Low-cost protocole d’analyse de l’empreinte et la pendaison de zone Test pour souris appliqué le Stress chronique retenue

Notre protocole utilisant l’analyse de démarche est très utile en déterminant si les moteurs de souris des désordres de mouvement imitent le symptôme du patient présentant la perturbation de démarche. Ainsi, l’analyse de la démarche dans le test de charge de stress peut être effectuée facilement, et sans équipement coûteux, pour détecter certains phénotypes moteurs chez la souris, sans effets spontanés. Avant d’entreprendre le test comportemental, enregistrez le poids de chaque souris et utilisez un stylo de marquage pour étiqueter chaque queue.

Lorsque tous les animaux ont été pesés et marqués, placez les souris dans la salle expérimentale pendant au moins 30 minutes, et placez une boîte suspendue claire, 25 par 25 par 40 centimètres, avec un couvercle en maille rotatable, sur le banc du laboratoire. Lorsque les souris se sont acclimatées, placez une souris au centre du couvercle en maille et tournez soigneusement le couvercle à l’envers. Ensuite, mesurez la latence d’automne de la souris à partir du couvercle en maille, avant de retourner la souris à sa cage d’origine.

Lorsque toutes les souris ont été testées, placez un morceau de papier blanc de 9,9 par 42 centimètres sur le banc du laboratoire et placez une boîte à but sombre à l’extrémité distale du papier. Placez d’autres boîtes, à peu près de la même longueur que le papier, des deux côtés de la piste pour éviter de s’échapper. Et ajouter de l’encre noire et rouge pour séparer les boîtes de Petri de 35 millilitres.

Pour former les souris à l’analyse, placez une souris à l’extrémité proximale du papier, face à la boîte d’objectif, et laissez la souris marcher de l’extrémité proximale du papier à la boîte de but. Lorsque la souris atteint la boîte, frottez doucement l’animal, en repliant le dos et la queue entre la boule du pouce et les autres doigts, pour limiter le mouvement des membres postérieurs. Et plonger le fond des membres antérieurs à l’encre rouge, et le fond des membres postérieurs à l’encre noire.

Ensuite, placez immédiatement la souris sur l’extrémité proximale du papier, face à la boîte de but, et laissez la souris marcher de l’extrémité proximale à la boîte de but. Après avoir assécher à l’air le papier imprimé du pied, utilisez une règle pour obtenir trois mesures de la longueur de foulée, en mesurant les distances entre les mêmes parties des empreintes de pattes. De la largeur de base avant, en dessinant une ligne entre les empreintes avant consécutives, de même face, et en mesurant la longueur de la ligne verticale de la garniture de l’empreinte avant, à la ligne tracée entre les empreintes.

Et de la largeur de base postérieur, en dessinant une ligne entre les empreintes postérieures droites consécutives, et en mesurant la longueur de la ligne verticale de la garniture de l’empreinte arrière gauche, à la ligne tracée entre les autres empreintes droites. Pour le chevauchement, mesurez la distance entre les coussinets de l’avant et de l’arrière. Pour préparer un tube de retenue, utilisez une perceuse carrée pour faire 16 trous de deux millimètres dans un tube de 50 millilitres le long des marques d’échelle, et l’arrière de chaque marque d’échelle.

Couper la pointe du tube pour faire un trou de cinq millimètres, pour respirer, et faire un trou de quatre millimètres dans le bouchon du tube, pour la queue. Pour le test de chargement du stress, débrailler une souris, et placer l’animal dans la tête du tube de retenue en premier, avec les membres antérieurs doucement confinés. Passer la queue à travers le trou dans le bouchon avant de plafonner le tube.

Et placez la souris sur le dessus du banc pendant deux heures à température ambiante. À la fin de la période de chargement du stress, retirez la souris du tube et retournez l’animal dans sa cage d’origine. Comme on l’a observé dans ces figures représentatives, les souris modèles de dystonie de dystonie à début rapide hétérozygotes, démontrent des longueurs de foulée avant et arrière significativement plus courtes que leurs compagnons de litière de type sauvage à l’âge de quatre semaines.

Le stress hétérozygote dystonie rapide-début souris modèle parkinsonisme, montrent également des longueurs de foulée significativement plus courtes des deux membres que ceux des compagnons de litière stressés de type sauvage à huit semaines d’âge. Les asymétries des longueurs de foulée des deux membres ne sont pas significativement différentes, dans n’importe quel groupe de souris, à n’importe quel âge. La base avant et les chevauchements des deux membres sont également similaires, dans tous les groupes, à tous les âges.

La base postérieur est significativement plus large chez ces souris modèles de dystonie de dystonie à début rapide stressées, que chez les animaux de type sauvage stress à l’âge de 10 semaines, ce qui indique que le stress provoque des déficits moteurs chez les souris modèles de dystonie à début rapide hétérozygotes. Aucune différence significative dans le temps de pendaison, entre le type sauvage et le mutant, n’est observée chez les animaux âgés de quatre à 10 semaines. À l’âge de 12 semaines, cependant, le temps suspendu des souris sauvages de stress est sensiblement plus long que celui des autres animaux, suggérant que le déficit moteur chez les souris modèles de parkinsonisme de dystonie à début rapide hétérozygotes, se distingue des souris de type sauvage par un test de contention chez les animaux plus âgés.

Placez la souris sur le papier immédiatement après que la souris accroche le fond des membres à l’encre pour éviter le séchage de l’encre avant le test de marche. Des tests supplémentaires pour les caractéristiques émotionnelles, telles que le champ ouvert, surélevé plus-labyrinthe, et l’essai entier de natation, peuvent être exécutés pour répondre si l’anomalie de démarche résultent seulement du déficit moteur. Notre protocole peut être utilisé pour explorer la susceptibilité au stress, en changeant le nombre et la durée de la charge de stress, et en comparant les phénotypes moteurs entre diverses conditions de chargement.

Notre protocole peut être utilisé pour explorer la susceptibilité au stress en changeant le nombre et la durée des charges de stress, et en comparant les phénotypes moteurs entre diverses conditions de chargement.