Name: Fluorescent coloration à l’argent des protéines dans les Gels de Polyacrylamide (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Découvrez une méthode de coloration fluorescente à l'argent pour détecter les protéines dans les gels de polyacrylamide. Cette technique améliore la sensibilité et la spécificité par rapport aux méthodes traditionnelles.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les auteurs tiennent à remercier Patrick Chan au Ming Wai Lau Centre pour la médecine réparatrice, Karolinska Institutet, pour son soutien technique. S. X. est reconnaissante pour le soutien du Conseil de recherche suédois (Grant No. 2017-06344).

1. préparation du Gel
Remarque : La démonstration suit un protocole standard utilisé pour préparer le gel pour une coloration peu après SDS-PAGE12. En bref, les étapes suivantes décrivent la préparation des échantillons et électrophorèse sur gel.
<ol><li>Effectuer des SDS-PAGE avec des gels de protéines de Bis-Tris (1 mm, 15 puits) 4-12 % à l’aide d’un gel mini réservoir rempli de 2-(N -morpholino) tampon d’ethanesulfonic acide (MES).</li>
	<li>Diluer les échantillons avec un mélange d’eau distillée, au lithium dodécyl sulfate (LDS) tampon et un agent réducteur échantillon.</li>
	<li>Charger la première voie avec double la quantité de brut (10 µL), suivie de la quantité normale de stock (5 µL) et une série de dilutions de double du stock par la suite (13 dilutions, de 2 x à x 8192).</li>
	<li>Exécutez le gel à une tension constante de 200 V pendant 30 min.</li>
</ol>2. fixation du Gel
<ol><li>Après électrophorèse, submerger les gels dans une solution de 100 mL d’acide acétique ethanol/10% à 40 % dans un agitateur orbital à 50 tr/min à température ambiante 2 x (chacune pendant 30 min) ou toute la nuit à 4 ° C.</li>
	<li>Laver les gels 3 x 10 min chacun dans l’eau ultrapure dans un récipient propre. L’étape de lavage est essentielle. Si l’acide de la solution de fixation n’est pas supprimé correctement lors de l’étape de développement fluorogène, l' excessive TPE-4TA sera activé par l’acide et conduire à fluorescence de fond fort dans le gel.</li>
</ol>3. préparation du AgNO3Solution et imprégnation à l’argent du Gel
<ol><li>Pour que la solution de3 AgNO (0,0001 %) pour l’imprégnation, tout d’abord, dissoudre 0,01 g de AgNO3 dans 10 mL d’eau ultrapure à préparer une solution 0,1 % AgNO3 . Ensuite, ajouter 100 µL de la solution mère de 0,1 % AgNO3 dans 100 mL d’eau ultrapure pour faire la solution de travail. Remarque : La solution de3 AgNO devrait être conservée dans l’obscurité avant utilisation.</li>
	<li>Imprégner le gel avec 100 mL d’argent solution pendant 1 h de travail dans un agitateur orbital à 50 tr/min dans un récipient de verre scellé. Il est essentiel d’effectuer l’imprégnation à l’argent sous une hotte aspirante, Abrie de la lumière avec du papier aluminium.</li>
	<li>Laver le gel avec de l’eau ultrapure (environ 100 mL) dans un récipient propre pour 2 x 60 s.</li>
</ol>4. Fluorogène développement du Gel
<ol><li>Pour préparer la solution mère de colorant (0,1 mM), ajouter 3,0 mg de teinture TPE-4TA dans 50 mL d’eau ultrapure. Laisser agir la solution pendant quelques minutes et ajouter une solution de NaOH (par exemple 1 M) pour aider à dissoudre le colorant.</li>
	<li>Vérifier la fluorescence de la solution sous une lampe de 365 nm UV pour s’assurer que la molécule de colorant est entièrement dissous. Des solutions faibles ou causées indiquent seulement une dissolution complète. Remarque : Le colorant que TPE-4TA a été synthétisé suit le protocole rapporté récemment par Xie et al. 10 la solution TPE-4TA est très stable et peut être conservée à l’obscurité pendant des mois.</li>
	<li>Pour préparer 100 mL de la solution en développement fluorogène (10 µM), ajouter 10 mL de la solution mère de TPE-4TA dans 90 mL d’eau ultrapure. Vérifier le pH de la solution à l’aide d’un pH-mètre et accordez-la à 7-9 à l’aide d’une solution d’hydroxyde de sodium (1 µM).</li>
	<li>Transférer le gel dans un récipient propre et scellable avec 100 mL de la solution en développement fluorogène. Assurez-vous que le gel est totalement immergé dans la solution. Sceller le contenant. Couvrez-le de la lumière et le secouer pendant la nuit dans un agitateur orbital à 50 tr/min à température ambiante. Alternativement, l’étape d’incubation peut également être raccourcie à environ ~ 2 h en préchauffant la solution en développement AIE à 80 ° C pour la coloration et puis en le laissant à température ambiante.</li>
</ol>5. de décoloration et d’imagerie
<ol><li>Transférer le gel dans un récipient propre et décolorer il dans 100 mL d’éthanol à 10 % pendant 30 min. Remarque : L’eau seule peut être utilisée pour laver le gel. Toutefois, il est plus économe en temps d’utiliser une solution d’éthanol de 10 % pour la décoloration. Cela aidera à réduire le processus de décoloration de heures à 30 min.</li>
	<li>Rincer le gel en eau ultrapure pendant 5 min.</li>
	<li>Le gel à la 365 nm ou 302 nm canaux grâce à une machine de documentation de gel de l’image.</li>
</ol>

