Name: Détection d’immunoglobuline Anti-aquaporin-4 G de sérum humain par Cell-based Assay (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: Découvrez le test cellulaire pour détecter les anticorps anti-aquaporine-4 IgG dans le sérum humain. Cette méthode sensible et spécifique facilite le diagnostic des troubles du spectre de la neuromyélite optique.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Les auteurs sont reconnaissants de l’appui des subventions de la Fondation nationale des sciences de Chine (no 31600820), The Health et Commission planification familiale de la Province du Jilin (no 2016Q036) et la Science et technologie planification projet de la Province du Jilin (no 20180520110JH).

Cette procédure a été approuvée par le Comité d’éthique de l’Université de premier hôpital de la province du Jilin et s’est déroulée sur environ 1 500 sujets.
1. patient Enrollment et prélèvement d’échantillons de sang
<ol><li>Appliquer le laboratoire de détection du sérum Qu'igg anti-AQP4 pour les patients de la clinique avec les plaintes en chef et les symptômes énuméré ci-dessous. Effectuer les examens physiques aussi bien. Névrite optique : les Patients souffrent de déficits visuels, tels que la perte du champ visuel et la réduction de l’acuité visuelle. Myélite aiguë : les Patients peuvent présenter des déficits sensoriels, paralysie et dysfonctionnement autonomique. Syndrome de postrema de secteur : les Patients peuvent avoir des symptômes de hoquet inexpliquée, des nausées ou vomissements. Syndrome de tronc cérébral aigu : lésions du tronc cérébral peuvent entraîner différents symptômes et signes physiques selon la localisation des lésions. Narcolepsie symptomatique ou syndrome clinique diencéphale aigu avec des lésions de MRI diencéphale NMOSD-typiques. Syndrome cérébral symptomatique avec des lésions cérébrales NMOSD-typique. Remarque : Selon les critères diagnostiques du consensus international pour NMOSD5, un diagnostic de NMOSD peut être fait si le patient est sérum anti-AQP4 IgG positif et a au moins une des caractéristiques cliniques fondamentales mentionnées ci-dessus. Cependant, nous ne recommandons pas les tests d’IgG anti-AQP4 chez les patients avec une névrite optique uniquement.</li>
	<li>
Prélèvement d’échantillons de sang Remarque : les Patients ne doivent pas être jeûne.<ol>
<li>Dessiner 2-3 mL de sang veineux dans un tube de prélèvement sanguin sous vide 4 mL.</li>
		<li>Laisser le sérum à coaguler pendant 30 min à température ambiante (RT). Remarque : Coagulation prolongé peut augmenter les niveaux de sérum due à une fuite des plaquettes.</li>
		<li>Centrifuger à 2100 x g pendant 5 min. transvaser avec soin le sérum dans un nouveau tube.</li>
		<li>Analyser le sérum immédiatement ou la partie aliquote et conserver à -20 ou -80 ° C. Remarque : Stockage à-20 ° C est pour le stockage des mois, tandis que-80 ° C est pour le stockage des années.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. détection des anticorps anti-AQP4
Mise en garde : Échantillons de patients et des réactifs utilisés doivent envisager des matières infectieuses. Réactifs contenant de l’azide de sodium dans le kit sont toxiques. Un diagramme du protocole est fourni à la Figure 1.
<ol><li>
Préparation
	<ol>
<li>Faire le kit RT avant utilisation. NOTE : Conserver le kit 2-8 ° c.</li>
		<li>Préparer au moins 200 mL de tampon de lavage PBS contenant 0,2 % Tween 20. Verser 100 mL de tampon de lavage dans un bécher de 500 mL.</li>
		<li>Diluer le sérum échantillons x 10 avec tampon de lavage. Préparer des témoins positifs et négatifs selon les instructions du distributeur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubation de l’échantillon
	<ol>
<li>Ajouter 30 µL des échantillons préalablement dilués, témoin positif ou contrôle négatif dans les champs de la réaction du bac à réactif (Figure 2). Remarque : Éviter les bulles d’air.</li>
		<li>Retirez le capot de protection sur les diapositives de la biopuce. Remarque : Ne pas toucher les biopuces pour éviter le détachement et la contamination des cellules fixes. Tenir la lame-by-side avant de retirer le couvercle.</li>
		<li>S’applique à la diapositive biopuce à la barre d’état réactif (Figure 2). Commencer une période d’incubation de 30 min à température ambiante. Remarque : Chaque échantillon doit être une gouttelette individuel relié à la biopuce correspondante sans mélange avec d’autres gouttelettes.</li>
		<li>Rincer doucement la lame biopuce une fois avec le tampon de lavage. Plonger la lame de biopuces dans le bécher de 500 mL, rempli de 100 mL de tampon de lavage pendant au moins 5 min Place le bécher sur un agitateur si possible.</li>
		<li>Retirez la lame de biopuces de la mémoire tampon de lavage. Soigneusement essuyer le tampon de lavage résiduelle à l’extérieur les champs de réaction avec du papier absorbant. Exposer la diapositive biopuce à l’air libre pendant 1-2 min évaporer le tampon de lavage résiduelle sur la zone réactive. Remarque : Ne pas sécher les champs de la réaction. Ne pas toucher les biopuces avec du papier essuie-tout.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubation de l’anticorps secondaire
	<ol>
<li>Préparer la solution d’anticorps secondaire conformément aux instructions du distributeur.</li>
		<li>Ajouter 25 µL d’immunofluorescence secondaire vers les champs de la réaction d’un plateau propre.</li>
		<li>S’applique à la diapositive de biopuces pour le bac à réactif chargé avec l’anticorps secondaire. Incuber 30 min à température ambiante.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Montage
	<ol>
<li>Versez le tampon de lavage, ajouter 100 mL de tampon de lavage fraîche dans le bol. Répéter le lavage comme décrit aux points 2.2.4 et 2.2.5.</li>
		<li>Ajouter avec précaution le milieu d’inclusion aux champs réaction sur une lame de biopuces (un pour chaque zone réactive). Sceller la diapositive biopuce avec un morceau de la lamelle couvre-objet. Éviter les bulles d’air.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Détection par fluorescence
	<ol>
<li>Allumez la lampe fluorescente de microscope et préchauffer pendant 15 min. choisir un filtre à 488 nm.</li>
		<li>Logiciel de photographie ouvert. Prendre des photos de régions transfectées et celllulaire de tous les champs de la réaction avec des grossissements différents. Tout d’abord, prenez une photo avec un grossissement de x 4 pour un aperçu, puis prendre des photos plus avec 10 x et 20 x grossissements. Remarque : Le protocole détaillé est indiqué dans le tableau 1. Interprétation des résultats est discutée dans la section résultats représentatifs.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. le diagnostic des Patients
<ol><li>Si le patient est sérum anti-AQP4 IgG positif et montre au moins une caractéristique clinique de noyau de NMOSD (voir la section « discussion »), diagnostiquer les patients atteints de NMSOD5. Toutefois, si le patient est anti-AQP4 IgG négatif, un diagnostic de NMOSD ne peut pas être exclu.</li>
</ol>

