectez l’animal au système d’enregistrement EEG attaché.Ensuite, mettez l’animal dans le cylindre en plexiglas et laissez-le explorer le nouvel environnement. Suivez les mouvements éveillés et librement mobiles de rat. Ensuite, connectez l’entrée de la sonde à la seringue de 2,5 millilitres avec une aiguille émoussée de calibre 22 contenant la solution de Ringer à l’aide des adaptateurs de tubes.Poussez un millilitre de la solution de Ringer dans la sonde en 10 secondes en poussant le piston de la seringue de 2,5 millilitres en continu. Vérifiez la chute du liquide apparaissant sur la prise pour signifier quand la sonde est prête à l’emploi. Enfin, remplissez les seringues de 2,5 millilitres reliées aux tubes FEP par des adaptateurs de tubes avec la solution de Ringer et montez-les sur la pompe à perfusion.Démarrez la pompe à deux microlitres par minute et laissez-la fonctionner toute la nuit. Après avoir vérifié par l’intermédiaire d’enregistrements vidéo EEG l’absence de saisies dans les trois heures précédant la collecte de l’échantillon, arrêtez la pompe transportant les seringues cannulées de tubes FEP remplies de solution de Ringer. Montez un autre ensemble de seringues de 2,5 millilitres reliées à des tubes FEP avec des adaptateurs de tubes remplis d’une solution ringer modifiée contenant une solution de potassium de 100 millimlaires.Démarrez la pompe à deux microlitres par minute et laissez-la fonctionner. Vérifiez l’absence de bulles d’air dans le système et assurez-vous que le tube touche les adaptateurs sans espace mort dans toutes les connexions. Ensuite, vérifiez la chute du liquide apparaissant sur la prise pour signifier quand la sonde est prête à l’emploi.Ensuite, connectez le tube FEP de seringues remplies de solution de Ringer à la canule d’entrée de la sonde chez chaque animal et attendez l’apparition de la goutte liquide sur la pointe de la prise. Connectez la sortie de la sonde au tube FEP qui mène à la collecte dans le tube à essai. Insérez le tube FEP dans le tube à essai fermé de 0,2 millilitre avec un bouchon perforé et assurez-vous que le tube reste en place en le fixant avec un morceau d’argile de modélisation.Après avoir fait fonctionner la pompe à deux microlitres par minute pendant 60 minutes sans prélever d’échantillons pour équilibrer le système, prélever cinq échantillons consécutifs de dialyse de 30 minutes dans des conditions de base et stocker des échantillons sur de la glace. Après 10 minutes, passez le tube des seringues contenant 100 millimolar potassium Ringer’s Solution à la solution normale de la sonnerie et laissez la pompe fonctionner. Après la collecte du cinquième dialyse post-équilibrage, recueillir 20 fractions de dialyse microlitres toutes les 10 minutes pendant une heure.Puis recueillir trois échantillons de dialyse supplémentaires de 30 minutes et arrêter la pompe. Enfin, stockez les échantillons à moins 80 degrés Celsius après l’expérience jusqu’à l’analyse HPLC. Une fois l’expérience terminée, rincez les sondes de microdialyse utilisées à l’eau distillée et rangez-les dans un flacon rempli d’eau distillée propre jusqu’à la prochaine utilisation.Enfin, rincer toute la configuration de microdialyse à l’eau distillée suivie d'70 p. 100 d’éthanol. Remplacez l’éthanol par de l’air et rangez l’installation dans un environnement stérile. Ce sont les traces représentatives d’EEG enregistrées à partir de l’hippocampe des rats témoins et épileptiques pendant la phase chronique de la maladie.Aucune altération d’EEG n’a été observée chez les rats témoins, tandis qu’une activité épileptiforme paroxystique synchronisée a été observée environ 500 millisecondes avant et pendant les saisies comportementales chez les rats épileptiques. La concentration basale de glutamate trouvée chez les rats épileptiques chroniques était sensiblement plus élevée que chez les animaux témoins. Le potassium élevé a évoqué une libération supplémentaire de glutamate pendant environ 30 minutes dans les rats témoins et pendant environ 60 minutes chez les rats épileptiques chroniques.Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler que les animaux implantés avec l’appareil sont enclins à le perdre au cours d’une expérience prolongée, alors utilisez un ensemble de têtes légères et des câbles suffisamment longs pour éviter d’interférer avec la mobilité des animaux. Selon la disponibilité d’un essai analytique approprié, la méthode peut être utilisée pour tester différentes molécules solubles dans le cerveau lors de l’utilisation de l’enregistrement EEG en même temps. Après son développement, cette technique a permis aux chercheurs dans le domaine de l’épileptologie de fournir un aperçu des altérations de la neurotransmission excitatrice dans le cas d’une épilepsie de lobe temporel.Après avoir regardé cette vidéo, nous espérons que vous aurez une meilleure compréhension de la façon d’effectuer la microdialyse in vivo avec l’enregistrement de profondeur électrode EEG dans un rat épileptique librement en mouvement.