<ol><li>Chevalier, F. <a target="_blank" href="https://proteomesci.biomedcentral.com/articles/10.1186/1477-5956-8-23">Highlights on the capacities of &#34;Gel-based&#34; proteomics.</a> Proteome Science. 8 (1), (2010).</li>
<li>Harris, L. R., Churchward, M. A., Butt, R. H., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+detection+methods+for+gel-based+proteomic+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteome+Research%22%5BJournal%5D)">Assessing detection methods for gel-based proteomic analyses.</a> Journal of Proteome Research. 6 (4), 1418-1425 (2007).</li>
<li>Gauci, V. J., Wright, E. P., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+proteomics%3A+assessing+the+spectrum+of+in-gel+protein+detection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitative proteomics: assessing the spectrum of in-gel protein detection methods.</a> Journal of Chemical Biology. 4 (1), 3-29 (2011).</li>
<li>Candiano, G., Bruschi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+silver%3A+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25 (9), 1327-1333 (2004).</li>
<li>Chevallet, M., Luche, S., Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Silver staining of proteins in polyacrylamide gels.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1852-1858 (2006).</li>
<li>Jin, L. T., Hwang, S. Y., Yoo, G. S., Choi, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+silver+staining+of+protein+in+sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gels+using+an+azo+dye%2C+calconcarboxylic+acid%2C+as+a+silver-ion+sensitizer%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Sensitive silver staining of protein in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels using an azo dye, calconcarboxylic acid, as a silver-ion sensitizer.</a> Electrophoresis. 25 (15), 2494-2500 (2004).</li>
<li>Celis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCelis%2C+JE+%22Cell+Biology%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Cell Biology: A Laboratory Handbook</a>. , Elsevier Academic Press. Amsterdam, the Netherlands. (2006).</li>
<li>Bartsch, H., Arndt, C., Koristka, S., Cartellieri, M., Bachmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+Staining+Techniques+of+Polyacrylamide+Gels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Silver Staining Techniques of Polyacrylamide Gels.</a> Methods in Molecular Biology. 869 (1), 481-486 (2012).</li>
<li>Rabilloud, T., Vuillard, L., Gilly, C., Lawrence, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver-staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels%3A+a+general+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Silver-staining of proteins in polyacrylamide gels: a general overview.</a> Cellular and Molecular Biology. 40 (1), 57-75 (1994).</li>
<li>Zhou, M., Yu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+Analysis+by+Two-Dimensional+Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Protein+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Proteomic Analysis by Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Advances in Protein Chemistry. 65 (1), 57-84 (2003).</li>
<li>Xie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorogenic+Ag%2B-Tetrazolate+Aggregation+Enables+Efficient+Fluorescent+Biological+Silver+Staining%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Fluorogenic Ag+-Tetrazolate Aggregation Enables Efficient Fluorescent Biological Silver Staining.</a> Angewandte Chemie International Edition. 57 (20), 5750-5753 (2018).</li>
<li>Protein gel electrophoresis technical handbook. , Thermo Fisher Scientific. Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf">https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf</a> (2015).</li>
</ol>

Une demande de brevet sur cette coloration fluorescente à l’argent a été déposée.

Présenté ici est un roman d’argent fluorescent coloration PROCEDE de protéines dans les gels de polyacrylamide. Cette stratégie intègre les taches argent classiques et taches fluorescentes. Les exploits de coloration la liaison sélective d’ions d’argent aux protéines comme dans l’autre argent taches mais emploie un argent fluorogène hautement sensible sonde TPE-4TA pour éclairer les protéines liées argent. Étant donné que la sonde fluorogène TPE-4TA peut détecter des ions d’argent à une ...

