La pneumonectomie gauche combiné avec Monocrotaline ou Sugen comme un modèle d’Hypertension pulmonaire chez le rat

Ce protocole est significatif parce qu’il produit le meilleur modèle possible pour l’hypertension artérielle pulmonaire. Aucun autre modèle ne produit les lésions plexiformes trouvées dans les patients humains de PAH. Le principal avantage est que nous doublent le flux sanguin dans le poumon droit et l’artère pulmonaire, causant des dommages endothéliales et forçant les poumons à travailler deux fois plus dur.

Notre groupe a développé un modèle très efficace de l’hypertension artérielle pulmonaire pour développer des thérapeutiques. Outre l’hypertension artérielle pulmonaire, cette méthode pourrait être utile en médecine régénérative et pourrait donner un aperçu d’autres maladies avec un flux pulmonaire accru comme les malformations cardiaques congénitales ou les patients post-pneumonectomy. Pour quelqu’un qui n’a jamais effectué cette technique, mon conseil est de suivre le protocole exactement et de s’assurer que le chirurgien peut voir exactement ce qu’ils font.

Après avoir anesthésié le rat avec 4% d’isoflurane, l’animal est intubé à l’aide d’une chair de poule à fibres optiques pour éclairer la trachée. Insérez un cathéter de calibre 16 dans le larynx et utilisez un miroir froid pour observer la condensation de l’humidité dans le souffle expiré du cathéter pour confirmer l’intubation. Connectez le rat au ventilateur et placez le rat sous le microscope dans la bonne position de décubitus sur un coussin chauffant de 37 degrés Celsius.

Fixez les membres antérieurs avec du ruban adhésif et utilisez des tondeuses pour raser le thorax gauche derrière la jambe avant jusqu’à l’extrémité de la cage thoracique. Nettoyez la peau exposée avec trois solutions séquentielles d’iode de 10 % povidone et 70 % d’lingettes à l’éthanol, et placez un oxymètre d’impulsion sur le pied du rat pour surveiller la fréquence cardiaque et la saturation en oxygène tout au long de la chirurgie. Maintenant, ajustez le microscope et mettre la vue chirurgicale au point.

Ensuite, placez un drapé stérile sur le corps du rat et le plateau d’instruments pour créer un environnement stérile. Enfin, placez des instruments stériles sur le plateau stérile de l’instrument. Pour effectuer une pneumonectomie gauche, utilisez des ciseaux Cooley-Mayo et des forceps de tissu Gerald pour couper un trou de deux à trois centimètres dans le drapé chirurgical, et utilisez une lame chirurgicale pour faire une incision latérale de deux centimètres de long dans le thorax gauche.

Utilisez des ciseaux Cooley-Mayo pour couper chaque couche de tissu jusqu’à ce que les côtes et les muscles intercostals soient exposés. Utilisez un moustique pour faire un trou à travers le muscle du troisième espace intercostal. À l’aide d’une sonde à double fin, déplacez le poumon pour visualiser l’artère pulmonaire et utilisez des ciseaux Iris McPherson-Vannas pour ouvrir les muscles intercostals à une largeur d’environ un à deux centimètres.

Placez un petit rétractateur auto-retenant dans la plèvre gauche pour tenir les côtes et les muscles ouverts, et déplacez le poumon gauche plus bas dans l’abdomen pour permettre l’accès à l’artère pulmonaire et bronche. Pour la ligature de la bronche principale gauche et de l’artère pulmonaire, d’abord, chargez un hémoclip moyen dans un applicateur de clip ligating et utilisez les forceps atraumatic de Wangensteen pour soulever soigneusement la partie supérieure du poumon gauche pour exposer l’artère pulmonaire. Fermez le clip et l’applicateur autour de l’artère, en prenant soin de ne pas fermer ou rompre la veine azygos gauche.

Et ouvrez l’incision plus loin en utilisant l’amygdale pour séparer les fibres musculaires. Après avoir chargé un autre hemoclip moyen dans l’applicateur de clip de ligating, utilisez les forceps atraumatic et les forceps standard de tissu pour soulever la partie inférieure du poumon hors de l’incision jusqu’à ce que le bronchus principal gauche et la veine pulmonaire gauche soient visualisés. Ligate soigneusement la bronche principale gauche et la veine pulmonaire avec le deuxième hémoclip, et utiliser des ciseaux pour enlever le poumon sans couper ou déchirer le clip.

Ensuite, utilisez un petit morceau de gaze stérile pour absorber tout sang et endiguer tout saignement. Utilisez le porte-aiguille et une suture de prolène 4-0 pour fermer les côtes et les muscles intercostals. Avant de fermer les muscles intercostals, insérez un cathéter de calibre 16 dans la cavité thoracique loin de l’incision chirurgicale et dans le septième espace intercostal, et retirez immédiatement l’aiguille, laissant le cathéter en place.

Placez une suture 5-0 dans la peau et autour du tube thoracique de sorte que lorsque le tube thoracique est enlevé, le trou sera attaché fermé, et attacher les sutures pour fermer les côtes. Fermez la peau et l’espace sous-cutané avec une suture 5-0 en cours d’exécution, et utilisez une seringue de trois millilitres pour évacuer l’air de la cavité pleurale à travers le cathéter pour rétablir la pression négative normale dans le thorax. Utilisez un porte-aiguille pour serrer immédiatement le cathéter pour empêcher l’air de revenir dans la cavité thoracique.

Retirer le cathéter et attacher la suture pour fermer le trou. Dans le groupe de pneumonectomy et de monocrotaline, l’hypertension pulmonaire grave se développe par jour 21, comme démontré par une augmentation de la pression pulmonaire moyenne d’artère comparée aux animaux faux non traités de contrôle. Dans le groupe pneumonectomy plus Sugen, la pression moyenne d’artère pulmonaire est trois fois plus élevée que dans le groupe témoin.

La pression systolique ventriculaire droite est également beaucoup plus élevée chez les animaux traités à la monocrotaline et au Sugen, par rapport au groupe témoin. Dans les sections normales de tissu pulmonaire de rat tachées d’hématoxyline et d’éosine, des espaces entre les alvéoles et les structures alvéolaires sont apparents, et les vaisseaux sont clairs et d’une épaisseur normale. Dans le poumon d’hypertension d’artère pulmonaire, il y a l’évidence du remodelage, de l’épaississement des parois de navire, de la constriction grave des vaisseaux, et de l’inflammation et de l’artérite pulmonaire focale.

L’animal doit compenser la perte d’un poumon, il est donc important d’être patient pendant la période de récupération. Surveillez les signes vitaux et donnez un volume supplémentaire d’oxygène ou de poumons au besoin. Sugen crée l’apoptose endothéliale qui est le signe pertinent clinique de l’hypertension artérielle pulmonaire.

Le modèle gauche de pneumonectomie chez les rongeurs a ouvert la voie aux scientifiques pour étudier des anomalies de flux et développer de nouveaux traitements pour l’hypertension artérielle pulmonaire. En raison de l’utilisation de l’isoflurane, sugen, et / ou MCT dans ce modèle, l’équipement de protection individuelle doit être porté en tout temps.