Collection rapide de volatiles de parfum floral utilisant une technique de collection volatile d'espace de tête pour l'échantillonnage thermique de desorption de GC-MS

Ici, nous présentons un protocole pour recueillir les volatiles de parfum floral des fleurs en fleurs, utilisant une procédure d'échantillonnage non destructive.

Parce que le parfum floral est essentiel pour attirer les pollinisateurs, cette méthode pourrait être utilisée pour mieux comprendre ou même améliorer la pollinisation des espèces de fleurs indigènes. Avec cette méthode, les volatiles parfum sont échantillonnés à l’aide d’une méthode non destructive avec une machine facile à transporter. Cette méthodologie utilise un échantillonnage rapide, réduisant le temps d’échantillonnage de deux à trois heures à 10 minutes.

Ces méthodes permettent d’échantillonner rapidement les substances volatiles produites par les fleurs et pourraient être utilisées pour échantillonner les substances volatiles provenant d’autres spécimens, comme les phéromones d’insectes. Pour commencer, choisissez une fleur qui n’est pas ouverte au départ, et marquez la fleur avec du ruban indicateur pour assurer un échantillonnage répété de la même fleur. Faire bouillir les sacs du four dans l’eau pendant 30 minutes pour éliminer les composés plastiques résiduels.

Pour sécher, cuire au four à 175 degrés Celsius pendant 60 minutes. Une fois les sacs séchés, ajouter une union de cloisons en polypropylène à chaque coin de l’extrémité fermée des sacs du four. Rincer tous les sacs et tubes avec 75% d’éthanol et laisser sécher à l’air libre.

Ensuite, cuire les sacs et les tubes dans un four à feu doux, entre 74 et 85 degrés Celsius pendant 30 minutes. Selon la durée du temps de floraison, attendre au moins 24 heures après la floraison pour recueillir l’échantillon. Couvrir la fleur sélectionnée d’un sac allant au four cuit au four.

Cinch le sac ensemble étroitement avec une cravate zippée en plastique sous la fleur pour empêcher l’écoulement d’air indésirable dans le sac. Portant des gants stériles en néoprène, fixez un tube de la sortie d’air de l’équipement de collecte et connectez-le à l’un des syndicats de cloisons sur le sac de four. Sur l’autre syndicat de cloisons, fixez une cartouche de filtre en verre contenant de l’adsorbent poreux en polymère.

Fixez un deuxième tube à l’équipement de collecte sur l’entrée sous vide. Connectez l’extrémité du deuxième tube sur la cartouche de filtre de collecte volatile en verre. Allumez à la fois la pompe à air et le vide en même temps et réglez à 0,05 litres par minute.

L’espace de tête autour de la fleur est rempli d’air mais pas surgonflé. Le système tire l’air du sac à travers le filtre, piégeant les volatiles floraux. Laissez la machine fonctionner pendant 10 minutes.

Et puis éteignez à la fois la pompe à air et le vide. Démonter les tubes et la cartouche de filtre en verre. Placez le filtre dans un flacon de verre et vissez sur un bouchon.

Sceller le flacon avec du ruban de fil ptfe. Conserver l’échantillon dans un congélateur jusqu’à l’analyse du SGMC. Répétez ce processus avec un sac de four vide pour recueillir un échantillon d’air blanc comme un contrôle.

Pour des réplications cohérentes des mêmes substances volatiles, répétez la collecte d’échantillons à la même heure chaque jour, car certaines fleurs produisent des niveaux de parfum variables au cours de la journée. Tout d’abord, retirez la cartouche de filtre en verre du congélateur et placez-la dans un GCMS dans le port d’injection. Pour libérer les volatiles de l’espace de tête recueillis sur l’adsorbent poreux polymère de l’adsorbent, chauffer le piège de collecte thermique à 220 degrés Celsius pendant huit minutes dans un flux de gaz hélium à 1,2 millilitres par minute.

Comparez les chromatogrammes des substances volatiles recueillies pour identifier les pics récidivants courants. Après avoir identifié les pics volatils, utilisez Pherobase pour déterminer s’ils ont déjà été décrits dans les parfums floraux. Dans cette étude, les données représentatives du GCMS sont présentées sous forme de chromatogramme.

Les pics entre 10 et 15 minutes sont des volatiles floraux. Les substances volatiles recueillies ont été référencées à Pherobase pour déterminer si elles ont déjà été décrites dans un parfum floral. Par exemple, le composé numéro 21, avec un temps de rétention de 10.311 a été identifié comme benzaldéhyde.

Benzaldéhyde est consultable sur Pherobase avec une liste de toutes les espèces de fleurs, organisée par la famille des plantes, à partir de laquelle ce composé parfum a été identifié. Les espèces d’orchidées sont montrées ici, à partir de laquelle le benzaldéhyde a été déterminé pour être présent dans le parfum floral. Les méthodes précédentes presédait de deux à quatre heures par échantillon.

L’utilisation d’un solvant pour retirer l’échantillon du filtre entraînerait un pic de solvant sur le GCMS. Cela cacherait les composés de zéro à 3,5 minutes. Cette méthode permet de voir tous les composés.