Name: Isolement et Culture des embryons de souris des cellules souches neurales (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Découvrez une technique microchirurgicale pour isoler et cultiver des cellules souches neurales à partir de l'éminence ganglionnaire d'embryons de souris E13. Ce protocole fiable améliore la compréhension du développement neural et de la biologie des cellules souches.

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Ce travail a été soutenu par l’Institut de Royan.

Toutes les chirurgies et les procédures sur les animaux ont été approuvées par le Comité de l’éthique animale de l’Institut de Royan, Téhéran, Iran.
1. préparation des Instruments chirurgicaux, lavage tampon (HEPES-MEM), milieux de Culture cellulaire et plaques de Culture cellulaire
<ol><li>Stériliser les instruments chirurgicaux (ciseaux, poignée de lame de bistouri Swann-Morton et forceps) par autoclavage en fonction sur les lignes directrices de stérilisation systématique.</li>
	<li>Préparer un volume suffisant de tampon HEPES-MEM (environ 100 mL est suffisant pour chaque souris gravides). Ajouter des concentrations élevées d’antibiotiques (pénicilline/streptomycine 10 %) dans la mémoire tampon HEPES-MEM. Cette concentration d’antibiotiques est nécessaire pour réduire le risque de contamination microbienne.<ol>
<li>Pour préparer un tampon HEPES-MEM, ajouter 0,5958 g de poudre HEPES dans 100 mL de MEM (milieu minimum essentiel) et bien mélanger. Ajuster le pH de 7,3 à 7,4 et filtrer le support filtre 0,22 µm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Faire NSC moyen moyen contenant des neurobasal (NB), additionné de 20 ng/mL EGF, 10 ng/mL bFGF, Supplément de x N2 100 1 % ou 1 % B27 supplément (sans vitamine A), 1 U/mL héparine, 1 % L-glutamine, acide aminé à 1 % non essentiels (NEAA), 1 % pénicilline/streptomycine, et 0,1 mM β-mercaptoéthanol.</li>
</ol>2. animale chirurgie et Micro-Dissection
<ol><li>Anesthésier une souris enceinte le 13e jour de gestation (ici, utiliser la souche de souris BALB/c âgés de 4 mois) par injection intrapéritonéale de kétamine-xylazine, 100 mg/kg et 10 mg/kg de poids corporel respectivement.<ol>
<li>Confirmer une anesthésie profonde en exerçant un stimulus douloureux (par exemple, pincer avec une pince) à pied de l’animal et lorsqu’il n’y a aucun réflexe de la douleur, l’animal de sacrifice par dislocation cervicale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Désinfectant et nettoyer la peau de l’abdomen en pulvérisant de l’éthanol à 70 %.</li>
	<li>Contrôle de la peau de l’abdomen et ensuite couper la peau et l’aponévrose sous-jacente avec des ciseaux pour découvrir la cavité abdominale et les cornes utérines.<ol>
<li>Enlever les cornes utérines contenant les embryons en ciseaux et de les transférer dans un tube conique de 50 mL contenant 25 mL de tampon HEPES-MEM froid.</li>
		<li>Placer le tube conique sous la hotte à flux laminaire et ouvrir le bouchon sous le capot. Ressortir les cornes utérines de la tube et rincer 3 fois avec assez de volume de la mémoire tampon HEPES-MEM froid fraîche pour éliminer les débris et le sang.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Transférer le tissu utérin dans une boîte de Pétri contenant 7 à 10 mL de tampon HEPES-MEM froid de 10 cm. Ouvrez les cornes utérines à l’aide de fins ciseaux et transfert embryons à une autre boite contenant 7 à 10 mL de tampon HEPES-MEM froid. Mettre ensuite le plat de 10 cm avec des embryons sous le microscope à dissection pour l’opération micro-dissection.</li>
	<li>Plier la pointe d’une aiguille de seringue 25-27 G en poussant sa pointe sur une poignée de lame de bistouri en acier. Pliez la pointe de l’aiguille jusqu'à ce que la pointe est pliée à un angle de 70-90°. Vérifier la pointe de l’aiguille sous le microscope à dissection de voir le coude à la pointe de l’aiguille. NOTE : Bien entendu, les embryons ont une position latérale dans le plat.</li>
	<li>Sans changer leur position, tenir le cou et le corps de l’embryon avec une pince fine, puis insérez la partie pliée de la pointe de l’aiguille dans la fontanelle frontale de la tête de l’embryon. Il y aurait des petits saignements ou un caillot de sang là.<ol>
