Mesure très sensible de la perméabilité glomerulaire chez les souris avec fluorescein Isothiocyanate-polysucrose 70

Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la néphrologie sur le rôle de la perméabilité glomerular dans les maladies rénales. Le principal avantage de cette technique est que de petites augmentations transitoires de la perméabilité glomerular sont détectées à l’aide d’un traceur fluorescent étiqueté plomb. Après l’anesthésie, placez un cathéter urinaire chez la souris femelle.

Placez la souris dans la récumbence dorsale. Serrez le bas-ventre et trouvez l’ostium urétral. Obtenir la partie plastique du cathéter d’un angiocathéter de 22 G et le lubrifier avec du gel de xylocaine.

Utilisez l’index gauche pour placer une tension soigneuses sur le bas-ventre et introduire le cathéter de trois millimètres dans l’ostium urétral tout en faisant le parallèle avec l’axe urétral distal. Tournez le dessus de l’angiocathéter à 180 degrés en gardant la pointe dans l’ostium urétral et en maintenant l’axe de l’urètre. Ensuite, introduisez le cathéter sept millimètres plus loin dans la souris afin qu’il soit placé dans la vessie.

Placez un tube brun de 1,5 millilitre sur le dessus de l’angiocathéter pour recueillir l’urine. Appliquer un millilitre de chlorure de sodium de 0,9 % sous-cutané pour améliorer la production d’urine. Rasez le cou de la souris et placez-le en récumbence avec la tête vers le chirurgien.

Hyper étendre la tête de la souris avec une bande. Désinfecter le cou avec 70% d’isopropanol. À l’aide d’une pince à épiler et d’une paire de ciseaux, faire une incision cutanée de cinq millimètres sous la mâchoire.

Couper la peau d’environ un centimètre en direction du sternum jusqu’à ce que le milieu du sternum soit atteint. Utilisez une paire de ciseaux. Disséquer soigneusement la peau sur le côté droit du cou.

Faire une incision rectangulaire de la peau à droite pour exposer les tissus mous du cou. Veillez à ne pas endommager la veine jugulaire. Utilisez une paire de ciseaux et une pince à épiler pour fixer les volets de la peau avec deux pinces.

À l’aide de la pointe de la pince fine, exposer soigneusement la veine jugulaire par une préparation émoussée. Si nécessaire, retirer les tissus avec de beaux ciseaux. Évitez les blessures aux branches veineuses.

Placez et fermez une ligature avec un fil de soie à la partie distale de la veine jugulaire visible qui est vers la tête de la souris. Fixer le fil de soie avec un ruban adhésif pour mettre la tension sur la ligature. Cela assure une légère tension sur la veine jugulaire.

Préparer une ligature autour de la partie proximale de la veine jugulaire. Après cela, remplissez le cathéter avec la solution d’équilibrage et de fusion. Fixer le cathéter avec un ruban adhésif de sorte que le cathéter aligne la veine jugulaire.

Contrôle des bulles pour éviter l’embolie de l’air. Soulevez la veine jugulaire avec de fines pinces à épiler sur le site de l’insertion. Aligner le tube parallèlement à la veine jugulaire et percer la veine jugulaire visant le lumen.

Insérer pendant environ deux à quatre millimètres parallèlement à l’axe de la veine jugulaire. Évitez les mouvements rapides. Fermez la ligature pour fixer le cathéter.

Contrôle de l’étanchéité de la ligature en regardant attentivement à travers le microscope. Placez un écouvillon humide sur le site de la chirurgie. Placez le brassard de queue au bas de la queue de la souris pendant que la souris se couche dans la couchée dorsale.

Démarrez les mesures et répétez-les dix fois par point de temps. Si les mesures de la pression artérielle ne semblent pas correctes et que de fausses données sont produites, ajustez la position du brassard de queue. Avant la phase d’équilibrage, changer le tube de collecte urinaire et le placer sur la glace.

Pliez un écouvillon et placez-le autour du cathéter du petit récipient qui est introduit dans la veine jugulaire. Placez une pince sur l’écouvillon pour abolir le flux sanguin rétrograde ou l’embolie de l’air. Connectez une aiguille de 27 G avec une seringue d’un millilitre remplie du bolus FITC à l’extrémité du cathéter du petit navire.

Ouvrez la pince et appliquez le bolus FITC de 100 microlitres. Fermez à nouveau la pince et connectez le cathéter plus grand avec le cathéter plus petit. Rouvrir la pince et démarrer la pompe à seringues avec un débit de 0,008 millilitre par minute.

Poursuivre l’infusion pendant 60 minutes. Dans cette phase, les médicaments efficaces sur la sélectivité perm glomerular sont étudiés. Changez le point de temps de forme de tube urinaire zéro minute à un autre tube brun de 1,5 millilitre.

Placez un écouvillon autour du cathéter du petit récipient et déconnectez le grand cathéter du cathéter du petit navire. Remplissez la seringue avec la solution de phase expérimentale. Placez-le dans la pompe à seringues et laissez la pompe à perfusion fonctionner de sorte que le grand cathéter soit rempli de la solution de phase expérimentale.

Reconnecter les cathéters tout en évitant l’embolie de l’air et rouvrir la pince. Démarrez la pompe à seringues à un débit de 0,008 millilitre par minute. Continuer à faire fonctionner la pompe à seringues pendant 60 minutes et recueillir l’urine dans le tube urinaire par la suite.

Placer le tube d’urine sur la glace. Dans cette étude, le balayage de fluorescence de l’urine indigène de souris montre un pic à 395 nanomètres. Le polysucrose FITC 70 à une concentration de 40 microgrammes par millilitre dans l’urine de souris affiche un maximum de fluorescence à 525 nanomètres.

L’urine de souris ne perturbe pas la mesure de fluorescence de la polysucrose FITC 70. À l’admission de 525 nanomètres augmentant les concentrations de polysucrose FITC 70 montre une intensité de fluorescence accrue. Cette méthode est également capable de détecter les différences de perméabilité glomerular.

Les colonnes blanches représentent la polysucrose FITC 70 niveaux avant le début de la stimulation de l’angiotensine II dans la phase expérimentale. Après des dosages pendant 60 minutes, la perméabilité glomerular a augmenté comparée au groupe témoin. Angiotensin II laver la perméabilité glomerular diminuée.

Le polysucrose FITC 70 niveaux a diminué après 60 minutes supplémentaires de stimulation angiotensine II ou 60 minutes de lavage angiotensine II. L’augmentation de la perméabilité glomerular due à l’angiotensine II pourrait être bloquée par un bloqueur de récepteur d’angiotensine II. La tension artérielle surveillée par la méthode de manchette de queue n’a pas montré des différences significatives entre les groupes traités de contrôle et d’angiotensine II.

Tout en essayant cette procédure, il est important d’éviter l’embolie de l’air lors de la modification des solutions d’infusion.