Name: Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Apprenez la ponction de la veine sous-clavière chez le rat comme méthode alternative de prélèvement sanguin. Cette technique sous anesthésie générale permet d'obtenir des volumes élevés avec un taux de réussite élevé et minimise le stress animal.

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Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique de l’Université South Central pour la recherche d’Animal de l’hôpital de Xiangya de seconde (Changsha, Chine). Le manuscrit a été établi selon l’arrivée (Animal Research : Reporting of In Vivo Experiments) lignes directrices9.
1. matériel et Animal préparation
<ol><li>Préparer le matériel requis : ruban adhésif, agent de l’épilation, 75 % d’éthanol, tube de prélèvement de sang, seringue de 2,5 mL avec aiguille (24 G, 0,6 mm x 25 mm), rasoir cheveux, balance électronique et jauge (voir Table des matières).</li>
	<li>Utilisez 20 rats Sprague-Dawley (SD), âgés de 8 à 10 semaines et pesant 153-200 g (voir Table des matières). Maintenir des rats conformément au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire,10.</li>
	<li>Rats de maison dans des conditions normalisées avec libre accès à la nourriture et l’eau potable. Gardez-les dans des cages de2 530 cm avec literie bois-rasage (2 rats par cage). Maintenir les animaux dans une température ambiante température contrôlée à environ 25 ° C.</li>
	<li>Induire l’anesthésie générale (pentobarbital sodique 40 mg/kg) chez tous les animaux par injection intrapéritonéale avant la ponction de la veine sous-clavière.</li>
	<li>Place le rat dans une position en décubitus dorsal. Fixez les pattes dans une position confortable et fixer le membre supérieur parallèle à l’axe du corps juste à côté du tronc. Remarque : Aucune ventilation mécanique n’est nécessaire pour cette procédure (Figure 1).</li>
	<li>Nettoyer des deux côtés de l’espace infraclaviculaire pour enlever la fourrure (avec cheveux rasoir et épilation agent, voir la Table des matières) et toute la saleté visible. Essuyer le cou et la peau thoracique avec 75 % d’éthanol. Garder la zone de ponction, propre et sec avec de la gaze.</li>
</ol>2. procédure de collecte de sang
Remarque : Les deux côtés de la veine sous-clavière ne conviennent pas pour la ponction, et ici, nous choisissons le côté droit pour la ponction. L’emplacement et l’orientation de la clavicule droite sont identifiés par le pouce gauche de l’opérateur (Figure 2). Les fosses de creux sont touchés doucement avec l’index comme les fosses creux est en direction de l’aiguille (Figure 2).
<ol><li>Rincez une seringue stérile de 2,5 mL avec la solution héparinée (10 UI/mL).</li>
	<li>Localiser le site de ponction caudale de la région de 1/3 externe de la clavicule droite (Figure 3) 0,5 mm. Déplacez doucement la seringue dans la peau de la ponction. Une fois que l’aiguille pénètre dans la peau d’infraclaviculaire, appliquer une pression négative avec la main droite de l’opérateur (Figure 4). Remarque : Le volume sanguin moyenne et maximale sont 1,0 et 1,4 mL, respectivement. La direction de l’aiguille est positionnée vers les fosses de creux et devrait être presque parallèle à la clavicule juste postérieure à elle. Habituellement, la veine sous-clavière est accessible par l’insertion de l’aiguille de 2 mm environ dans cette direction. Une fois que l’aiguille pénètre dans la veine, sang entrera dans la seringue sous pression négative.<ol>
<li>Maintenir une pression négative jusqu'à ce que suffisamment de volume de sang (Figure 5).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Si la collecte de sang de la veine sous-clavière ne réussite pas, retirer l’aiguille dans la zone sous-cutanée et ajuster la direction de l’aiguille légèrement intérieur au sternum.<ol>
<li>Si trois tentatives échouent, évitez la veine sous-clavière du même côté et utilisez le côté controlatéral pour les prélèvements sanguins.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Après le prélèvement de sang, retirer l’aiguille de ponction et appliquez une pression sur le site de ponction pendant 1-2 minutes arrêter le saignement. Remarque : La pression doit être très douce pour prévenir l’étouffement.</li>
</ol>3. sang échantillon traitement
<ol><li>Transférer l’échantillon de sang dans un tube à vide anticoagulant-enduit (avec de l’EDTA) et centrifugation pendant 10 min à 1600 x g pour recueillir le plasma.</li>
	<li>Aspirer le surnageant dans un tube propre et les conserver à-80 ° C (Figure 6).</li>
</ol>