<ol><li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 2 (4), 110(2015).</li>
<li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li>
<li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22in+vitro.Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311(2016).</li>
<li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li>
<li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li>
<li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li>
<li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay%3A+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li>
<li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11(2014).</li>
<li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica%3A+re-testing+study+in+a+large+population+from+China%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li>
<li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica%3A+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185(2013).</li>
<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+testing%3A+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129(2014).</li>
<li>Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+CNS+inflammatory+diseases%3A+differentiating+features+of+NMO+and+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li>
<li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF%3A+Guidance+for+physicians%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231(2016).</li>
<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders%3A+frequency%2C+origin%2C+and+diagnostic+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52(2010).</li>
<li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343(2017).</li>
<li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%3A+an+international+update%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li>
<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+encephalomyelitis%3A+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134(2018).</li>
<li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+antibody+disease%3A+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li>
<li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+antibody-positive%2C+benign%2C+unilateral%2C+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322(2017).</li>
<li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab%3A+A+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317(2016).</li>
<li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%3A+A+multicenter+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li>
<li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li>
<li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Nous avons décrit une méthode largement accessible pour détecter les IgG anti-AQP4 dans le sérum humain. IgG anti-AQP4 est étroitement lié au NMOSD, et établir une méthode de détection des IgG anti-AQP4 fiable est essentiel pour le diagnostic clinique de NMOSD. Tout d’abord, les IgG anti-AQP4 est spécifique pour NMOSD. Sclérose en plaques est également une maladie auto-immune du système nerveux central et partage de nombreuses similitudes avec NMOSD12. Cependant, les IgG anti-AQP4 n’est positif en...