<li>Déplacer l’extrémité de l’aiguille superficiellement. Tandis que la partie pliée est à l’intérieur de la courbure vers le front, puis vers l’arrière de la tête, assurez-vous de couper à travers la peau et le crâne et ne pas endommager le cerveau sous-jacent.</li>
		<li>Pousser la peau avec la pointe de l’aiguille latéralement pour découvrir le cerveau et insérez l’aiguille de la face latérale de la peau de la zone située sous le cerveau. Enlever le cerveau du crâne en le poussant à sortir du crâne disséqué.</li>
		<li>Stabilisez le cerveau à l’aide de la pince courbée et couper le cortex de chaque hémisphère, à l’aide de micro-ciseaux pour exposer l’éminence ganglionnaire.</li>
		<li>Tenez le cerveau et placez l’éminence ganglionnaire disséqué dans le tube à centrifuger 15 mL contenant des cellules souches neurales moyen. L’éminence ganglionnaire apparaît clairement avec ses parties médiane et latérales.</li>
		<li>Répétez cette procédure jusqu'à ce que tous les cerveaux ont été disséqués au micro.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Couper l’éminence ganglionnaire disséqué en plaçant l’embout de la pipette contre le fond du tube. Pipetter la suspension haut et bas de 4 à 5 fois pour briser le tissu pour une suspension monocellulaire.<ol>
<li>Centrifuger la suspension à 110 x g pendant 5 min. Retirez le surnageant et remettre en suspension les cellules dans 1 mL de 0.05 % trypsine-EDTA.</li>
		<li>Incuber la suspension cellulaire dans un 37 ° C pendant 10 min et ajouter ensuite un volume équivalent d’inhibiteur trypsique du soja (25 µg/mL) pour arrêter l’activité de la trypsine. Pipetter la suspension cellulaire haut et bas pour s’assurer que la trypsine a été totalement inactivée.</li>
		<li>Centrifuger la suspension cellulaire à 110 g x 5 min. Retirez le surnageant et remettre en suspension les cellules dans 1 mL de milieu complet de NSC et compter le nombre de cellules.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaque des cellules (2 x 105 cellules/mL) au milieu de NSC dans la fiole de vitroplants de taille appropriée. Transférer 5 mL de T25, 20 mL de T75 et 40 mL et flacons T175. Remarque : Neurospheres apparaîtra après culture de 3 jours à 37 ° C dans un incubateur humidifié avec 5 % de CO2. Après 6-7 jours, les sphères doivent mesurer entre 150 à 200 µm de diamètre et seront prêts pour la sous-culture. En cultivant des CNS primaires 1 million après sept jours, le nombre de cellules passera à 3 millions.</li>
</ol>3. trypsinisation et passage des Neurospheres
<ol><li>À la sous-culture du neurospheres, transfert de neurospheres suspendue au milieu dans le tube à centrifuger, centrifuger à 110 x g pendant 5 min et ensuite jeter le surnageant. Ajouter 1 mL de 0.05 % trypsine-EDTA et incuber à 37° C pendant 10 min.<ol>
<li>Inactiver la trypsine utilisant inhibiteur trypsique du soja et pipette le neurospheres doucement jusqu'à et faire les simples cellules.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Centrifuger la suspension cellulaire à 110 x g pendant 5 min, jeter le surnageant et remettre en suspension les cellules dans 1 mL de milieu de NSC. Ces cellules sont prêtes pour la prochaine sous-culture ou la culture laminine et revêtu de Poly-L-Ornithine surfaces pour des expériences avancées.</li>
	<li>Pour la prochaine sous-culture, transfert CNS dans le nouveau ballon (suivre étape 2,8) et leur culture dans le milieu de la NSC. Pour l’induction de la culture de la différenciation neuronale CNS dans le milieu du NSC en l’absence de bFGF et EGF sur laminine et Poly-L-Ornithine enduit plaques (Figure 1 b).</li>
	<li>Pour le revêtement, entièrement recouvrir la surface de culture de cellule en ajoutant un volume suffisant de solution diluée de poly-L-ornithine (25 µg/mL) à la plaque de culture cellulaire et incuber à 37 ° C pendant 2 h.<ol>
<li>Aspirer la poly-L-ornithine et rincez les bien 2 x avec du PBS. Ajouter un volume suffisant de 5 µg/mL laminine pour complètement couvrir la surface de culture et incuber à 37 ° C pendant 2 h. aspirer la laminine avant ensemencement des cellules ou stocker plaque à 4 ° C jusqu'à ce que nécessaire.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. flow Cytometry Assay
