Name: Extraction et analyse des taïwanaise Propolis verte (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Découvrez l'extraction de la propolis verte taïwanaise à l'éthanol pour caractériser son activité antibactérienne. Cette méthode fiable et reproductible permet d'évaluer précisément la qualité des extraits naturels.

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Ce manuscrit a été édité par Wallace édition académique.

1. préparation de l’extrait l’éthanol composés
<ol><li>Peser 10 g de gelée propolis verte taïwanaise, qui ont été recueillie des ruches à Taïwan de mai à juillet, et les broyer à l’aide du moulin à épices. Confirmer qu’entiers morceaux de propolis verte taïwanaise est broyés en une fine poudre sans les particules volumineuses.</li>
	<li>Ajouter 100 mL de diverses concentrations d’éthanol (60 %, 70 %, 80 %, 95 % et 99,5 %) et de l’eau pour séparer les flacons et mélanger chaque concentration avec 10 g de la propolis au sol.</li>
	<li>Incuber à 25 ° C et agiter la fiole à 250 tr/min pendant 48 h.</li>
	<li>Filtrer les extraits à l’éthanol sur papier filtre avec une taille de pore de 25 μm.</li>
	<li>Reconstituer les filtrats de leur volume original (100 mL) avec de l’éthanol 95 % en utilisant un ballon jaugé.</li>
	<li>Magasin que l’éthanol extrait à-20 ° C. Remarque : Le protocole peut être suspendu ici.</li>
</ol>2. préparation des extraits à l’éthanol pour HPLC
<ol><li>Concentré de 10 mL d’éthanol extraits par évaporation sous vide à 40 ° C pendant 15 min.</li>
	<li>Cuire au four de la matière sèche à 45 ° C pendant 24 h.</li>
	<li>Reconstituer la matière sèche avec 10 mL d’éthanol à 95 %.</li>
	<li>Filtre 1 mL d’éthanol extrait à l’aide d’un filtre de seringue stérile avec une taille de pores de 0,45 µm.</li>
	<li>Refiltrer les extraits à l’éthanol en utilisant un filtre de seringue stérile avec une porosité de 0,22 µm. Le filtrat est recueilli et peut être analysé directement par CLHP.</li>
</ol>3. analyse du contenu Propolin par CLHP
<ol><li>
Création de courbes standard de propolins
	<ol>
<li>Préparer 1 L de la phase mobile de solution de méthanol : eau 88.8:11.2 (v/v).</li>
		<li>Préparer des dilutions de propolin des concentrations (C, D, F et G) standards (15,625 mg/mL, 31,25 mg/mL, 62,5 mg/mL et 125 mg/mL, respectivement) à l’aide de la solution de la phase mobile comme solvant.</li>
		<li>Injecter 20 µL de propolin des concentrations standard dans la colonne de phase inverse, dans l’ordre de la faible concentration à la forte concentration.</li>
		<li>Affectez à la colonne HPLC à 30 ° C et le débit de 1 mL/min.</li>
		<li>Sélectionner la longueur d’onde du détecteur UV 280 nm et le temps de l’enregistreur à 20 min.</li>
		<li>Analyser les normes au moins 3 x.</li>
		<li>Tracer la réponse de mesure (axe y) contre la concentration (axe des x) à l’aide de calcul feuille de logiciel et créer une courbe standard avec l’équation et la valeur de R-carré.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analyse des extrait alcoolique s
	<ol>
<li>Injecter 20 µL de l’éthanol les extraits obtenus d’étape 2.5 dans la colonne de phase inverse.</li>
		<li>Affectez à la colonne HPLC à 30 ° C et le débit de 1 mL/min.</li>
		<li>Sélectionner la longueur d’onde du détecteur UV 280 nm et le temps de l’enregistreur à 20 min.</li>
		<li>Analyser les normes au moins 3 x.</li>
		<li>Calculer la concentration de propolin dans l’extrait par l’éthanol, à l’aide de l’équation de la courbe d’étalonnage obtenue à l’étape 3.1.7 qui utilise la surface du pic pour chaque propolin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. analyse de Concentration bactéricide Concentration minimale inhibitrice et Minimum
Remarque : La méthode de microdilution sert à évaluer l’efficacité antibactérienne du propolins de l’éthanol extrait de propolis verte taïwanaise.
<ol><li>
Préparation des organismes d’essai
	<ol>
<li>Décongeler les souches bactériennes, Staphylococcus aureus et Escherichia coli et puis, la culture eux à bouillon trypticase soja et bouillon nutritif, respectivement, à 37 ° C pendant 24 h.</li>
		<li>S. aureus à l’aide de bouillon trypticase soja et e. coli à l’aide de bouillon nutritif pour deux générations de passage et, puis, calculer unités formatrices de colonies par comptage des colonies individuelles sur une gélose.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Préparation de l’éthanol extrait pour tests d’activité antibactérienne
	<ol>
<li>Concentrer les extraits à l’éthanol obtenus à l’étape 1.5 par évaporation sous vide à 40 ° C pendant 15 min.</li>
		<li>Reconstituer la matière sèche avec le diméthylsulfoxyde (DMSO) et ajuster la concentration de l’extrait à 12,8 mg/mL.</li>
		<li>Faire une dilution en série (concentration : 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 et 640 µg/mL) de l’éthanol extrait en utilisant le bouillon.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tests de concentration minimale inhibitrice
	<ol>
<li>Ajouter 10 µL d’éthanol dilué extraits allant de 0,156 640.0 µg/ml dans une plaque de 96 puits.</li>
		<li>En utilisant le bouillon, réglez le volume à 100 µL et maintenir 5 % DMSO dans toutes les dilutions.</li>
		<li>Ensemencer 100 µL de culture bactérienne (1 x 106/ml) dans la plaque à 96 puits.</li>
		<li>Extraits de l’inoculum de culture contenant différentes concentrations d’éthanol à 37 ° C pendant 48 h.</li>
		<li>Analyser la croissance bactérienne selon la turbidité et à l’aide de la densité optique (lecteur de microplaques) à 590 nm pour déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Concentration bactéricide minimum tests
	<ol>
<li>Ensemencer 10 µL de culture liquide de chaque puits du test MIC qui ne présentaient aucune croissance sur une gélose.</li>
		<li>Incuber à 37 ° C pendant 24 h.</li>
		<li>Déterminer l’activité bactéricide en identifiant la plus faible concentration qui a révélé aucune prolifération bactérienne visible. La concentration qui élimine complètement la croissance cellulaire est considérée être la concentration bactérienne minimale (MBC).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à déclarer.