Sérum AQP4 IgG est un biomarqueur diagnostique de noyau pour neuromyélite optique du spectre des troubles (NMOSD)1. L’essai sur les cellules (ABC) est une méthode de détection des IgG anti-AQP4 largement utilisé avec grande sensibilité et spécificité. Ici, un protocole détaillé pour ABC est introduit.
AQP4, une protéine de canal de l’eau, doté de six modules transmembranaire et deux domaines hélicoïdes entourant une solution aqueuse de pores2. IgG anti-AQP4 est impliqué dans la pathogénie de le NMOSD par la liaison à la cible AQP4, qui se trouve principalement sur l’endfeet des astrocytes3. Il a été démontré que les IgG anti-AQP4 est positif dans environ deux tiers des patients NMOSD4. Les plus récents critères diagnostiques internationaux pour NMOSD, IgG anti-AQP4 est réputé être un biomarqueur diagnostique de base5. À cet égard, il est crucial d’établir un protocole fiable pour détecter le sérum humain IgG anti-AQP4 et faciliter le diagnostic clinique des NMOSD.
Actuellement, les diverses méthodes de détection d’IgG anti-AQP4 sont disponibles, comme ABC, dosage à base de tissus, immuno enzymatique et l’écoulement cytometry6,7. CBA emploie EU90 cellules, qui sont transfectées avec des AQP4 humaines, pour capturer des IgG anti-AQP4. Les IgG anti-AQP4 capturé est détectée par des anticorps secondaires fluorescents et visualisée par la suite par microscopie. Accumuler des preuves a montré que l’ABC est plus sensible et plus spécifique que les autres de6,méthodes détection IgG anti-AQP47. Selon une méta-analyse, la sensibilité et la spécificité d’ABC se sont avérés être de 76 % et 99 %, qui étaient plus élevés que sur tissus et enzyme-linked immunosorbent assays6. En outre, une comparaison multicentrique des épreuves diagnostiques d’IgG anti-AQP4 a été menée7. Un total de 193 étude sujets de 15 centres de diagnostic européens étaient inscrits7. Quatre méthodes différentes ont été utilisées pour détecter le sérum anti-AQP4 IgG7. Il a été démontré que l’ABC était plus sensible et plus spécifique que les autres méthodes7. AQP4 est placée comme deux isoformes majeurs (M1-AQP4 et AQP4-M23), anti-AQP4 IgG capture cellulaire est transfecté avec AQP4-M1 ou AQP4-M23. Toutefois, quel type de cellule de capture est mieux reste controversée. Une enquête a soutenu AQP4-M1 selon ABC8, tandis que d’autres ont indiqué que AQP4-M23 base ABC est mieux7,9,10. Toutefois, ABC AQP4-M23-basé peut donner des résultats faussement positifs en raison de liaison non-spécifique IgG8. . De Jaïre et al. 11 a signalé qu’il n’y avait aucune différence significative dans les taux de détection des IgG anti-AQP4 entre AQP4 M1 et de la base de AQP4-M23 SABC.
En résumé, sérum anti-AQP4 IgG est un biomarqueur de base pour NMOSD. ABC a plus de spécificité et de sensibilité que les autres méthodes de détection des IgG anti-AQP4. Il demeure controversée s’AQP4-M1 AQP4 M23-base ou ABC est préférable. Dans cet article, un protocole détaillé pour ABC AQP4-M1-basée est décrite, qui peut s’appliquer au diagnostic clinique et d’études de NMOSD.

