Isolation, Fixation et l’Immunofluorescence imagerie des glandes surrénales de souris

L’immunofluorescence est une méthode de base qui peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine surrénalien sur la zonation surrénale, l’identité cellulaire et la fonction. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet l’étude de protéines multiples tout en préservant la morphologie du tissu surrénal. Pour enlever la glande surrénale murine, coupez autour du tissu adipeux environnant et placez la glande dans un puits d’une plaque de 24 multiwell contenant du PBS frais sur la glace.

Transférez la glande sur une boîte de Pétri ou un support en verre sous un microscope disséquant et utilisez deux aiguilles de calibre 25 pour enlever le tissu adipeux adjacent. Lorsque toute la graisse a été enlevée, fixer le tissu dans 4%paraformaldéhyde à quatre degrés Celsius avec basculement pendant deux heures. À la fin de l’incubation, rincer la glande avec trois lavages de 15 minutes à quatre degrés Celsius en un à deux millilitres de PBS frais par lavage.