Name: Culture primaire de cellules Corticosurrénaliennes Rat et tests des fonctions Stéroïdogéniques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 33 s
Description: Apprenez la culture primaire de cellules corticosurrénaliennes de rat pour étudier la stéroïdogenèse et la réponse au stress. Cette méthode permet d'analyser la production d'hormones surrénaliennes in vitro.

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Ce travail a été soutenu par une subvention de la Taiwan National de conseil scientifique (NSC102-2320-B-037-008-MY3) et une subvention de recherche kit de développement National Cheng-Kung University hôpital (NCKUH-10102045).

Toutes les procédures y compris les sujets animaux ont été approuvés par animalier institutionnel et utilisation Comité de Kaohsiung Medical University.
1. marche à suivre
<ol><li>Sacrifier les rats de SD femelle/mâle adulte (8 à 12 semaines) en CO2 euthanasie.</li>
	<li>Appliquer de l’éthanol à 70 % et laissez-le être absorbée par la peau et puis essuyer la peau avec un papier de soie.</li>
	<li>Mettre le rat sur une plaque de plastique propre en décubitus dorsal.</li>
	<li>Soulever la peau avec une pince courbe « externe » à la ligne médiane et effectuer une dissection émoussée en créant une forme de «Y» (du niveau de la cuisse jusqu'à l’angle sous-costal).<ol>
<li>Rincer les ciseaux à l’éthanol à 70 % et, ensuite, couper le muscle, en créant une forme de «Y».</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Trouver la glande surrénale gauche derrière l’estomac. Remarque : la surrénale droite se trouve profondément derrière le foie.<ol>
<li>Utilisez une paire de pinces pour soulever l’estomac ou le foie et isoler les glandes surrénales avec une autre pince courbée.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Après avoir mis les glandes surrénales dans un récipient stérile, retirer délicatement la capsule surrénale avec une pince fine.</li>
	<li>Avec une délicate paire de ciseaux, couper les glandes surrénales en petits morceaux avec un petit peu de Dulbecco sans sérum de l’aigle modifié (DMEM) / F-12 moyen.</li>
	<li>
Préparer trois pipettes Pasteur pore taille différentes et la première pipette Pasteur permet d’aspirer tous les morceaux surrénaliennes dans un tube conique de 50 mL contenant le support avec la collagénase II (~0.5–0.8 mg/mL).
	<ol>
<li>Doucement, broyer les morceaux de tissus sur x 10. Utiliser le reste de la pipette et répétez les étapes ci-dessus jusqu'à ce que toutes les pièces deviennent plus petites. Remarque : La taille des pores différentes des pipettes Pasteur peut être créée en les chauffant avec le feu. La première pipette est la taille d’origine (environ 1 mm), la taille des pores de la seconde est d’environ 0,8 mm et la pipette Pasteur troisième est d’environ 0,5 mm. Au cours de la digestion, les morceaux de surrénales deviendra plus petits. Ainsi, via la procédure mécanique, les glandes surrénales peuvent être digérées plus achevé. Incuber le tube dans un bain d’eau (à 37 ° C) et l’agiter toutes les 5 min, 4 x au total.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Après l’incubation de 20 min, ajouter le milieu frais et cool (sextuple volume ; par exemple, 5 mL de tissu + 25 mL de cool milieu DMEM/F-12) contenant 2,5 % bovine sérum fœtal (SVF) et 5 % de sérum de cheval pour arrêter l’effet de l’enzyme.</li>
	<li>Recueillir les granules cellulaires par centrifugation à 800 x g pendant 10 min.</li>
	<li>Ajouter un volume approprié de moyenne à suspendre les cellules. Remarque : Chaque glande peut faire environ 3 ~ x 105 à ~ 4 x 105 cellules.</li>
	<li>Les cellules souhaitées assiettes ou plats sur plaque avec milieu de culture (mélange 1:1 [v/v] du milieu DMEM et du jambon F-12 additionné de 25 mM HEPES et 1 % pénicilline et de streptomycine) nuit (jour 0) à 37 ° C, dans un environnement humidifié de 95 % air et 5 % de CO2. Remarque : Généralement, nous plaque cellules en plaques 24 puits (quatre glandes/plaque) pour le dosage de la corticostérone et en 35 mm plats (glande un/environ un ou deux plats) pour western blot analyse.</li>
	<li>Se laver soigneusement les cellules 2 x avec sans sérum chaud milieu DMEM/F-12 (jour 1). Remplacer le nouveau milieu de culture.</li>
	<li>Maintenir les cellules à 37 ° C dans un environnement humidifié de 95 % air et 5 % de CO2 jusqu’au jour 3.</li>
</ol>