Une étude a rapporté que macération, avec différentes concentrations d’éthanol, pourrait servir pour l' extraction de la propolis brésilienne17; Toutefois, le processus était long17. Il a fallu au moins 10 jours pour extraire les composés bioactifs, comme la teneur en composés phénoliques, de propolis brésilienne17. Par ailleurs, extraction de l’éthanol en combinaison avec chauffage à 37 ° C, 50 ° C ou 70 ° C pendant 30 min a été proposée pour l’extr...

La propolis est un mélange de résineux naturel produit par l’espèce d’abeille Apis mellifera. La propolis a été largement utilisée depuis l’antiquité en médecine folklorique. Une étude a récemment rapporté que la propolis est bénéfique pour prévenir les infections microbiennes et inflammation1. De nombreuses études ont démontré que les principaux composés bioactifs dans la propolis sont des flavonoïdes, des esters de l’acide phénoliques, prénylés p-coumarique acides et diterpenic acides2,3. A ce jour, 10 dérivés de flavanone prénylés de propolis verte taïwanaise ont été identifiés par chromatographie liquide à haute performance (HPLC)4,5,6,7. Les plus abondantes parmi ceux-ci sont propolins C, D, F et G5,7. Les effets biologiques considérables de propolis verte taïwanaise sont corrélés avec sa haute teneur de propolins8.
Les concentrations de composés bioactifs dans la propolis varient considérablement selon la saison et l’emplacement géographique d'où provient la propolis. La propolis européenne contient essentiellement des flavonoïdes aglycone et phénoliques acides9. Les principaux composés bioactifs dans la propolis du Brésil sont prénylés p-coumarique acides, tels qu’artepillin C10. Une étude a démontré que la saison est un facteur essentiel pour déterminer la teneur totale propolin taïwanais propolis verte11. Le contenu de propolin en taïwanais propolis verte est plus élevé en été (mai - juillet) et plus faible en hiver11. La propriété antibactérienne de la propolis a été considérée comme un indicateur de l’activité biologique. En général, les échantillons de la propolis provenant de diverses régions ont manifesté une propriété antibactérienne similaire ; par exemple, il est généralement efficace contre presque toutes les bactéries gram-positives et présente un effet antibactérien limité contre les bactéries gram-négatives10,12,13. Ont démontré que des interactions synergiques entre les flavonoïdes contenus dans la propolis ont un effet antibactérien14. De même, la propolis verte taïwanaise aurait ont un effet antimicrobien contre les bactéries gram-positives,15. En outre, une étude a également un effet antimicrobien de l’interaction de propolins en taïwanais propolis verte8.
La caractérisation des composés bioactifs dans la propolis est difficile parce que sa composition chimique peut varier selon sa source d’origine. Par conséquent, il est nécessaire d’établir une méthode faisable et reproductible pour la détermination de la qualité de la propolis verte taïwanaise. Cependant, aucune procédure standard n’a été établi pour l’extraction de la propolis verte taïwanais et analyse fonctionnelle. Plusieurs méthodes s’appliquant indifféremment des solvants organiques et inorganiques ont été proposées pour la propolis extraction16,17,18,19,20. Parce que la propolis est un mélange lipophile, les études ont démontré que l’extraction organique est mieux qu’extraction inorganiques8,18,19. La concentration totale propolin taïwanaise propolis verte et ses propriétés antibactériennes sont des indicateurs clés de la qualité de la propolis verte taïwanaise. Ainsi, le but de cette étude est de présenter un protocole pour l’utilisation d’éthanol comme solvant d’extraire et de caractériser les propriétés antibactériennes de propolis verte taïwanaise.

