Intra-épiploïques Islet Transplantation utilisant h-épiploïques remplissage de matrice îlot (hOMING)

Cette méthode peut aider à répondre à la question clé dans le domaine de la thérapie cellulaire, par exemple, la transplantation d’îlots peut-elle être optimisée par la technique chirurgicale hOMING ? Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est simple, rapide et thonble, et la validation des biomatériaux est également très rapide. La démonstration visuelle du placement de l’aiguille est essentielle pour assurer une injection appropriée de greffe à l’intérieur de l’omentum, car une aiguille mal placée peut entraîner une fuite d’îlots.

Pour induire le diabète, injectez 75 milligrammes par kilogramme de streptozotocine intraperitoneally dans chaque rat destinataire de Lewis de six semaines, 150 à 190 grammes, et vérifiez l’état de diabète par mesure quotidienne de glucose sanguin pendant les quatre premiers jours après injection. Lorsque les rats présentent une glycémie de plus de deux grammes par litre, injecter subcutanément six unités d’insuline à action prolongée par jour pour prévenir les complications du diabète et la perte de poids. Inclure les rats dans la cohorte expérimentale lorsque deux mesures du taux de glucose sanguin veineuse de la queue sont supérieures à quatre à cinq grammes par litre pendant deux jours consécutifs, avec un taux de C-peptide inférieur à 200 picomolaires.

Pour l’implantation de granulés, confirmer un manque de réponse au pincement des orteils chez l’animal diabétique anesthésié receveur et nettoyer le cou avec de l’iode povidone. Raser la zone d’implantation et nettoyer la peau exposée avec de l’iode povidone supplémentaire. Après trois minutes, stériliser un 1/2 granulés d’insuline dans une solution d’iode povidone d’un à cinq povidone et utiliser un trocar de calibre 16 pour percer la peau exposée du cou.

Ensuite, utilisez le guide et le stylet pour insérer les granulés et suturer l’ouverture avec un seul point. Nettoyez le point avec plus d’iode de povidone et laissez le rat récupérer dans une cage avec la surveillance et la nourriture pour éviter l’hypoglycémie. Pour mesurer l’efficacité des granulés, mesurez la diminution de glycémie chaque semaine pendant un mois après implantation, y compris les rats dans la cohorte expérimentale quand une mesure du niveau de C-peptide de sang de veine de queue est maintenue sous 200 picomolar à un mois après implantation de granule d’insuline.

Pour le remplissage intra-omental d’îlot de matrice, comptez le nombre d’îlots isolés des rats donneurs sains dans des équivalents d’îlot, et préparez un équivalent d’îlot de 7,660 par kilogramme de destinataire dans les tubes individuels de 1,5 millilitre. Laver chaque aliquot avec 500 microlitres de milieu CMRL sans sérum bovin fœtal et resuspendre les granulés d’îlots dans 150 microlitres de transporteur d’hydrogel alginate fraîchement préparé par tube avec un mélange minutieux avant de placer les tubes sur la glace. Ensuite, chargez des seringues d’un millilitre équipées d’une aiguille atraumatique de calibre 21 avec 150 microlitres d’alginate vide sans volume mort, suivies de 150 microlitres d’alginate plus îlots.

Placez les seringues sur la glace et préparez le cou du premier animal receveur comme il vient de le démontrer. Utilisez un scalpel pour faire une incision sur l’ancienne plaie et utilisez des forceps pour enlever les granulés. Fermez le point avec un ou deux points de suture simples et placez le rat dans la position supine.

Stériliser la zone péritonéale et se raser. Utilisez un scalpel pour créer une laparotomie d’un 1/2 centimètre juste sous le sternum. Placez la gaze stérilisée humide autour de l’incision et identifiez le tampon de graisse omental situé à côté de l’estomac.

Utilisez des forceps pour tirer doucement le tampon de graisse hors de la cavité péritonéale, en l’étalant sur la gaze. Hydratez bien le tissu omental avec deux millilitres de solution saline stérile préchauffée de 37 degrés Celsius et, tenant le tissu avec de petits forceps incurvés dans une main, pénètrez le bord omental entre les couches omentales avec l’aiguille d’une seringue chargée d’îlots de l’autre. Lors de l’insertion de l’aiguille, assurez-vous qu’elle est entourée d’une fine couche de tissu omental avant de commencer l’injection.

Insérez l’aiguille entièrement et lentement commencer à injecter la préparation de l’îlot tout en rétractant l’aiguille pour permettre aux îlots injectés d’être répartis dans tout le tissu. Pendant l’injection, rétractez l’aiguille au bord des tissus, arrêtant l’injection lorsque l’aiguille est presque sortie. Ensuite, attendez cinq secondes avant de commencer une nouvelle injection à l’endroit suivant.

Et injecter encore trois à quatre aliquots comme démontré. Lorsque tout l’hydrogel a été distribué, retirez soigneusement l’aiguille pour éviter la perte des îlots injectés, en vérifiant que les îlots ne sont pas regroupés dans la seringue à la fin de l’injection. Lorsque tous les îlots ont été livrés, hydrater l’omentum et la paroi de la laparotomie avant de retourner soigneusement le tissu omental à la cavité abdominale.

Injecter deux millilitres de solution saline stérile préchauffée dans la cavité abdominale pour réhydrater le rat. Ensuite, fermez la paroi musculaire avec une suture continue de fil et cousez la couche cutanée avec le point de point simple. Après un à deux mois de suivi métabolique, ouvrez l’incision chirurgicale de chaque receveur comme démontré, et utilisez des forceps pour étendre soigneusement l’omenta sur des morceaux salins trempés de gaze disposés à côté des incisions.

À partir de la région adhérente à la queue pancréatique, utiliser des ciseaux pour exciser le tissu omental et injecter deux millilitres de solution saline préchauffée avant de fermer chaque animal comme démontré. Fixer l’omenta récupéré dans 4%paraformaldéhyde avant d’intégrer dans la paraffine. Ensuite, acquérir des sections de quatre micromètres d’épaisseur des tissus sur une microtome et appliquer la tache d’hématoxyline et d’éosine pour l’évaluation morphologique des greffes.

Des perles de Dextran transplantées utilisant la méthode hOMING comme démontré ont été fréquemment observées près des vaisseaux sanguins et ont été bien implantées dans le tissu adipeux. Dans cette étude isogénique représentative, la glycémie a d’abord été contrôlée par l’implantation d’une 1/2 pastilles d’insuline comme démontré, puis par des îlots implantés comme démontré par une glycémie d’environ deux grammes par litre et un C-peptidemia de plus de 500 picomolaires chez les animaux destinataires. En outre, l’analyse histologique de l’omenta explanté a indiqué les îlots fortement revascularized, probablement en raison de leur proximité aux vaisseaux sanguins.

Après son développement, cette technique a ouvert la voie à des chercheurs dans les domaines de la thérapie cellulaire pour explorer le microenvironnement cellulaire bioingénieur dans les modèles précliniques.