<ol><li>Frith, C. H. Histology, Adrenal Gland, Mouse. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrith%2C+CH+%22+Endocrine+System.+Monographs+on+Pathology+of+Laboratory+Animals%22"> Endocrine System. Monographs on Pathology of Laboratory Animals</a>. Jones, T. C., Mohr, U., Hunt, R. D., Capen, C. C. , Springer. Berlin, Heidelberg. 8-12 (1983).</li>
<li>Keegan, C. E., Hammer, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+organogenesis+of+the+adrenal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Recent insights into organogenesis of the adrenal cortex.</a> Trends in Endocrinology Metabolism. 13 (5), 200-208 (2002).</li>
<li>Marieb, E., Wilhelm, P. B., Mallatt, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarieb%2C+E+%22Chapter+17%3A+The+Endocrine+System%22">Chapter 17: The Endocrine System</a>. , 558-581 (2017).</li>
<li>Chrousos, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypothalamic-pituitary-adrenal+axis+and+immune-mediated+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune-mediated inflammation.</a> New England Journal Medicine. 332 (20), 1351-1362 (1995).</li>
<li>Bornstein, S. R., Rutkowski, H., Vrezas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+steroidogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cytokines and steroidogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. (1-2), 135-141 (2004).</li>
<li>Bielohuby, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+analysis+of+the+mouse+adrenal+gland+from+weaning+to+adulthood%3A+time-+and+gender-dependent+alterations+of+cell+size+and+number+in+the+cortical+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Endocrinology+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Growth analysis of the mouse adrenal gland from weaning to adulthood: time- and gender-dependent alterations of cell size and number in the cortical compartment.</a> American Journal of Physiology-Endocrinology Metabolism. 293 (1), E139-E146 (2007).</li>
<li>van Weerden, W. M., Bierings, H. G., van Steenbrugge, G. J., de Jong, F. H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenal+glands+of+mouse+and+rat+do+not+synthesize+androgens%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Adrenal glands of mouse and rat do not synthesize androgens.</a> Life Sciences. 50 (12), 857-861 (1992).</li>
<li>Wang, T., Rainey, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adrenocortical+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Human adrenocortical carcinoma cell lines.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 351 (1), 58-65 (2012).</li>
<li>Payne, A. H., Hales, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+steroidogenic+enzymes+in+the+pathway+from+cholesterol+to+active+steroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Review%22%5BJournal%5D)">Overview of steroidogenic enzymes in the pathway from cholesterol to active steroid hormones.</a> Endocrine Review. 25 (6), 947-970 (2004).</li>
<li>Ruggiero, C., Lalli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+ACTH+Signaling+on+Transcriptional+Regulation+of+Steroidogenic+Genes%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Impact of ACTH Signaling on Transcriptional Regulation of Steroidogenic Genes.</a> Frontiers in Endocrinology. 7, 24(2016).</li>
<li>Chen, Y. C., Liang, Y. L., Huang, Y. L., Huang, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Toona+sinensis-stimulated+adrenal+steroidogenesis+in+primary+rat+adrenal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Functional+Foods%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Toona sinensis-stimulated adrenal steroidogenesis in primary rat adrenal cells.</a> Journal of Functional Foods. 14 (2015), 318-323 (2015).</li>
<li>Rybak, S. M., Ramachandran, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+normal+rat+adrenocortical+cells.+I.+Culture+conditions+for+optimal+growth+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Primary culture of normal rat adrenocortical cells. I. Culture conditions for optimal growth and function.</a> In Vitro. 17 (7), 599-604 (1981).</li>
<li>Rybak, S. M., Ramachandran, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+normal+rat+adrenocortical+cells.+II.+Quantitation+of+steroid+dehydrogenase+stain%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Primary culture of normal rat adrenocortical cells. II. Quantitation of steroid dehydrogenase stain.</a> In Vitro. 17 (7), 605-611 (1981).</li>
<li>O'Hare, M. J., Neville, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+metabolism+by+adult+rat+adrenocortical+cells+in+monolayer+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroid metabolism by adult rat adrenocortical cells in monolayer culture.</a> Journal of Endocrinology. 58 (3), 447-462 (1973).</li>
<li>Di Blasio, A. M., Fujii, D. K., Yamamoto, M., Martin, M. C., Jaffe, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+cell+proliferation+and+steroidogenesis+in+cultured+human+fetal+adrenal+cells+chronically+exposed+to+adrenocorticotropic+hormone%3A+rationalization+of+in+vitro+and+in+vivo+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Maintenance of cell proliferation and steroidogenesis in cultured human fetal adrenal cells chronically exposed to adrenocorticotropic hormone: rationalization of in vitro and in vivo findings.</a> Biology of Reproduction. 42 (4), 683-691 (1990).</li>
<li>Brasaemle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+The+perilipin+family+of+structural+lipid+droplet+proteins%3A+stabilization+of+lipid+droplets+and+control+of+lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. The perilipin family of structural lipid droplet proteins: stabilization of lipid droplets and control of lipolysis.</a> Journal of Lipid Research. 48 (12), 2547-2559 (2007).</li>
<li>Hoeflich, A., Bielohuby, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+adrenal+gland+growth%3A+signal+integration+by+extracellular+signal+regulated+kinases1%2F2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of adrenal gland growth: signal integration by extracellular signal regulated kinases1/2.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 42 (3), 191-203 (2009).</li>
<li>O'Hare, M. J., Neville, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+responses+to+corticotrophin+and+cyclic+AMP+by+adult+rat+adrenocortical+cells+in+monolayer+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Morphological responses to corticotrophin and cyclic AMP by adult rat adrenocortical cells in monolayer culture.</a> Journal of Endocrinology. 56 (3), 529-536 (1973).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les glandes surrénales jouent un rôle clé dans l’adaptation environnementale3. Le par lequel la corticosurrénale sécrète l’hormone permettant de régler et ajuster les fonctions physiologiques et l’homéostasie du3. Le modèle in vivo reflète les effets réels physiologiques dans le corps. Toutefois, il est toujours influencée par de nombreux facteurs complexes, provoquant des effets instables dans les expériences. En revanche, le modèle in vitro de cellules possède des avantag...