Plusieurs méthodes de coloration ont été utilisées pour visualiser les protéines après électrophorèse sur gel, par exemple à l’aide de colorants colorimétriques tels que le bleu de Coomassie brillant bleu, tache argentée, fluorescence, ou radioactifs étiquetage1,2, 3 , 4. coloration à l’argent est considérée comme une des techniques plus sensibles pour la détection de protéines nécessitant des réactifs simples et bon marchés. Il peut être classé en deux grandes familles : la tache d’argent ammoniacale et le nitrate d’argent tachent5,6. Dans la méthode argentée ammoniacale alcaline, le complexe de l’argent-diamine est produit avec l’ammoniac et de l’hydroxyde de sodium et réduit à argent métallique au cours du développement à l’aide d’une solution de formaldéhyde acides. La tache peut accueillir efficacement pour les protéines basiques mais montre un compromis performances pour les protéines acides et neutres et est en outre limité à classique glycine et taurine systèmes électrophorétiques. En comparaison, les taches de nitrate d’argent a exploiter la bio-affinité élevée d’ions d’argent aux protéines, principalement les sulfhydryles carboxyle groupes de chaînes latérales et ont tendance à tacher les protéines acides plus efficacement7. Après ion argent contraignant, une solution en développement (généralement en une solution de carbonate de métal contenant du thiosulfate de sodium et de formaldéhyde) est appliquée afin de réduire les ions d’argent aux grains d’argent métalliques, qui s’accumulent d’une couleur brun-foncé à visualiser la bandes de protéines.
Bien que la coloration à l’argent est bien connue pour sa polyvalence et sa sensibilité élevée depuis son développement dans les années 19708, la méthode est souvent considérée comme difficile. Méthodes de coloration à l’argent ont des mesures limitées dans le temps et montrent faible reproductibilité. Étant donné que la couleur de la tache argentée n’est généralement pas uniforme et dépend de l’étape de réduction, ce qui est difficile à contrôler, la tache argentée n’est pas une méthode quantitative et, ainsi, pas recommandé pour gel comparaison étude et protéine quantification9. Méthodes optimisées de sensibilité peuvent utiliser des aldéhydes peuvent également indiquer un uniforme plus coloration10. Cependant, c’est au détriment d’une analyse plus poussée en aval en raison de la réticulation des protéines par des aldéhydes. Protocoles rapides surtout combinent ou raccourcir des étapes pour réduire le temps, compromettre la reproductibilité et l’uniformité de la tache5. En conséquence, il y a nombreux argent souillant des variantes à l’intérieur de gel de protéine, coloration, chacun optimisé pour répondre à certaines exigences ; par exemple, simplicité, sensibilité ou peptide taux de récupération pour l’analyse en aval. Ces attributs peuvent également avoir une incidence sur l’autre, et satisfaire toutes les exigences dans un seul protocole peut s’avérer difficile.
Dans ce travail, nous introduisons une nouvelle méthode pour la détection des protéines en gel de polyacrylamide de coloration à l’argent fluorescent. Dans cette méthode, nous utilisons une sonde fluorogène d’ions d’argent, TPE-4TA (Figure 1), pour visualiser les protéines imprégnées d’argent11. TPE-4TA est conçu selon le principe de l’émission induite par l’agrégation (AIE). Il est non-émissif dissous dans une solution aqueuse, mais est fortement émissif en présence d’ions d’argent. En remplaçant le développement chromogène en taches argent traditionnels par un fluorogène développer étape, la méthode argentée fluorescente permet la coloration robuste des protéines totales avec une formation réduite.
En outre, la tache argentée fluorescente a montré une bonne gamme dynamique linéaire pour la quantification des protéines, qui est comparable avec la tache de SYPRO Ruby largement utilisé et non réalisable avec des taches argent traditionnels. Le gel peut être photographié sur les systèmes de documentation gel couramment utilisés avec une lampe ultraviolette (longueur d’onde excitation : canal de 302/365 nm ; émission : ~ 490-530 nm) à plusieurs laboratoires de biologie.

