Détection d’endotoxines dans les Nano-formulations utilisant la Limulus Amébocytes Lysate (LAL)

Détection d’endotoxines dans les nanomatériaux représente un des grands défis dans le domaine de la nanomédecine. Nous présentons ici une étude de cas décrivant le cadre composé de trois formats différents de LAL pour évaluer la contamination potentielle d’endotoxines dans les nanoparticules.

Cette méthode peut aider à répondre dans le domaine médical sur la sécurité des nanomédicinaux. Les avantages de cette technique est qu’il est standard, et est utilisé dans le monde entier pour l’évaluation des produits, Aux nanomédicinaux. Démonstration de la procédure, sera Barry Neun, au Laboratoire de caractérisation nano technologie.

Pour une préparation standard d’étalonnage, utilisez 900 microlitres de lysate d’amebocyte limulus ou d’eau de qualité LAL. Et 100 microlitres d’endotoxine standard de contrôle, pour préparer autant de dilutions intermédiaires que nécessaire, pour permettre la préparation d’une norme d’étalonnage avec une concentration d’une unité d’endotoxine par millilitre. Ensuite, à l’aide de 900 microlitres d’eau de qualité LAL, et 100 microlitres de l’unité d’endotoxine par millilitre étalonnage standard, préparer une deuxième norme d’étalonnage, à une concentration de 0,1 unité d’endotoxine par millilitre.

Répétez ensuite la dilution décuplée en série pour préparer deux normes d’étalonnage inférieures. Pour obtenir un total de quatre normes d’étalonnage, allant de 0001 à une unité d’endotoxine par millilitre. Pour préparer un contrôle de qualité de 05 endotoxines par millilitre, combine 50 microlitres de l’unité d’endotoxine par millilitre de solution d’endotoxine standard de contrôle, avec 950 microlitres d’eau de qualité LAL.

Ensuite, dans le logiciel sélectionnez les paramètres de l’instrument, et de créer le modèle. Sélectionnez collecter des données et entrez l’ID de test et le groupe de données dans l’onglet général. Sous l’onglet matériel, sélectionnez le type d’instrument et la méthode LAL, et vérifiez qu’un numéro de série, l’ID du système et les informations du port de série apparaissent à l’écran.

Cliquez bien deux fois pour confirmer la sélection des instruments, et la communication avec l’instrument, et entrez l’iD de l’échantillon dans le même ordre que les échantillons seront testés. Utilisez ensuite les boutons par défaut pour entrer dans la courbe standard de contrôle négatif et testez des échantillons. Ajoutez le volume approprié de normes d’étalonnage de contrôle négatif et de contrôle de la qualité dans des tubes en verre préétiquetés en double.

Et ajouter le volume approprié de LAL au premier test vile. Vortex le vil brièvement, et placez le flacon dans les fentes de test appropriées dans le carrousel d’instrument. Avant de charger les échantillons, effectuer plusieurs dilutions du matériau nano d’essai dans la dilution maximale valide comme démontré.

Pour préparer une unité d’endotoxine de 05 par millilitre de contrôle d’amélioration de l’inhibition, combinez 25 microlitres de l’unité d’endotoxine par millilitre de solution d’endotoxine standard de contrôle, avec 475 microlitres du matériau nanométrique d’essai à une dilution donnée. Après le vortex, chargez les contrôles appropriés d’amélioration de l’innovation et les échantillons d’étude non prélevés dans l’instrument. Puis aliquot décombre et les nanomatériaux à pointes à une dilution spécifique dans les tubes pré-étiquetés.

Avant le vortex, et le chargement dans le carrousel d’instrument. Pour effectuer un Gel-Clot LAL, préparer l’endotoxine standard de contrôle à une concentration finale de quatre lambda, et combiner 100 microlitres de norme, avec 100 microlitres d’eau, ou échantillon d’essai pour atteindre une concentration finale d’endotoxine standard de contrôle deux lambda. Ajouter 100 microlitres de Lysine à chaque dilution lambda.

Vortex les tubes brièvement, et placer la grille de tubes dans un bain d’eau de 37 degrés Celsius pendant une heure. À la fin de l’incubation, inverser les tubes avec un mouvement lisse, et enregistrer manuellement les résultats en utilisant plus pour un caillot ferme, et moins pour aucun caillot, ou un caillot lâche. Dans cette analyse représentative, la doxorubicine liposomale PEGylated a interféré avec le LAL chromogenic à la dilution cinq, cependant cette interférence a été surmontée aux dilutions plus élevées.

La récupération de pointe était entre 50 et 200%quand la formulation a été examinée aux dilutions 50 et 500 dans la turbidité et le LAL chromogenic, aussi bien qu’à la dilution cinq, dans la turbidité LAL. Une fois ajustés par le facteur de dilution, les résultats étaient cohérents entre les illusions dans les deux essais. En outre, les résultats étaient cohérents entre les trois formats d’essai.

Rappelez-vous que chaque échantillon a sa propre gamme de dilutions, chaque format LAL utilise sa norme de contrôle dans la doxine et le lysate, et que les tubes utilisés pour préparer les dilutions, et d’effectuer une réaction à différents pour chaque essai LAL. Pour cette procédure, d’autres méthodes comme peut être effectuée pour répondre à des questions supplémentaires sur le matériel Après son développement, cette technique a ouvert la voie pour les sutures et le domaine de la nanomédia, d’explorer les applications médicales de la nano-technologie formulé des médicaments chez l’homme, et des modèles cliniques, y compris, mais pas limité aux primates non humains, lapins, chiens et rats. N’oubliez pas que le travail avec la doxine peut être extrêmement dangereux et les précautions telles que le port d’équipement de protection individuelle, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.