<table><tbody><tr><td>Anti-aquaporine-4 IIFT</td><td>Euroimmun</td><td>FA 1128-2005-50</td><td>Contient des lames de biopuce recouvertes de cellules AQP4-M1 transfectées et non transfectées EU 90, des IgG humaines marquées à la fluorescéine, un anticorps anti-AQP4 comme témoin positif, un échantillon d’anticorps négatif, du sel pour PBS pH 7,2, Tween 20 et un milieu d’enrobage.</td></tr><tr><td>CellSens Dimension</td><td>OLYMPUS</td><td>N/A</td><td>logiciel de photographie</td></tr><tr><td>Tube activateur de gel et de caillot</td><td>Améliorer</td><td>la 623040202</td> médicale <td>D’une entreprise chinoise locale</td></tr></tbody></table>

détection d’immunoglobuline anti-aquaporin-4 g de sérum humain par cell-based assay

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4), immunoglobuline G (IgG) est le biomarqueur diagnostique de noyau pour les troubles du spectre de neuromyélite optique (NMOSD). L’essai sur les cellules (ABC) est une méthode largement utilisée pour détecter des IgG anti-AQP4 dans le sérum humain avec une spécificité et une sensibilité élevée. En bref, sériques IgG anti-AQP4 est capté par les cellules transfectées AQP4 qui sont fixé sur la biopuce alors détectée par un anticorps secondaire marqué à la fluorescéine. La microscopie de fluorescence est utilisée pour visualiser la fluorescence, et l’intensité de la fluorescence est évaluée au moins deux des cliniciens expérimentés. Un diagnostic définitif de NMOSD peut être pris en fonction sur la combinaison des résultats de détection IgG anti-AQP4, manifestations cliniques et neuroradiologiques conclusions. Selon des études antérieures, ABC est plus sensible et plus spécifique que les autres méthodes de détection des IgG anti-AQP4, et il peut être appliqué à la fois le diagnostic clinique et les études de NMOSD. La méthode a des limites ; par exemple, il manque encore l’échelle internationale pour évaluer les titres d’IgG sériques anti-AQP4. Ici, un protocole détaillé pour la détection de IgG anti-AQP4 sérum humain à l’aide d’ABC est décrite.

En utilisant la procédure décrite ici, IgG spécifiques anti-AQP4 dans le sérum est détectable. Au cours de la procédure, les échantillons préalablement dilués, un témoin positif et un témoin négatif ont été ajoutés aux champs de réaction, qui contiennent des zones transfectées et celllulaire (Figure 2). Fluorescence du contrôle négatif dans une zone transfectée indiqué principalement la liaison non spécifique de l’anticorps secondaire aux cellules transfectée...

Essai sur les cellules est une méthode largement utilisée pour détecter les immunoglobulines de sérum anti-aquaporin-4 G. Cette méthode pourrait être appliquée au diagnostic clinique et les recherches scientifiques de neuromyélite optique spectre troubles.

Détection d’immunoglobuline Anti-aquaporin-4 G de sérum humain par Cell-based Assay