<table><tbody><tr><td>Tampon d’échantillon LDS (4X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0007</td><td>Réactif</td></tr><tr><td> 4-12 % Bis-Tris Protein Gels, 1,0 mm, 15 puits</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0323BOX</td><td>Gel préfabriqué</td></tr><tr><td>Agent réducteur d’échantillon (10X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0004</td><td></td></tr><tr><td>Réactif MES SDS Running Buffer (20X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0002</td><td>Mini</td></tr><tr><td>réservoir de gel</td> réactif <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25977</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Alimentation 300W (230 VAC)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PS0301</td><td></td></tr><tr><td>Équipement Échelle de protéines non colorées</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26614</td><td>Échantillon</td></tr><tr><td>Nitrate</td><td>d’argent Sigma-Aldrich</td><td>31630-25G-R</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Bragg and co.</td><td>42520J</td><td>Réactif</td></tr><tr><td>Acide acétique</td><td>J.T. Baker</td><td>103201A</td><td></td></tr><tr><td>Réactif Synthèse Milli-Q A10</td><td>Merk-Provides</td><td></td> <td>18.2 M&Omega ;. </td></tr><tr><td>système de documentation sur le gel d’eau cm (modèle c600)</td><td>Azure biosystems-Equipment</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fluorescent coloration à l’argent des protéines dans les gels de polyacrylamide

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

Coloration à l’argent est une technique colorimétrique largement utilisée pour visualiser les bandes de protéines dans les gels de polyacrylamide après électrophorèse sodium dodecyl sulfate polyacrylamide (SDS-PAGE). Les taches argent classiques ont certains inconvénients, comme le haut fond de coloration, de recouvrement de mauvaises protéines, faible reproductibilité, une gamme dynamique linéaire étroite pour la quantification et une compatibilité limitée avec la spectrométrie de masse (MS). Maintenant, avec l’utilisation d’une sonde de fluorogène Ag+ , TPE-4TA, nous avons développé une coloration méthode pour la visualisation de protéines totales dans les gels de polyacrylamide fluorescent à l’argent. Cette nouvelle tache évite l’étape pénible réduction argent en taches argent traditionnels. En outre, la tache argentée fluorescente montre bonne reproductibilité, une sensibilité et une quantification linéaire dans la détection de protéines, ce qui en fait une tache de gel de protéines utiles et pratiques.

Les bandes de protéines colorées par la tache argentée fluorescente présentent une fluorescence vert intense sous une lampe à UV 365 nm. Toutes les bandes de protéines 14 (10-200 kDa), de haut en bas, étaient clairement visibles, en corrélant bien avec 14 ceux rouge taché par le SYPRO Ruby colorant (Figure 2)10.
Concernant la détection de protéines quantitative, les gels ont ...

Nous décrivons ici un protocole détaillé décrivant un fluorescent nouvelle coloration pour la détection de protéines totales dans les gels de polyacrylamide. Le protocole utilise une sonde de turn-on argent ionique spécifique fluorescence, qui permet de détecter Ag+-complexes de protéine et élimine certaines limitations des taches argent chromogène traditionnels.

Fluorescent coloration à l’argent des protéines dans les Gels de Polyacrylamide

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Il s’agit d’une nouvelle méthode de coloration du gel qui utilise une sonde fluorogène en argent pour convertir la coloration traditionnelle en argent en colorant en argent fluorescent. Cette méthode a montré des performances améliorées par rapport à la coloration conventionnelle de nitrate d’argent et la coloration rubis SYPRO tout en utilisant un protocole simple et simple sans aldéhydes. Alex Wong, assistant de recherche de mon laboratoire, démontrera la procédure.Pour commencer cette procédure, diluer les échantillons de protéines avec une solution contenant de l’eau distillée, tampon LDS, et un agent réducteur d’échantillons. Installez un mini réservoir de gel rempli de tampon MES pour effectuer SDS-PAGE avec un gel protéique Bis-Tris de 4 à 12 %. Chargez les puits avec l’échantillon de protéines préparé, puis exécutez le gel à une tension constante de 200 volts pendant 30 minutes.Après l’électrophoresis, submerger le gel dans une solution de 100 millilitres contenant de l’éthanol et de l’acide acétique sur un shaker orbital et incuber deux fois pendant 30 minutes chacun à température ambiante tout en secouant à 50 rpm. Ensuite, lavez le gel trois fois avec de l’eau ultrapure

fluorescent-silver-staining-of-proteins-in-polyacrylamide-gels

Research

Recherche

JoVE Journal

Biochemistry

Biochimie

Après la séparation par des méthodes électrophorétiques des protéines dans un gel peut être détectée par des méthodes de coloration de plusieurs. Coloration des protéines au bleu de Coomassie, coloration à l'argent, SYPRO Orange, SYPRO Ruby sont démontrées dans cette vidéo.