Le système endocrinien est chargé de réglementer les activités physiologiques et l’homéostasie du1. Les glandes surrénales situées au pôle crânial des reins sont l’un des principaux organes endocrines qui sécrètent les minéralocorticoïdes, glucocorticoïdes et androgènes2,3. Il y a deux parties distinctes de la glande surrénale : le cortex et la médulla. Le cortex surrénalien se compose de trois couches : la glomérulée externe, le fasciculata intermédiaire et les reticularis interne3. La zone glomérulée est le site original de sécrétion d’aldostérone, un minéralocorticoïde, qui facilite en résorbant les ions sodium et eau dans les reins à3. Le fasciculata de zona produit principalement un niveau basal des glucocorticoïdes dans des conditions physiologiques normales3. Corticostéroïdes chez les rongeurs et le cortisol chez l’homme agissent pour aider le corps à gérer le stress en régulant le débit sanguin de glucose3. Dans une certaine mesure, ils peuvent inhiber les réponses inflammatoires et réguler le système immunitaire4,5. Contrairement aux autres mammifères, les souris et les rats n’ont pas un reticularis de zona fonctionnelle en raison de l’absence d’une expression 17α-hydroxylase dans la glande surrénale6,7. Ainsi, les glandes surrénales de rats et de souris sont dépourvues de la sécrétion des stéroïdes de C-19 surrénales (cortisol et androgènes surrénaux).
Primaire des cellules corticosurrénales ont est avérés utile pour étudier les mécanismes contrôlant la physiologie surrénalienne8. Comme les autres tissus stéroïdogènes, chaque zone surrénalienne synthétise ses stéroïdes du cholestérol libre9. Lors de la stimulation de l’hormone adrénocorticotrope (ACTH), le cholestérol libre est libéré de gouttelettes lipidiques de ventilation et, par conséquent, améliore la production de stéroïdes chez le fasciculata et reticularis10.
Plusieurs groupes ont tenté d’établir des lignées stables de carcinomes corticosurrénales. Toutefois, plusieurs préoccupations ont limité l’utilisation de lignées de cellules corticosurrénaliennes comme vitro modèles8. Les réponses de stéroïdes de lignées cellulaires peuvent différer entre les passages, le numéro de lot du sérum et la qualité du sérum, etc.. En outre, des lignées de cellules surrénaliennes commerciale (Y1 et SW13) ne pas sécréter corticostérone, rendant plus difficile à étudier la stéroïdogénèse surrénalienne8. L’utilisation des surrénales bovines et équines comme ex vivo modèles peuvent être un bon choix, même si les tissus de ces marchés peuvent occulter certains risques inconnus. Comparé à eux, gestion des glandes surrénales de rat est plus facile et la source est relativement plus stable et exempts de micro-organismes pathogènes. Pris ensemble, la présente méthode décrite ici pourrait être utilisée pour étudier le mécanisme de synthèse de la corticostérone dans les cellules surrénales fasciculata rat.