<ol><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology%2C+Pharmacotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Korfmacher, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+capillary+microsampling+for+rat+pharmacokinetic+studies%3A+Comparison+of+tail-vein+bleed+to+jugular+vein+cannula+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catheterization+of+the+carotid+artery+and+jugular+vein+to+perform+hemodynamic+measures%2C+infusions+and+blood+sampling+in+a+conscious+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).</li>
<li>Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Repeated+Tail+Clip+and+Saphenous+Vein+Phlebotomy+on+Rats+Used+in+Toxicology+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies.</a> Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).</li>
<li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).</li>
<li>Cochran, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+Glucose+Metabolism+Kinetics+Using+18F-FDG+Micro-PET%2FCT%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT.</a> Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).</li>
<li>Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drawing+blood+from+rats+through+the+saphenous+vein+and+by+cardiac+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).</li>
<li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li>
<li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+bioscience+research+reporting%3A+ARRIVE-ing+at+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).</li>
<li>National Institute of Health. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).</li>
<li>Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axillary+vein+puncture+without+contrast+venography+for+pacemaker+and+defibrillator+leads+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Pacing+and+Clinical+Electrophysiology%22%5BJournal%5D)">Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation.</a> Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).</li>
<li>Luis, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+magnetic+resonance+imaging+of+the+thoracic+venous+system+in+rats+with+congenital+diaphragmatic+hernia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Surgery+International%22%5BJournal%5D)">Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia.</a> Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
</ol>

Ce travail a été soutenu par la subvention du National Natural Science Foundation de Chine n° 81670269, n° 81500355 et n° 81500226.

Ici, nous présentons une méthode alternative pour l’extraction du sang de la veine sous-clavière et nous montrons que cette méthode est réalisable, sûre et applicable pour les prélèvements sanguins chez les rats. Cette méthode est dérivée de la ponction de la veine sous-clavière en implantation de plomb de stimulateur cardiaque pour les patients,11. La veine sous-clavière est située à postérieur et caudal à la clavicule et est un prolongement de la veine axillaire. Il s’étend de la frontière extér...

Collecte de sang est essentielle dans la recherche sur les animaux. Les veines de la cible pour la collecte de sang comprennent le plexus rétro-orbitaire, la veine jugulaire, la veine saphène, queue des vaisseaux sanguins et l’artère carotide1,2,3,4. Parfois, sang pourrait provenir de l’aorte abdominale, la veine cave ou même le coeur5,6,7. En de telles occasions, les animaux doivent être sacrifiés et ne peut pas être utilisés pour observation subséquente ; ainsi, ces méthodes sont utilisées moins au quotidien travail expérimental. Collecte de sang de la veine caudale de rats est populaire et moins stressant par rapport à la méthodes8susmentionnés.
Cependant, la collecte de sang de la veine caudale est parfois limitée par un taux de réussite insatisfaisante. Parfois, il est également difficile d’obtenir assez de volume sanguin par cette méthode. Comme la veine sous-clavière est assez grande et se trouve juste sous l’os de la clavicule, ponction de la veine sous-clavière peut être une autre méthode d’échantillonnage de sang si les méthodes de collecte de sang de routine sont infructueuses. Ici, nous présentons une méthode de prélèvement de sang par ponction de la veine sous-clavière chez les rats.