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

Selon les critères diagnostiques internationaux récents pour des désordres de spectre d’optica de neuromyélite, l’IgG d’anti-AQP4 est considéré comme biomarqueur diagnostique de noyau. La détection d’IgG anti-AQP4 par essai cellulaire peut faciliter le diagnostic clinique. Ainsi, l’analyse cellulaire est plus sensible et spécifique que d’autres méthodes de détection.Et il peut être appliqué à la fois au diagnostic clinique et aux études scientifiques. Tout d’abord, apportez les échantillons de sérum du patient, la glissière de biopuce, la poudre de PBS, et le TWEEN 20 du kit frigorifique d’analyse à base de cellules à la température ambiante. Ensuite, préparez plus de 200 millilitres de tampon de lavage PBS contenant 0,2 pour cent de TWEEN 20 pour chaque diapositive de biopuce.Utilisez le tampon de lavage pour effectuer 10 dilutions périodiques de chaque échantillon de sérum. Préparez des contrôles positifs et négatifs selon les instructions du fabricant. Ajouter 30 microlitres de dilutions en série 10 fois de l’échantillon, le contrôle positif et le contrôle négatif à cinq champs de réaction individuels sur le plateau de réaccage.Tenez la glissière de biopuce par ses glissières et retirez son couvercle protecteur sans toucher ses champs de réaction. Placez la lame sur le plateau du reagent et incuber la configuration à température ambiante pendant 30 minutes. Rincez doucement la diapositive de biopuce avec le tampon de lavage.Plongez-le ensuite dans un bécher de 500 millilitres rempli de 100 millilitres du tampon de lavage, et laissez-le à la température ambiante pendant 10 minutes. Sortez la diapositive de biopuce du tampon de lavage. Utilisez une serviette en papier pour essuyer soigneusement tout tampon restant de l’extérieur des champs de réaction.Laisser sécher à l’air libre pendant une à deux minutes. Dans la pièce sombre, ajouter 25 microlitres d’anticorps secondaires fluorescents à chaque champ de réaction du plateau de reagent. Placez la lame sur le plateau du reagent et incuber la configuration à température ambiante pendant 30 minutes.Rincez doucement la diapositive de biopuce avec le tampon de lavage. Plongez-le ensuite dans un bécher de 500 millilitres rempli de 100 millilitres du tampon de lavage frais, et laissez-le à la température ambiante pendant 10 minutes. Sortez la diapositive de biopuce du tampon de lavage.Utilisez une serviette en papier pour essuyer soigneusement tout tampon restant de l’extérieur des champs de réaction. Laisser sécher à l’air libre pendant une à deux minutes. Ajouter délicatement une goutte du milieu d’intégration à chaque champ de réaction sur la diapositive de la biopuce.Enfin, sceller la diapositive de biopuce avec un verre de couverture tout en évitant les bulles d’air et procéder à l’imagerie. La faible intensité de fluorescence du contrôle négatif observé dans la zone infectée indique la liaison non spécifique de l’anticorps secondaire. La comparaison entre les intensités de fluorescence détectées du contrôle positif dans les zones infectées et non infectées indique la liaison spécifique de l’IgG anti-AQP4 à L’AQP4M1 dans les cellules infectées.Le sérum négatif anti-AQP4 IgG montre des modèles contraignants similaires au contrôle négatif dans les zones infectées et non infectées. Le sérum positif montre des modèles contraignants similaires au contrôle positif dans les zones infectées et non infectées. Les échantillons sont considérés comme anti-AQP4 IgG positif lorsque la fluorescence augmente hétérogènement dans la zone infectée.L’intensité de la fluorescence est corrélée au titer anti-AQP4 IgG dans le sérum. Les échantillons sont considérés comme probablement positifs lorsque seul un petit nombre de cellules dans la zone transfectée présentent des intensités de fluorescence détectables. Un échantillon doit être considéré comme anti-AQP4 IgG négatif lorsque son intensité dans la zone infectée n’est que homogènement plus forte que dans la zone non infectée.Il est essentiel et difficile d’éviter les bulles d’air. Pour éliminer les bulles d’air, utilisez d’abord une pipette pour éviter les bulles d’air dans les gouttelettes. Deuxièmement, lors de l’application de la diapositive biopuce sur le plateau de réaccente, laissez d’abord un côté de la diapositive toucher les gouttelettes, puis niveler la diapositive lentement.En outre, ne touchez pas les champs de réaction tout au long de l’expérience.

human-serum-anti-aquaporin-4-immunoglobulin-g-detection-cell-based

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Cette vidéo démontre la caractérisation par chromatographie liquide de l’interaction hydrophobe des conjugués anticorps-médicament. À l’aide d’une colonne de chromatographie basée sur le ligand butyle, les conjugués anticorps-médicament sont caractérisés par des interactions hydrophobes avec le ligand.

Chromatographie liquide à interaction hydrophobe dépendante du butyle : une technique pour caractériser les conjugués anticorps-médicament basée sur les interactions hydrophobes

Cette vidéo décrit une technique d’immunodosage utilisant des billes magnétiques fluorescentes ou des microsphères couplées à différents antigènes pour détecter simultanément divers isotypes d’anticorps dans un échantillon de sérum. Le test est utile pour comprendre la séroconversion pendant une infection ou après la vaccination.