<table><tbody><tr><td>Rats femelles/mâles, SD/Wistar (8-12 semaines)</td>Les rats mâles ou femelles <td>BioLASCO</td><td></td><td>conviennent aux expériences. Les glandes surrénales des femelles sont plus grandes que celles des rats mâles, cependant, les rats femelles possèdent les cycles œstraux qui peuvent influencer les expériences</td></tr><tr><td>Collagénase, type II</td><td>Sigma</td><td>C-6885</td><td>isolement des cellules surrénales</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12800-017</td><td>milieu en poudre pour cellules surrénales</td></tr> Jambon <tr><td>F12</td><td>ThermoFisher</td><td>21700-075</td><td>milieu en poudre pour cellules surrénales</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>JT.baker</td><td>4018</td><td>tampon (poudre)</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>JT.baker</td><td>3506-1</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de cheval</td><td>Hyclone</td><td>16050014</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>SAFC</td><td>12103C</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline (10 000 U)-streptomycine (10 000 μg/mL)</td><td>Antibiotiques Corning</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Pince courbe</td><td>BRAUN</td><td>BD343R</td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>BRAUN</td><td>BD331R</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>BRAUN</td><td>BC224R</td><td>coupe peau et muscle de rat</td></tr><tr><td>Ciseaux délicats</td><td>BRAUN</td><td>BC101R</td><td>coupe glandes surrénales</td></tr><tr><td>Protéine liée à la différenciation adipeuse</td><td>Abcam</td><td>ab108323</td><td>anticorps pour gouttelettes lipidiques Protéine associée</td></tr><tr><td>Corticostérone Kit ELISA</td><td>cayman</td><td>500655</td><td>dosage pour la synthèse de la corticostérone</td></tr><tr><td>Microscopie à lumière inversée</td><td>Microscope à fluorescence Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>JT.baker</td><td>X198-07</td><td>pour la coloration par immunofluorescence</td></tr><tr><td>IgG anti-lapin IgG Alexa 488 Anticorps secondaire fluor</td><td>ThermoFisher</td><td>A-11034</td><td>pour la coloration par immunofluorescence</td></tr><tr><td>Anti-ADFP</td><td>Abcam</td><td>108323</td><td>pour la coloration par immunofluorescence</td></tr><tr><td>ProLong Gold monteur anti-décoloration</td><td>ThermoFisher</td><td>P36935</td><td>pour la coloration par immunofluorescence</td></tr></tbody></table>

culture primaire de cellules corticosurrénaliennes rat et tests des fonctions stéroïdogéniques