<table><tbody><tr><td>rats</td><td>Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, province du Hunan, Chine)&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>logiciel statique</td><td>SPSS Statistics 17</td><td></td><td></td></tr><tr><td>agent d’épilation</td><td>France Yi Sha Cosmetics Co., Ltd (Guangzhou, province du Guangdong, Chine)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>seringue de 2,5 mL</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, province du Shandong, Chine)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>rasoir à cheveux</td><td>Shanghai FLYCO Electric Co., Ltd (Shanghai, Chine)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ruban adhésif</td><td>3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Allemagne)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital sodium</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>75 % éthanol</td><td>Département de pharmacie, Le deuxième hôpital Xiangya de l’Université</td><td></td><td></td>du Centre-Sud</tr><tr><td>Tube de prélèvement sanguin</td><td>Hubei Jinxing Technology& Development Co., Ltd (Wuhan Hubei Province, Chine) (2ml)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>balance électronique</td><td>Dongguan Shengheng Electronics Co., Ltd (Dongguan, province de Guangdng, Chine)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>gants en toile</td><td>pour anethesia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hepain</td><td>Nanjing Xinbai Pharmaceutical&nbsp ; Co., Limited (Nanjing, province du Jiangsu, Chine) (2mL, 12500 UI)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>solution saline</td> <td>physiqueHunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd (Yueyang, province du Hunan, Chine) (100ml)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ponction de la veine sous-clavière comme méthode alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les rats

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Collecte de sang avec assez de volume sanguin est indispensable lors des expérimentations animales. Collecte de sang de la veine caudale de rats est populaire et moins stressant par rapport à d’autres méthodes plus agressives comme les plexus rétro-orbitaire échantillon collection. Toutefois, cette méthode de collecte de sang est parfois limitée par un taux de réussite insatisfaisante. Ici, nous présentons une méthode de prélèvement de sang par le biais de la ponction de la veine sous-clavière. La veine sous-clavière est située juste sous la clavicule et cette veine est suffisante pour satisfaire aux exigences de volume du prélèvement sanguin. Nos résultats montrent que cette méthode est sûre et il y a lieu pour les prélèvements sanguins de collection avec le volume de sang nécessaire. Collecte de sang par le biais de la ponction de la veine sous-clavière pourrait servir d’une méthode de collecte de sang alternatifs en cas de prélèvement de sang de veine de queue ayant échoué chez les rats.

Un total de 20 rats SD (mâle n = 10, femmes n = 10) ont été utilisés ici. Collectionwas de sang effectuées par des opérateurs qualifiés, qui ont effectué plus de 20 prélèvements de sang de la veine sous-clavière chez les rats et par les opérateurs de débutant, qui n’ont aucune ponction de la veine sous-clavière expérience chez les rats et autres animaux. Avant les opérations, les débutants ont regardé au moins 3 procédures fait par des opérateurs qualifiés.
<p class="jove_content" fo:...

Nous présentons ici un protocole visant à recueillir des échantillons de sang de la veine sous-clavière de rat.

Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Perforation subclavienne de veine comme méthode alternative de collecte d’échantillon de sang chez les rats. Après anesthésie générale, placer les rats en position supinienne et stériliser l’espace infraclavicular avec 75% d’éthanol. Identifiez les fossa sternal supérieurs avant la ponction.Localiser le site de perforation, caudal à la région externe d’un tiers de la clavicule dans le même côté. La direction de l’aiguille a été positionnée vers le fossa sternal supérieur et devrait presque parallèle à la clavicule, juste postérieure à elle. Après la collecte de sang, appuyez sur le site de perforation pendant une à deux minutes, pour arrêter de saigner.La collecte de sang avec un volume suffisant est toujours nécessaire dans les expériences sur les animaux. La collecte de sang dans la veine de la queue des rats est populaire et moins stressante que certaines méthodes agressives telles que la collecte d’échantillons de plexus orbitaux rétro. Toutefois, cette méthode est limitée par le taux de réussite.Ici, nous introduisons notre méthode de collecte de sang avec le volume sanguin désiré de la veine subclavienne. Nos résultats montrent que cette méthode est sûre et pratique, et pourrait être considérée dans le cas où l’échantillonnage de sang de la veine de queue est échoué. Pour commencer, préparez du ruban adhésif, de l’agent épilateur, 75 % d’éthanol, un tube de collecte de sang, une seringue de cinq millilitres à deux points, un rasoir à cheveux, une écaille électronique, de l’héparine et une solution physiologique saline.Abritez des rats dans des conditions standard, avec un accès gratuit à la nourriture et à l’eau potable, conservés dans des cages de 530 centimètres carrés avec literie à raser en bois. Induire une anesthésie générale chez tous les animaux par injection intraperitoneal avant la ponction. Placez le rat en position supine, fixez les membres postérieurs dans une position confortable et fixez les membres supérieurs parallèles au corps, juste à côté du tronc.Nettoyez les deux côtés de l’espace infraclavicular pour enlever la fourrure et toute saleté visible. Essuyez le cou et la peau thoracique avec 75% d’éthanol, et gardez la zone propre et sèche avec de la gaze. Les deux côtés de la veine subclavienne conviennent à la perforation, et ici, nous choisissons le bon côté pour la perforation.Identifiez l’emplacement et la direction de la clavicule droite avec le pouce gauche de l’opérateur, et localisez doucement le fossa sternal supérieur avec l’index. Rincez notre seringue avec une solution d’héparine de 10 unités par millilitre. Localiser le site de perforation, pointer cinq millimètres caudal à l’extérieur d’un tiers de la clavicule droite.Déplacez doucement la seringue dans la peau du site de perforation. Une fois que l’aiguille pénètre dans la peau infraclavicular, appliquez une pression active par la main droite de l’opérateur. La direction de l’aiguille est positionnée vers le fossa sternal supérieur, et devrait presque parallèle à la clavicule, juste postérieure à elle.Habituellement, la veine subclavienne pourrait être atteinte en insérant l’aiguille pendant environ deux millimètres dans cette direction. Une fois que l’aiguille entre dans la veine, le sang entre dans la seringue sous une pression active. Ensuite, la pression active doit être maintenue jusqu’à ce qu’un volume approprié de sang soit prélevé.Après la collecte de sang, retirer l’aiguille de perforation et presser le site de perforation pendant une à deux minutes pour arrêter le saignement. Faites attention: la pression doit être très douce pour éviter l’étranglement. Transférer l’échantillon de sang dans un tube à vide anticoagulé avec EDTA et centrifugeuse à 1600G pendant 10 minutes pour recueillir le plasma.Aspirez le supernatent à nettoyer le tube et à le conserver à moins 18 degrés Celsius. Pour comparer le taux de réussite entre les opérateurs qualifiés et les débutants, 20 rats SD ont été divisés en deux groupes au hasard. Les résultats montrent que par la veine subclavian droite, neuf rats dans le groupe habile et huit rats dans le groupe de débutant ont réussi, respectivement.Puis la collecte de sang des trois rats restants a réussi par le côté gauche. Le taux de réussite n’avait pas de différence significative entre ces deux groupes. Le cours du temps était légèrement différent dans ces deux groupes.Aucune complication grave, comme le pneumothorax, l’hémopneumothorax et l’hémorragie, ne s’est produite pendant ou après l’opération. Tous les animaux ont survécu après l’échantillonnage sanguin. Pour démontrer les difficultés d’apprentissage de la procédure de ponction, nous avons en outre comparé le nombre de retraits entre les groupes qualifiés et débutants.Comme le montre le tableau deux, le nombre moyen de retraits en groupe qualifié est légèrement inférieur à celui des débutants, mais il n’y a pas de signification statistique. En conclusion, nos résultats montrent que la stratégie subclavian de perforation de veine pour la collecte de sang est sûre et faisable chez les rats. Cette méthode est précieuse, surtout dans les occasions où une grande quantité de sang est nécessaire.Cette méthode pourrait être une alternative optimale si l’échantillonnage du sang conventionnel échoue.

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Dessin de sang de rats à travers la veine saphène et par ponction cardiaque

Les échantillons de sang sont utiles pour évaluer les biomarqueurs des états physiologiques ou de la maladie in vivo. Nous décrivons ici la méthodologie d’échantillonnage du sang de la veine latérale de la queue chez le rat. Cette méthode permet d’obtenir des échantillons rapides avec un minimum de douleur et d’invasivité.

L&#39;échantillonnage de sang de la veine caudale latérale de la Rat

Nous décrivons ici une méthode de prélèvement de sang simple queue veineuse chez les rats non anesthésiés à l’aide d’un système de tube d’aspiration. Cette méthode réduit le risque d’exposition directe au sang et simplifie les prélèvements d’échantillons multiples d’une seule ponction.

Répété de collecte de sang de la veine caudale des Rats Non anesthésiés avec un système de collecte de sang de vide

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Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats

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