Remarque : L’expression des marqueurs spécifiques de la CNS, les neurones et les cellules gliales peut être mesurée par cytométrie de flux test13. Le protocole est basé sur Menon et al.,13 , avec des modifications mineures.
<ol><li>Dissocier des neurospheres ou détacher CNS cultivées de plaques revêtues par trypsinisation pour rendre les cellules individuelles. Ajouter 500 µL de tampon de fixation (2 % paraformaldéhyde (PFA) dans du PBS) à 100 µL de la suspension cellulaire (environ 1 million de cellules est pour colorer avec chacun des anticorps) et puis incuber les tubes à RT pendant 15 min.</li>
	<li>Cellules de lavage en ajoutant 1 mL de PBS au tube et centrifuger à 110 x g pendant 5 min. éliminer le surnageant et Resuspendre le culot cellulaire, laissant environ 100 µL dans le tube.<ol>
<li>Permeabilize des cellules avec Tween-20 (0,7 % Tween-20 dans du PBS) en ajoutant 500 µL de tampon de Tween-20 à 100 µL de suspension cellulaire. Incuber les tubes à RT pendant 15 minutes dans un agitateur orbital (100 tr/min).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Répétez la centrifugation et le lavage de PBS. Retirer le liquide surnageant des tubes complètement, laissant seulement le culot. Ajouter 100 µL d’anticorps primaires dilués (lapin anti souris βtub-III, GFAP et Nestin anticorps à concentration de 1 : 200) dans un tampon de dilution contenant 1 % d’albumine sérique bovine, 10 % de sérum (sérum de chèvre) et 0,5 % Tween-20 dans du PBS et doucement triturer pour mélanger. Incuber les tubes à RT pendant 30 min dans un agitateur orbital.</li>
	<li>Laver les cellules une fois avec du PBS et retirer le liquide surnageant des tubes complètement, laissant seulement le culot.<ol>
<li>Ajouter 100 µL d’anticorps secondaire dilué (chèvre anti lapin FITC conjugué à une concentration de 1/500) dans du PBS pour le culot cellulaire et doucement triturer pour mélanger. Incuber les tubes à RT pendant 30 min sur un agitateur dans le noir.</li>
		<li>Laver les échantillons 2 x avec PBS et lavage puis une fois avec le tampon du flux. Centrifuger et remettre en suspension les cellules dans environ 150 µL de tampon de flux pour analyse cytomètre en flux.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Navarro Quiroz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Signaling+in+Neuronal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Cell Signaling in Neuronal Stem Cells.</a> Cells. 7 (7), (2018).</li>
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<li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+Cytometry+Protocols+for+Surface+and+Intracellular+Antigen+Analyses+of+Neural+Cell+Types%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), 52241(2014).</li>
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<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrocyte+differentiation+from+human+neural+stem+cells%3A+A+novel+role+for+c-Src%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Oligodendrocyte differentiation from human neural stem cells: A novel role for c-Src.</a> Neurochemistry International. 120, 21-32 (2018).</li>
<li>Palanisamy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxytocin+alters+cell+fate+selection+of+rat+neural+progenitor+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Oxytocin alters cell fate selection of rat neural progenitor cells in vitro.</a> PLoS ONE. 13 (1), e0191160(2018).</li>
<li>Llewellyn-Smith, I. J., Basbaum, A. I., Braz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+dynamic+synaptic+reorganization+after+GABAergic+precursor+cell+transplantation+into+adult+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Long-term, dynamic synaptic reorganization after GABAergic precursor cell transplantation into adult mouse spinal cord.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (3), 480-495 (2018).</li>
<li>Precious, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FoxP1+marks+medium+spiny+neurons+from+precursors+to+maturity+and+is+required+for+their+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">FoxP1 marks medium spiny neurons from precursors to maturity and is required for their differentiation.</a> Experimental Neurology. 282, 9-18 (2016).</li>
</ol>