Coloration protéines dans les gels

Une méthode simple et spécifique a été démontrée pour le marquage fluorescent et une meilleure détection des protéines de surface cellulaire sans une étape de fractionnement. L'abondance différentielle des protéines de surface cellulaire a été analysée par électrophorèse bidimensionnelle (2-D) et Ettan ™ technologie DIGE.

Étiquetage sélective des protéines de surface cellulaire utilisant CyDye DIGE Fluor Colorants Minimal

Un protocole court pour la coloration des protéines de Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 dans des gels de polyacrylamide est décrite sans utiliser de solvants organiques ou d'acide acétique comme dans les procédures de coloration classique avec CBB.

Coloration des protéines dans les gels de Coomassie G-250, sans solvant et l&#39;acide acétique organique

Cette vidéo est de populariser une colloïdale Coomassie G-250 protocole de coloration en fonction de...

Rapide et sensible colloïdal Coomassie G-250 de coloration des protéines dans des gels de polyacrylamide

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode de coloration à l’argent des gels de polyacrylamide pour la visualisation des protéines totales à l’aide de sondes fluorogéniques.

Coloration fluorescente à l’argent : une technique pour visualiser les protéines totales dans les gels de polyacrylamide

Dans cette vidéo, nous montrons une procédure de coloration combinée au bleu d’Alcian et à l’argent de fragments d’oligosaccharides de glycosaminoglycane sulfatés. Cette technique de coloration combinée amplifie considérablement les bandes de polymères de glycosaminoglycanes de différentes longueurs dans les gels de polyacrylamide.

Coloration à l’argent des glycosaminoglycanes sulfatés : une méthode de coloration pour la visualisation des glycosaminoglycanes sulfatés dans des gels de polyacrylamide

Cette vidéo présente une technique de séparation dénaturante à base de polyacrylamide pour les protéines. Cette technique permet d’identifier avant tout les protéines en fonction de leur poids moléculaire.

Électrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécylsulfate de sodium pour l’analyse des protéines : une technique pour séparer et visualiser les protéines en fonction de leur poids moléculaire

Dans cette vidéo, nous faisons la démonstration d’une méthode d’électrophorèse sur gel bidimensionnelle qui sépare des protéines individuelles d’un mélange complexe de protéines obtenues à partir de tissus tumoraux d’adénome hypophysaire non fonctionnel humain (NFPA). Les protéines sont séparées en fonction de leur charge électrique dans la première dimension et séparées en fonction des poids moléculaires dans la deuxième dimension.

Électrophorèse bidimensionnelle sur gel de polyacrylamide : technique de séparation pour l’analyse des protéines dans un mélange complexe de protéines basé sur la charge et la masse moléculaire

Nous rapportons ici un protocole qui nécessite seulement trois réactifs et 7 min de traitement et est adapté pour la Géneration rapide des données de SSR de qualité dans l’analyse génétique de coloration à l’argent simple et peu coûteuse.

Un rapide argent coloration protocole permettant Simple et efficace détection de marqueurs microsatellites à l’aide d’un Gel de Polyacrylamide Non dénaturants

Ici, nous présentons une méthode sensible, rapide et discriminante de coloration post-gel pour imager les ARN marqués avec des aptamers de mangue d'ARN I, II, III, ou IV, utilisant des gels indigènes ou dénaturants de gel de polyacrylamide (PAGE). Après avoir utilisé des gels PAGE standard, l'ARN étiqueté mangue peut être facilement taché de TO1-Biotine, puis analysé à l'aide de lecteurs de fluorescence couramment disponibles.

Visualisation fluorescente de l'ARN étiqueté mangue dans les gels de polyacrylamide par l'intermédiaire d'une méthode de coloration

Ce rapport décrit des techniques pour isoler et purifier les glycosaminoglycanes sulfatés (GAN) à partir d’échantillons biologiques et une approche d’électrophorèse sur gel de polyacrylamide pour approximer leur taille. Les GG contribuent à la structure des tissus et influencent les processus de signalisation via l’interaction électrostatique avec les protéines. La longueur du polymère GAG contribue à leur affinité de liaison pour les ligands apparentés.

Détection des glycosaminoglycanes par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et coloration à l’argent

Découvrez une méthode de coloration fluorescente à l'argent pour détecter les protéines dans les gels de polyacrylamide. Cette technique améliore la sensibilité et la spécificité par rapport aux méthodes traditionnelles.

Fluorescent coloration à l’argent des protéines dans les Gels de Polyacrylamide

Explorer plus de vidéos