<table><tbody><tr><td>éthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman n° 4 papier filtre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>méthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>phase inverse RP-18 colonne</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>bouillon de soja tryptique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>Bouillon nutritif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>sulfoxyde de diméthyle</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>moulin à</td> <td>épicesWaring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques</td><td>Dispositifs moléculaires</td><td>Système EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC Agilent</td><td></td><td>Série 1200 Évaporation</td><td></td></tr><tr><td>sous vide</td><td>B&Uuml ; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

extraction et analyse des taïwanaise propolis verte

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Taïwanaise propolis verte est riche en flavonoïdes prénylés et présente un large éventail d’activités biologiques, comme antioxydant, antibactérien et les anticancéreux. Les composés bioactifs de propolis verte taïwanaise sont propolins, à savoir C, D, F et G. La concentration de propolins dans la propolis verte taïwanaise varie selon la saison et la localisation géographique. Ainsi, il est essentiel d’établir une procédure standard et reproductible pour la détermination de la qualité de la propolis verte taïwanaise. Nous présentons ici un protocole qui utilise l’extraction à base d’éthanol, chromatographie liquide à haute performance et une analyse de l’activité antibactérienne pour caractériser la qualité de la propolis verte taïwanais. Cette méthode indique que 95 % et 99,5 % des extractions de l’éthanol atteignent les rendements en matière sèche maximale de la propolis verte taïwanaise, réduisant ainsi aux plus fortes concentrations de propolins qui ont des propriétés antibactériennes. Selon ces résultats, le présent protocole est réputé fiable et reproductible pour la détermination de la qualité de la propolis verte taïwanaise.

Résultats positifs des données représentatives pour l’extraction de l’éthanol sont présentées au tableau 1. Le rendement en matière sèche de la propolis verte taïwanais était corrélée positivement avec la concentration d’éthanol. Les extraits de l’éthanol 95 % et 99,5 % avaient la matière sèche plus élevée rendement de propolis verte taïwanaise. Le rendement en matière sèche plus faible de la propolis verte taïwanais s’est produite lorsque l’eau a été utilisé comme solvan...

Nous présentons un protocole pour l’utilisation de l’éthanol comme solvant d’extraire et de caractériser la propolis verte taïwanaise qui présente une activité antibactérienne.