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Cette vidéo présente un test basé sur un réseau de microélectrodes pour étudier l’activité des réseaux neuronaux dans des sections de moelle épinière de souris. Tout d’abord, l’activité électrophysiologique de la corne dorsale superficielle (SDH) de la tranche est enregistrée. Ensuite, un inhibiteur des canaux potassiques est introduit pour prolonger la dépolarisation, ce qui entraîne une activité rythmique synchrone sur l’ensemble du réseau neuronal.

Évaluation des réseaux neuronaux à l’aide d’un réseau de microélectrodes dans des coupes de moelle épinière de souris

Cette vidéo montre l’enregistrement électroencéphalographique (EEG) de crises d’épilepsie chez des rats induits par l’épilepsie. Un rat avec des électrodes implantées dans l’hippocampe ventral est connecté au système d’enregistrement EEG et placé dans une chambre en plexiglas. Le rat est autorisé à se déplacer librement pendant que l’activité cérébrale est enregistrée pour surveiller l’apparition de crises.

Enregistrement électroencéphalographique des crises d’épilepsie chez des rats induits par l’épilepsie

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Nous décrivons ici comment effectuer des enregistrements multi-électrodes de réseaux de tissu cortical humain épileptique. Résection de tissu épileptique, préparation de tranche et de matrices multi-électrode enregistrements d'événements intercritiques et ictales sont démontrés en détail.

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Cette étude explore la nouvelle utilisation de la technologie de baies (MEA) de microélectrodes à base d’enzymes pour surveiller l’activité du neurotransmetteur in vivo chez les porcelets. L’hypothèse était que ce dérèglement du glutamate contribue au mécanisme de neurotoxicité anesthésique. Nous présentons ici un protocole visant à adapter la technologie de la MEA pour étudier le mécanisme de la neurotoxicité induite par l’anesthésie.

Adaptation de la microélectrode Array technologie pour l’étude de la neurotoxicité induite par l’anesthésie dans le cerveau Intact Porcinet

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L’utilisation combinée de la technologie des réseaux de microélectrodes et de la stimulation chimique induite par la 4-aminopyridine pour étudier l’activité nociceptive au niveau du réseau dans la corne dorsale de la moelle épinière est décrite.

Enregistrement de l’activité du réseau dans les circuits nociceptifs rachidiens à l’aide de réseaux de microélectrodes

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Un protocole rentable et peu invasif pour l’enregistrement chronique d’électroencéphalographie multisite chez des souris se déplaçant librement

Découvrez la microdialyse d'acides aminés excitateurs couplée à l'EEG chez le rat en mouvement libre. Cette méthode permet d'analyser la libération de glutamate et d'aspartate dans l'hippocampus ventral.

Microdialyse d’acides aminés excitateurs durant les enregistrements EEG en se déplaçant librement des Rats

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