Aucun conflit d’intérêts ne déclarés.

À l’aide d’une source de cellules souches neuronales est très important pour les chercheurs en neurosciences. Des cellules souches neurales pourraient être récoltés de différentes zones du cerveau de l’embryon et qu’ils peuvent générer des types spécifiques de neurones et les cellules gliales. Il existe plusieurs méthodes pour l’induction de la différenciation des cellules souches neurales de les amener à générer des neurones matures et les cellules gliales. Il y a de nombreux rapports indiquant que dans des conditions d...

Des cellules souches neurales (CNS) résident dans différentes régions du cerveau adulte et de l’embryon, et ils ont tendance à générer différents types de neurones et cellules gliales1. Les zones sous-ventriculaire dans le cerveau des mammifères adultes2 et éminence ganglionnaire dans le cerveau de l’embryon sont NSC riches régions3. Dans le développement du cerveau, l’éminence ganglionnaire fournit la plupart des interneurones corticaux et particulièrement GABAergique interneurones3. Il y a aussi des méthodes moins invasives pour la production de cellules souches neurales de cellules souches embryonnaires (CSE) ou utiliser des cellules souches pluripotentes induites (CISP) qui réduisent la demande de l’animal. Malgré le fait que générer des CNS d’ESCs ou CISP est possible4,5, il a ses avantages et inconvénients par rapport à l’isolement des cellules souches neurales de l’adulte ou l’embryon cerveau6,7, 8. Les protocoles pour induire la différenciation des ces et CISP vers phénotypes neurones sont toujours temps et coût de consommation et le taux de succès (70-80 % Nestin cellules positives)5 est plus faible comparativement à isolement direct des CNS le cerveau animal ( plus de 99 % Nestin cellules positives)9. En outre, les cellules souches perdent leur tendance de stabilité et de la différenciation génétique après plusieurs passages10,11. Même s’il existe d’autres nouveaux rapports sur la conversion directe de cellules somatiques en CNS, ces cellules sont génétiquement modifiées et ne sont pas facilement accessibles dans chaque laboratoire12. Par conséquent, il y a toujours une grande demande pour isoler des cellules souches neurales dans le cerveau de l’animal ; Il est possible de réduire la quantité d’utilisation de l’animale en améliorant les techniques chirurgicales. En réduisant le temps chirurgical et en améliorant les techniques, il est possible de garder les cellules des dommages et d’obtenir le taux le plus élevé des CNS de chaque animal.
Ici, nous présentons une technique simplifiée et reproductible pour l’isolement de cellules souches neuronales du cerveau de souris E13 embryons.

<table><tbody><tr><td>Tubes de 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Adson Pince, 12 cm, Droite</td><td>WPI</td><td>14226</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F0291</td><td></td></tr><tr><td>albumine sérique bovine (BSA)</td><td>Sigma</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>plat 10cm&nbsp ;</td><td>Pince</td><td>à</td> pansement Falcon 353003<td></td></tr><tr><td>, 12,5 cm, Pince à épiler droite</td><td>WPI</td><td>15908</td><td></td></tr><tr><td>Dumont, 11 cm, Droite</td><td>WPI</td><td>500342</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>100983&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Glutamate</td><td>Sigma&nbsp ;</td><td>G3291</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>chèvre anti lapin FITC anticorps secondaire conjugué</td><td>Sigma</td><td>AP307F</td><td></td></tr><tr><td>sérum de chèvre</td><td>Sigma</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Héparine&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>h3149</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>83264</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>90909C</td><td></td></tr><tr><td>seringue d’insuline avec aiguille de calibre 25-27&nbsp ;</td><td>SUPA médical</td><td>A1SNL127</td><td></td></tr><tr><td>laminine</td><td>sigma&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Sigma</td><td>M2279</td><td></td></tr><tr><td>N2 supplément</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>NB moyen</td><td>Gibco</td><td>21103-31</td><td></td></tr><tr><td>Acide aminé non essentiel (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>PBS sans Ca et Mg</td><td>Gibco</td><td>20012050</td><td></td></tr><tr><td>Péniciline/ Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>5140122</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-ornithine</td><td>Sigma</td><td>&nbsp ; P4957</td><td></td></tr><tr><td>lapin anti souris bêta tubuline-III anticorps</td><td>Sigma</td><td>T2200</td><td></td></tr><tr><td>lapin anti souris GFAP anticorps</td><td>Sigma</td><td>G4546</td><td></td></tr><tr><td>lapin anti souris Nestin anticorps</td><td>Sigma</td><td>N5413</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Manche #3</td><td>WPI</td><td>500236</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux courbe</td><td>WPI</td><td>14396</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux pointus droits</td><td>WPI</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de la trypsine de soja</td><td>Roche</td><td>10109886001&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Fioles de culture tissulaire, T25</td><td>BD</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Fioles de culture tissulaire, T75</td><td>BD</td><td>353024</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux Vannas,&nbsp ; 8 cm, Droits&nbsp ;</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>&beta ;-mercaptoéthanol</td><td>Sigma</td><td>M6250</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement et culture des embryons de souris des cellules souches neurales

