Microbiopsy absorbant d’échantillonnage et d’Extraction de l’ARN pour mini-Invasive, simultané de sang et analyse de la peau

Cette méthode peut faciliter l’établissement de bio marqueurs pour les maladies de la peau et également réduire le risque pour les participants à la recherche clinique. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle ne nécessite pas d’entraînement intensif et qu’elle ne laisse aucune cicatrice. Cinq minutes avant la microbiopsie, placez un tube de centrifugeuse vide de deux millilitres sur la glace sèche pendant cinq minutes.

Porter des gants jetables, vaporiser les mains et les outils avec 70% d’éthanol avant d’assainissant le site d’application sur le sujet avec un lingette d’alcool. Retirez la micro biopsie du paquet de rayonnement gamma stérilisé sans toucher le microneedle et tirez le piston jusqu’à ce qu’un clic soit entendu et que le piston se verrouille en place. Visez l’appareil chargé à un angle environ perpendiculaire à la peau à échantillonner, en prenant soin que la zone d’échantillonnage est en position fixe et appliquez l’appareil sur la peau dans un délai d’au moins un kilogramme de force.

Appuyez ensuite sur la gâchette et maintenez l’appareil en place pendant au moins dix secondes. Si l’appareil est libéré avant dix secondes, il ya un plus grand risque de variation dans l’absorption du sang et aussi l’analyse ultérieure. Lorsque l’échantillon a été absorbé, tirez doucement le piston et le microneedle absorbant du boîtier et utilisez des forceps stériles pour tirer sur les deux trous du microneedle pour l’enlever du piston.

Ajouter 50 microlitres de tampon d’extraction au tube sur la glace sèche et placer le micronéné intact dans le tube sur le côté aiguille de glace sèche vers le bas. Veillez à ne pas laisser la pointe du microneedle toucher quoi que ce soit pendant le processus d’enlèvement. Vortex le tube pendant trois à cinq secondes pour recueillir du matériel échantillonné de la pointe du micronédé et incuber le tube dans un bloc thermique ou un bain d’eau pendant 30 minutes à 42 degrés Celsius.

À la fin de l’incubation, utiliser des forceps stériles pour placer l’extrémité arrière du niveau de micronède avec le bord supérieur du tube de microfuge et fermer le couvercle du tube de telle sorte que le dessus du microneedle est maintenu en place entre le bouchon et le tube. Centrifugez le tube pour recueillir le matériau échantillonné de la couche absorbante de l’appareil et utilisez les forceps pour enlever soigneusement le micronedle sans tremper la pointe de nouveau dans la solution tampon. Centrifugez l’échantillon à nouveau et transférez soigneusement le supernatant dans un nouveau tube de micro centrifugeuse.

Ajoutez ensuite 250 microlitres de tampon de conditionnement sur une membrane filtrante de colonne de purification pour une incubation de cinq minutes à température ambiante et diluez le tampon par centrifugation. Ajouter 50 microlitres de 70% d’éthanol à l’échantillon d’ARN extrait avec un mélange doux et transférer le mélange dans la colonne de purification préalable. Centrifugez immédiatement le tube deux fois pour enlever l’écoulement, suivi d’un lavage en cent microlitres de tampon de lavage un.

Pour la digestion de l’ADN, ajouter 40 microlitres de mélange d’incubation d’ADN fraîchement préparés directement sur la membrane de la colonne de purification pour une incubation de 15 minutes à température ambiante suivie d’un lavage avec 40 microlitres de tampon de lavage un. À la fin de la centrifugation, laver la colonne avec 100 microlitres de tampon de lavage deux et vérifier la colonne de purification pour tout tampon de lavage résiduel. Transférer la colonne de purification dans un tube de micro centrifugeuse de 0,5 millilitre fourni dans le kit d’extraction d’ARN et placer la pointe de la pipette directement sur la membrane de la colonne de purification pour ajouter 11 microlitres d’eau sPRE ARN à la colonne.

Après une incubation de deux minutes à température ambiante, centrifugez la colonne une fois pour distribuer l’eau de l’ARN sPRE dans toute la colonne, et une fois pour élucider l’ARN. Ensuite, stockez l’échantillon total d’ARN à moins 80 degrés Celsius si la synthèse de l’ADNC n’est pas effectuée immédiatement. Le micro-édène absorbant de microbiopsie se compose de deux couches de plaque d’acier avec une couche absorbante entre les deux pour l’échantillonnage simultané de la peau et du sang.

L’utilisation d’une microbiopsie absorbante n’induit qu’un érythème mineur, qui n’est pas perceptible après 48 heures. Après perforation, quelques petits morceaux de peau sont capturés près de la pointe du micronèdle et le sang est absorbé dans le papier filtre. Lorsque le microneedle absorbant est retiré immédiatement après la perforation, le volume de l’échantillon et la quantité subséquente d’ARNm extrait sont significativement inférieurs à ceux obtenus après avoir tenu pendant dix secondes après la perforation.

Des niveaux similaires d’expression de marqueur de peau sont détectés après l’utilisation de la microbiopsie absorbante et de sa microbiopsie de peau précédente par l’analyse quantitative de PCR. Mais un niveau significativement plus élevé d’expression des marqueurs biologiques des globules blancs est détecté après l’échantillonnage absorbant de microbiopsie, ce qui suggère que le micronèdène absorbant de microbiopsie est plus performant pour la collecte de sang tout en conservant la même capacité de capture d’échantillons de peau qu’avec la microbiopsie cutanée. Ainsi, lors de l’application de la technique, il est crucial de se rappeler que l’application de l’appareil en fonction de ce que nous suggérons est essentielle pour obtenir des résultats fiables.

Ainsi, à la suite de cette procédure, d’autres méthodes, comme pcr en temps réel, peuvent être suivies pour le profilage relativement d’expression génétique. Bien que nous sommes encore en train de développer l’appareil, nous sommes convaincus que la technique a ouvert la voie à des recherches cliniques pour effectuer l’échantillonnage, pour l’application cosmétique dermatologique ou pédiatrique parce qu’il est tellement simple et il est peu invasive.