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DOI: 10.3791/58612-v
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This study presents a novel protocol for the efficient detection and subtyping of Salmonella in food and environmental samples using quasimetagenomic sequencing. By integrating culture enrichment, immunomagnetic separation, and multiple displacement amplification, the method significantly reduces the time from sample collection to pathogen identification.
Nous présentons ici un protocole pour préparer des échantillons d’ADN provenant des aliments et environnement microbiomes détection concertée et sous-typage des Salmonella par séquençage de quasimetagenomic. L’utilisation combinée de l’enrichissement de la culture, séparation immunomagnétique (IMS) et le déplacement de plusieurs amplification (MDA) permet une concentration efficace de l’ADN génomique de Salmonella provenant des aliments et les échantillons environnementaux.
Cette méthode peut être utilisée pour détecter Salmonella à partir d’échantillons d’aliments et identifier l’agent pathogène au niveau de la souche grâce à la prise d’empreintes génétiques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle combine la détection et le sous-dypage de Salmonella en un seul flux de travail et réduit considérablement le délai d’exécution de l’échantillon d’aliments contaminés par Salmonella à l’empreinte digitale de l’agent pathogène. Pour commencer, placez de façon aseptique un échantillon de 25 grammes d’aliments à l’intérieur d’un sac de mélangeur de laboratoire stérile avec un filtre intégré ou préparez en option un écouvillon environnemental en humidissant aseptiquement une éponge avec du bouillon d’enrichissement, en la faisant glisser sur une surface prédéterminée et en la plaçant à l’intérieur d’un sac de mélangeur.
À l’aide d’un mélangeur de laboratoire, bien mélanger chaque échantillon avec 225 millilitres de bouillon d’enrichissement rv. Puis incuber le mélange à 42 degrés Celsius pendant quatre à 21 heures. Après cela, recueillir un sous-échantillon de 50 millilitres de bouillon d’enrichissement du côté filtré du sac.
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