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Les cellules souches neurales (CNS) sont multipotentes et peut donner lieu à trois types cellulaires majeurs du système nerveux central (CNS). La culture in vitro et l’expansion des CNS fournissent une source appropriée de cellules pour les chercheurs en neurosciences étudier la fonction des neurones et des cellules gliales ainsi que leurs interactions. Il existe plusieurs techniques signalés pour isoler des cellules souches neurales du cerveau mammifère adulte ou embryonnaire. Pendant l’opération microchirurgie pour isoler des CNS de différentes régions du SNC embryonnaire, il est très important réduire les dommages au cerveau des cellules pour obtenir le taux élevé de cellules souches vivantes et extensibles. Une technique possible pour la réduction du stress au cours de l’isolement de ces cellules du cerveau d’embryon de souris est la réduction du temps chirurgical. Ici, nous démontrons une technique mise au point pour l’isolement rapide de ces cellules de l’éminence E13 souris embryon ganglionnaire. Procédures chirurgicales incluent récolte d’embryons de souris13 E de l’utérus, coupant la fontanelle frontale de l’embryon avec une pointe d’aiguille tordue, extraire le cerveau du crâne, microdissection du cerveau isolé de récolter l’éminence ganglionnaire, dissociation du tissu récolté dans le milieu du NSC pour obtenir une suspension de cellules du même et enfin électrodéposition de cellules en suspension pour générer des neurospheres.

Micro-Dissection, l’isolement de cellules et Culture Neurosphère. Ici, nous avons présenté une méthode rapide et efficace pour la souris E13 cerveau microchirurgie et isolement des cellules souches neurales. Cet article montre qu’il est possible d’enlever tout le cerveau d’un crâne d’embryon de souris E13 à travers une rupture fine à fontanelle frontale. Avec cette méthode, le cerveau subit moins de dégâts et il est possible d’isoler des cellules pro...

Ici, nous présentons une nouvelle technique microchirurgicale pour isoler des cellules souches neurales de l’éminence E13 souris embryon ganglionnaire.

Isolement et Culture des embryons de souris des cellules souches neurales

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

L’objectif de ce protocole vidéo est d’établir une source et un protocole efficace pour l’isolement et la culture des cellules souches neurales de souris embryonnaires. Bonjour, je suis Maryam Sadeghi-Zadeh. Je suis étudiant à la maîtrise en biologie cellulaire et moléculaire à l’Institut Royan.Aujourd’hui, mon collègue et moi voulons vous montrer comment récolter les cellules souches neurales à partir de 13 éminence ganglionnaires de souris embryonnaires. Bonjour, je suis Bahareh Alizadeh-Shoorjestan. Je suis étudiant à la maîtrise en biologie cellulaire et moléculaire au département de cellules souches de l’Institut Royan pour la biotechnologie.Bonjour, je suis Reza Dehghani-Varnamkhasti. J’étudie aussi la biologie cellulaire et moléculaire à l’Institut Royan. Les interventions chirurgicales comprennent la récolte de chaque 13 embryons de souris de l’utérus.Couper l’avant du fontanel de l’embryon avec une pointe d’aiguille pliée extrayant le cerveau du crâne. Micro-dissection du cerveau isolé pour récolter l’éminence ganglionnaire. Dissociation du tissu récolté dans un milieu de cellules souches neurales pour obtenir une suspension cellulaire unique.Et enfin, placage des cellules

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Cette vidéo décrit la méthode utilisée pour l'isolement de neuroprecursors du cortex en développement de souris embryonnaires. La procédure pour la suppression des embryons dans l'utérus, la dissection du tissu cortical, et digérant le cortex cérébral est démontré isolés.