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

L’hormone qui sécrète de la corticosurrénale est vital pour les animaux contre le stress et les maladies. La méthode décrite ici est la procédure de cellules surrénaliennes cultivés primaires de rat et des tests fonctionnels (immunofluorescence souillant de protéine de surface de gouttelettes lipidiques, ainsi que l’analyse corticostérone). Contrairement à un modèle in vivo, la variation d’interexperiments dans des cultures monocouches surrénalienne est inférieure et la condition expérimentale est facile à contrôler. En outre, la source des rats est aussi plus stable que les autres animaux, comme les bovins ones. Il y a aussi plusieurs lignes de cellules surrénales humaines (NCI-H295, NCI-H295R, SW13, etc.) qui peuvent être utilisées dans les études surrénaliennes. Cependant, la production de stéroïdes de ces lignes sera toujours influencée par de nombreux facteurs, qui comprennent le numéro de lot de sérum, nombre de passage, mutant/perte de gènes distincts, etc.. Sauf faute de 17α-hydroxylase, la culture primaire de cellules corticosurrénaliennes rat est une technique mieux et plus pratique pour l’étude de la physiologie surrénalienne. En résumé, les glandes surrénales cultures primaires de rat pourraient être une bonne plateforme in vitro pour les chercheurs d’étudier les mécanismes du réactif d’intérêt dans le système de la glande surrénale.

En utilisant la procédure décrite ici, les cellules surrénales cultivés primaires se distinguaient sous un microscope à contraste de phase (Figure 1 a). Pour confirmer que les vésicules dans le cytoplasme sont des gouttelettes lipidiques, la coloration à l’immunofluorescence de protéine de liées à la différenciation adipeuse (PACA) pourrait être réalisée sur des cultures de jour-3 (Figure 1 b). Les cellules ont été cultivées sur ...

L’hormone sécrétée par le cortex surrénalien est vital pour les animaux contre le stress et les maladies. Nous présentons ici un protocole à la culture le rat primaire les cellules surrénales. Ça pourrait être une bonne plateforme in vitro pour étudier les mécanismes du réactif d’intérêt dans la stéroïdogénèse surrénalienne et la biosynthèse des lipides.

Culture primaire de cellules Corticosurrénaliennes Rat et tests des fonctions Stéroïdogéniques

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...

Le protocole présenté est très facile et il aidera les chercheurs à préparer les cultures surrénales primaires. Il fournit une procédure facile pour commencer la steroidogenèse surrénale. Cette technique peut être appliquée sur le dépistage des maladies liées au stress, tous les potentiels des réponses inflammatoires inhibées par l’agent.Wei-Chang Lee, étudiant à la maîtrise de mon laboratoire, démontrera la procédure. Commencez par stériliser le rat SD euthanasié à l’aide de 70 % d’éthanol et laissez-le être absorbé dans la peau. Après avoir essuyé la peau avec le papier de soie, placez le rat sur une plaque de plastique propre en position supine.Ensuite, utilisez des forceps incurvés externes pour soulever la peau à la ligne médiane. Utilisez des ciseaux pour effectuer une dissection émoussée de la peau en créant une forme Y du niveau de la cuisse à l’angle subcostal. Après avoir rincer les ciseaux avec 70% d’éthanol, couper le muscle, également la création d’une forme Y.Localiser la glande surrénale gauche derrière l’estomac dans la droite derrière le foie. Avec une paire de forceps standard et une paire de forceps incurvés, soulevez l’estomac et le foie, puis isolez les surréna

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Surrénales médullaires systèmes de culture de cellules chromaffines sont extrêmement utiles pour l'étude de l'excitation-sécrétion de couplage dans une dans la mise en in vitro. Ce protocole illustre la méthode utilisée pour disséquer les glandes surrénales et ensuite isoler la région médullaire en enlevant le cortex surrénalien. La digestion de la moelle dans les cellules chromaffines unique est alors démontrée.