Dosage immunobille multianalyte : une technique d’immunodosage basée sur le flux pour la détection simultanée de plusieurs sous-types d’anticorps dans un échantillon de sérum humain

La vidéo présente un test cellulaire pour détecter l’immunoglobuline G anti-aquaporine-4 à l’aide d’une biopuce contenant des cellules non transfectées et des cellules transfectées exprimant l’aquaporine-4. Cette méthode a des applications dans le diagnostic des troubles du spectre de la neuromyélite optique, confirmées par une forte fluorescence verte sur la biopuce.

Un test pour détecter l’immunoglobuline G anti-aquaporine-4 sérique

La vidéo fait la démonstration d’un immunodosage sur papier, impliquant des disques de cellulose fonctionnalisés à l’amine réticulés avec du glutaraldéhyde. L’immobilisation covalente des anticorps de capture spécifiques des IgG-Fc, suivie de l’introduction d’immunoglobulines G et d’anticorps de détection conjugués à la peroxydase de raifort, entraîne un changement de couleur confirmant la présence d’immunoglobulines G.

Un immunodosage sur papier pour la détection de l’immunoglobuline G

Au cours des dernières années, des essais à base de cellules vivantes ont été utilisées avec succès pour détecter des anticorps contre les antigènes de surface et de conformation. Ici, nous décrivons une méthode utilisant un écoulement à haut débit cytométrie permettant l'analyse de grandes cohortes de patients. Détection de nouveaux anticorps permettra d'améliorer le diagnostic et le traitement des troubles du système immunitaire à médiation.

Haut-débit cytométrie en flux test cellulaire pour détecter les anticorps de la N-méthyl-D-aspartate Receptor ou récepteur de la dopamine-2 dans le sérum humain

Nous décrivons ici deux dosages pour mesurer l'activation du complément induite par des anticorps contre les globules rouges. L'avantage majeur sur les tests actuels est leur nature quantitative et facile à interpréter.

Les méthodes de détection quantitative d&#39;anticorps induite par l&#39;activation du complément sur les globules rouges

Cet article décrit une méthode de microarray de protéine simple pour profilage immunité humorale à un panel de 7-plex de hautement purifié des antigènes de Clostridium difficile dans les sérums humains. Le protocole peut être prolongé pour la détermination de la production d’anticorps spécifiques dans les préparations d’immunoglobulines par voie intraveineuse polyclonal.

Une analyse de Microarray de protéine pour détermination sérologique de l’Infection à Clostridium difficile anticorps réponses suivantes spécifiques à l’antigène

Nous présentons ici une méthode de cytométrie de flux basé sur la cellule afin de détecter les anticorps neutralisants ou autres facteurs qui interfèrent avec l’absorption cellulaire des thérapies de remplacement enzymatique dans une matrice humaine, comme le liquide céphalo-rachidien (LCR) ou de sérum humain.

Détection des anticorps qui neutralisent l’assimilation de thérapies de remplacement de Enzyme avec un Cell-based Assay

La méthode BSelex pour identifier et récupérer les anticorps individuels spécifiques à l'antigène des cellules mononucléaires périphériques humaines combine la cytométrie du flux avec pcR à cellule unique et le clonage.

Méthode de dépistage à cellule unique pour la sélection et la récupération d'anticorps ayant les spécificités souhaitées des populations enrichies de cellules de la mémoire humaine B

Nous présentons un protocole pour l'utilisation d'un microarray protéique construit en imprimant des antigènes grippaux sur des lames enduites de nitrocellulose pour sonder simultanément le sérum pour plusieurs isotypes d'anticorps contre plus de 250 antigènes de différentes souches virales, permettant de mesurer l'étendue des anticorps sériques entre les sous-types de virus.

Utilisation d'un microréseau d'antigène de la grippe pour mesurer l'étendue des anticorps sériques à travers les sous-types de virus

Découvrez le test cellulaire pour détecter les anticorps anti-aquaporine-4 IgG dans le sérum humain. Cette méthode sensible et spécifique facilite le diagnostic des troubles du spectre de la neuromyélite optique.

Détection d’immunoglobuline Anti-aquaporin-4 G de sérum humain par Cell-based Assay

Explorer plus de vidéos