Extraction et analyse des taïwanaise Propolis verte

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

Ici, nous présentons le protocole pour l’utilisation de l’éthanol comme solvant pour extraire et caractériser la propolis verte taïwanaise qui inhibent l’activité antibactérienne. Ce protocole est une méthode fiable et reproductible pour déterminer la qualité de la propolis verte taïwanaise. Chun’Ting Chen et Yi’Hsuan Chien, doctorants de mon laboratoire, feront la démonstration.Pour commencer, peser 100 grammes de propolis verte taïwanaise. À l’aide d’un broyeur à épices, moudre la propolis en s’assurant que les morceaux sont broyés en poudre fine sans grosses particules. Élisez cinq flacons et ajoutez 100 millilitres de diverses concentrations d’éthanol dans l’eau à chacun.Mélanger 10 grammes de propolis moulue dans la solution d’éthanol dans chaque flacon et incuber à 25 degrés Celsius en secouant à 250 rpm pendant 48 heures. Après cela, utilisez du papier filtre avec une taille de pore de 25 micromètres pour filtrer les extraits d’éthanol. À l’aide d’une fiole volumétrique, reconstituer les filtrates à leur volume d’origine de 100 millilitres avec 95 % d’éthanol.Conserver les extraits reconstitués à moins 20 degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils soient prêts à l’emploi. Lorsque vous êtes prêt à préparer les extraits pour HPLC, utilisez l’évaporation sous vide pour concentrer 10 millilitres de chaque extrait à 40 degrés Celsius pendant 10 minutes. Cuire la matière sèche à 45 degrés Celsius pendant 24 heures.Puis, reconstituer chaque échantillon de matière sèche avec 10 millilitres de 95% d’éthanol. À l’aide d’un filtre seringue d’une taille de pore de 0,22 micromètre, refilter chaque extrait et recueillir le filtrate pour analyse directe avec HPLC. Pour commencer à établir une courbe standard, préparez un litre de la solution de méthanol de phase mobile à la solution d’eau à un rapport de 88,8 à 11,2.En utilisant la solution de phase mobile comme solvant, préparez des dilutions périodiques des concentrations standard de propolin décrites dans le protocole de texte. Injectez 20 microlitres de chaque concentration standard dans les colonnes de phase inverse séquentiellement de la concentration la plus basse à la plus élevée. Ensuite, réglez la colonne HPLC à 30 degrés Celsius, réglez la longueur de renonciation du détecteur UV à 280 nanomètres, et le débit à un millilitre par minute, et le temps d’enregistrement à 20 minutes.Analyser les normes au moins trois fois. Après cela, utilisez un logiciel de feuille de calcul pour brancher la réponse de mesure contre la concentration résultant en une courbe standard avec une équation déterminée et une valeur au carré R. Pour commencer à analyser les extraits, injectez 20 microlitres de chaque extrait dans la colonne de phase inverse.Réglez la colonne HPLC à une température de 30 degrés Celsius et à un débit d’un millilitre par minute. Réglez la longueur de renonciation du détecteur UV à 280 nanomètres, et le temps d’enregistrement à 20 minutes. Analyser les extraits au moins trois fois.Ensuite, utilisez la courbe standard pour déterminer la concentration de propolin dans chaque extrait d’éthanol. Après avoir préparé les organismes d’essai et les extraits d’éthanol, ajouter 10 microlitres d’extrait dilué d’éthanol, allant de 0,156 à 640 microgrammes par millilitre dans les puits d’une plaque de puits de 96 puits. Utilisez le bouillon pour ajuster le volume de chaque puits à 100 microlitres en s’assurant de maintenir 5% DMSO dans toutes les dilutions.Ensuite, inoculer 100 microlitres de culture bactérienne dans chaque puits de la plaque de puits 96. Culture à 37 degrés Celsius pendant 48 heures. Utilisez un lecteur de microplaque à 590 nanomètres pour analyser la croissance bactérienne en fonction de la turbidité et pour déterminer la concentration inhibitrice minimale.Après cela, inoculer 10 microlitres de culture liquide de chaque puits qui a montré à la croissance sur une plaque d’agar. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 24 heures. Identifier la concentration la plus faible qui n’a révélé aucune croissance bactérienne visible pour déterminer l’activité bactérienne.La concentration qui a complètement éliminé la croissance cellulaire est considérée comme la concentration bactérienne minimale. Dans cette étude, la propolis verte taïwanaise est extraite avec de l’éthanol. Le rendement en matière sèche semble être le plus élevé lorsqu’une forte concentration d’éthanol est utilisée, et la plus faible lorsque l’eau est utilisée.Ces résultats indiquent qu’un solvant organique est le plus performant au cours de cette extraction et que le rendement est positivement associé à la concentration d’éthanol. De même, la concentration de propolins semble être positivement associée à la concentration d’éthanol pendant l’extraction, le rendement le plus élevé de propolins étant obtenu dans les extraits d’éthanol à 95 % et 99,5 %. Les effets antibactériens des extraits d’éthanol contre l’aureus S et E coli sont ensuite étudiés.La concentration minimale moyenne d’inhibiteurs de l’aureus S semble se situer entre 10 et 20 microgrammes par millilitre et la concentration bactérienne moyenne semble être de 20 microgrammes par millilitre. Les extraits d’eau, cependant, n’ont eu aucun effet antibactérien contre S aureus. Aucun effet antibactérien n’est observé pour E coli lors de l’utilisation de l’eau ou des extraits d’éthanol.L’une des principales procédures expérimentales est d’édndre l’uniformité de la propolis verte taïwanaise pendant le broyage.

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