Culture de la souris de neurones précurseurs de cellules souches

Ce protocole vidéo démontre l'application du test Neurosphère pour l'isolement et l'expansion des cellules souches neurales de la éminences ganglionnaires du jour embryonnaire 14 cerveau de souris.

Établir embryonnaires de la souris culture de cellules souches neurales utilisant le test Neurosphère

Une autre façon d'isoler les motoneurones embryonnaires de souris à partir de la moelle épinière est décrite. La méthode prend en compte le fait que la lectine peuvent se lier au nerf affinité p75NTR bas du récepteur du facteur de croissance. Cette lectine preplating basé permet une purification similaire à celle d'un anticorps spécifique contre le p75NTR.

Lectine à base d&#39;isolement et de la culture des motoneurones embryonnaires de la souris

Isolement de la crête neurale embryonnaire à partir du tube neural facilite l'utilisation...

Isolement et culture de cellules de crêtes neurales de tube neural embryonnaire murin

La vidéo montre le processus d'isolement et de culture de cellules souches neurales de la zone sous-calleuse du cerveau de la souris. Il s’agit de disséquer des tissus, de les dissocier enzymatiquement et de les cultiver avec des facteurs de différenciation pour qu’ils se transforment en cellules neurales matures.

Isolement et culture de cellules souches neurales adultes de la zone sous-calleuse de souris

Cette vidéo présente une méthode de génération in vitro de cellules progénitrices neurales (NPC) à partir de cellules souches embryonnaires de souris (mESC). Les CSEm sont cultivées en suspension pour former des corps embryoïdes (EB), qui sont ensuite guidés pour se différencier en NPC via un traitement à l’acide rétinoïque dans une culture adhérente.

Technique de génération de cellules progénitrices neurales à partir de cellules souches embryonnaires de souris

Cette vidéo présente une méthode permettant d’isoler les cellules souches du cervelet postnatal de la souris et de les différencier en cellules neurales. Les cellules souches de la suspension cellulaire isolée sont purifiées à l’aide de billes magnétiques enrobées d’anticorps et sont cultivées pour former des neurosphères. Les neurosphères sont ensuite maintenues dans un milieu de différenciation pour générer des cellules neurales.

Isolement de cellules souches du cervelet de souris postnatal et différenciation en cellules neurales

Nous décrivons ici un protocole détaillé pour la production simultanée de cultures de cellules de précurseur de neurones, soit comme des monocouches ou des neurosphères adhérentes, à partir de la zone sous-ventriculaire et le gyrus denté de souris individuels adultes.

Une souris, deux cultures: Isolement et culture des cellules souches adultes de neurones à partir des deux Neurogenic Zones de souris individuelle

Ce protocole décrit en détail la méthode de génération de progéniteurs neuronaux à partir de cellules souches embryonnaires à l’aide d’une méthode monocouche sans sérum. Ces progéniteurs peuvent être utilisés pour dériver des types de cellules neurales matures ou pour étudier le processus de spécification neuronale et se prêtent à la mise à l’échelle de formats multipuits pour le criblage de composés.

Différenciation neurale des souris de cellules souches embryonnaires dans le sérum sans culture monocouche

La mise en place de systèmes de culture pour l’expansion des cellules souches neurales adultes (CSNa) permet l’examen et l’application des CSNa à des fins thérapeutiques. La zone sous-calleuse (SCZ) a récemment été reconnue comme une nouvelle région formant des neuroblastes chez les souris adultes. Ici, les méthodes d’isolement, d’expansion et de différenciation des SCZ-aNSC sont décrites.

Isolement et culture des adultes cellules souches neurales de la Subcallosal Zone Souris

Découvrez une technique microchirurgicale pour isoler et cultiver des cellules souches neurales à partir de l'éminence ganglionnaire d'embryons de souris E13. Ce protocole fiable améliore la compréhension du développement neural et de la biologie des cellules souches.

Isolement et Culture des embryons de souris des cellules souches neurales

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