Souris d&#39;isolement surrénales cellules chromaffines

Dans ce papier, nous avons décrit d'une manière typique à isoler et cultiver les myocytes cardiaques de rat adulte. Collagénase et la protéase sont utilisés pour digérer et d'isoler les myocytes unique. Myocytes cultivés suivre ce protocole répondent aux exigences les plus expérimenter.

Culture primaire des adultes myocytes cœur de rat

Hépatocytes primaires constituent un outil précieux pour évaluer biochimiques, moléculaires fonctions, et métabolique dans un système physiologiquement pertinente expérimentale. Nous décrivons un protocole fiable pour le rat en perfusion du foie in situ, ce qui génère constamment hépatocytes viables jusqu'à à 1,0 ×...

L&#39;isolement et la culture primaire de cellules de foie de rat

Arginine-vasopressine (AVP) contrôle fine-tuning de l'homéostasie de l'eau du corps en facilitant la réabsorption de l'eau par les cellules rénales principales. Ici, nous présentons un protocole pour la culture de la médullaire interne de rat primaire recueillir les cellules des canaux appropriés pour l'élucidation des mécanismes moléculaires qui sous-tendent la réabsorption de l'eau AVP-médiation.

Culture primaire Rat collecteur médullaire interne les cellules des canaux

les cellules de Sertoli primaire sont nécessaires pour étudier privilège des testicules-immune, la transduction du signal lors d'une inflammation ou une infection, et l'utilisation de leurs propriétés immunoprotection. Nous décrivons ici un protocole à base d'enzymes pour l'isolement des cellules de Sertoli primaires hautement purifiées et les cellules péritubulaires de testicules de rat.

Isolement des cellules de Sertoli et péritubulaire cellules de rat Testicules

Les oligodendrocytes sont les cellules myélinisantes du système nerveux central. Ce protocole décrit une méthode d’isolement et de culture de leurs précurseurs, des cellules progénitrices d’oligodendrocytes, à partir de cortex de rats, ainsi qu’une méthode quantitative rapide et fiable pour évaluer l’oligodendrogenèse in vitro en réponse à des facteurs expérimentaux.

Préparation de cultures Rat oligodendrocytes progénitrices et la quantification des oligodendrogenèse par analyse de fluorescence à double infrarouge

Nous présentons ici une méthode pour isoler les glandes surrénales de souris, difficulté les tissus, leur section et effectuez l’immunofluorescence souillant.

Isolation, Fixation et l’Immunofluorescence imagerie des glandes surrénales de souris

Ce protocole vise à isoler les ARNm ribosomales de traduction spécifiques au type cellulaire à l’aide du modèle murin NuTRAP.

Isoler des ARN spécifiques à un type cellulaire à partir d’échantillons de tissus hétérogènes congelés sans tri cellulaire

Ici, nous présentons un protocole pour isoler et cultiver des cellules souches épithéliales épithéliales de l’endomètre de rat (reESC), générant des organoïdes de l’endomètre du rat. Cette méthode facilite les études in vitro des maladies de l’endomètre, permettant l’édition de gènes et d’autres manipulations cellulaires.

Génération et caractérisation d’organoïdes utérins de rat à partir de cellules souches épithéliales de l’endomètre de rat

Une approche robuste et reproductible pour établir des cultures primaires 2D de cellules enrichies en zones gloméruloses et zones fasciculées a été développée pour le cortex surrénalien de la souris. Ce système préserve les caractéristiques moléculaires et fonctionnelles clés de chaque zone, permettant une étude ciblée des voies de signalisation, de la production d’hormones et du comportement des cellules corticales surrénales ex vivo.

Établissement de cultures primaires enrichies en zone à partir du cortex surrénalen de la souris

Apprenez la culture primaire de cellules corticosurrénaliennes de rat pour étudier la stéroïdogenèse et la réponse au stress. Cette méthode permet d'analyser la production d'hormones surrénaliennes in vitro.

Culture primaire de cellules Corticosurrénaliennes Rat et tests des fonctions Stéroïdogéniques

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