Name: Identification par- et les espèces chimiques polyfluorés avec un flux de travail combinée spectrométrie de masse à haute résolution ciblée et Non-ciblés-dépistage (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Découvrez une méthode de quantification ciblée et d'analyse non ciblée des PFAS dans l'eau par spectrométrie de masse. Ce protocole permet d'identifier les composés fluorés connus et d'identifier de nouvelles substances environnementales.

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La U.S. Environmental Protection Agency, par le biais de son bureau de recherche et développement, financé et géré la recherche présentée ici. Ce document a été revu par la U.S. Environmental Protection Agency, Office de la recherche et le développement et approuvé pour publication. Les opinions exprimées dans cet article sont celles des auteurs et ne reflètent pas nécessairement les vues ou les politiques de la U.S. Environmental Protection Agency. Cette recherche a été financée en partie par une nomination pour le programme de recherches postdoctorales au laboratoire de recherche exposition National administré par l’Institut d’Oak Ridge pour la Science et l’éducation par le Interagency DW89992431601 accord entre la US Department of Energy et l’Environmental Protection Agency des États-Unis.

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Préparation et manipulation des échantillons L’inclusion des normes de référence/spike revêtent une importance primordiale pour toute analyse ciblée, puisqu’elles fournissent un filet de sécurité pour la vérification de validité analytique. Le manque d’échantillons QC empêche toute évaluation de l’exactitude des résultats ; l’ubiquité de composés fluorés signifie que la contamination des échantillons sur le terrain, traitement des matériaux ou système SM-chance n’est pas rare et doit être pris en compte. En outre, il permet la validation du protocole indépendamment de la variation dans l’échantillon au jour le jour, traitements, que bon nombre des étapes peuvent être très variables, en particulier la SPE et étapes de concentration échantillon. L’extraction de deux produits chimiques perfluorés anciens et nouveaux peut être fortement influencée par le choix de la phase stationnaire pour la concentration et les composants des échantillons source, comme le pH et la salinité46. L’influence des conditions de l’échantillon devrait considérer si des catégories particulières de produits chimiques pefluorinated présentent un intérêt. Programmes d’échantillon alternatif préparation des extraits aqueux peuvent être utilisés si l’installation du laboratoire est disponible et l’analyse des données en aval reste similaire.
Analyse des données ciblées Pour les composés avec les normes disponibles et apparié, stable isotope intitulée normes internes, les principales préoccupations pour l’analyse des données sont instrumental et la détermination des limites de détection et gammes considérées appropriées peuvent être déterminées sur une base par-un laboratoire en utilisant des approches standards, comme le rapport signal-sur-bruit de bas niveau standard pointes47. En l’absence de normes internes correspondants des effets de matrice ne correspondent pas des erreurs peuvent survenir, et dos-prévision précise des échantillons enrichis peut être utilisé pour estimer la précision de la mesure. Lors de l’absence de normes pour préparer une courbe, une estimation quantitative d’un inconnu peut être faite en le traitant identiquement à une norme étroitement assortie composée, mais sont d’erreurs dans l’estimation de l’ordre de 10 + pli ayant une capacité limitée pour quantifier l’incertitude, voir McCord, Newton et Strynar21. Dans ces cas, tendance peut encore être collectées, mais les estimations de concentration sont peu fiables en soi.
Analyse des données non ciblée Paramètres de cueillette de pointe ont un impact important sur le nombre d’éléments chimiques identifiés, mais la qualité de la sélection des fonctionnalités est également fortement touchée. Les décisions d’intérêt dans la cueillette de pointe sont 1) intensité des masses individuelles devant figurer dans les spectres, le seuil de l’abondance d’ion 2) l’intensité du chromatogramme extrait culmine à considérer les caractéristiques, la fonctionnalité abondance seuil 3) détection fréquence, le seuil de répliquer et 4) variation analytique, le seuil de CV (Figure 10).
Réglage des seuils exagérément basses pour résultats de cueillette de pointe à une augmentation exponentielle de temps d’échantillon pour résoudre des fonctionnalités supplémentaires de plus en plus faible abondance (tableau 7). Les filtres de seuil d’ion-abondance de masse caractéristiques spectrales où suffisamment de l’abondance de l’isotope individuel ne passent pas le seuil. Idéalement, cela sélectionne uniquement pour les fonctions avec les spectres MS de qualité, s’assurer qu’ils sont caractéristiques chimiques véritables au lieu du bruit instrumental et permettant pour la formule prévision en traitement en aval. Un seuil approprié est basé sur le bruit instrumental, idéalement au moins 3 x le seuil de bruit pour MS1 scanne. Seuil d’abondance de fonctionnalité filtres chimiques caractéristiques basées sur l’intensité ou la zone de la fonctionnalité chromatographique extraite. Cette étape permet le rejet des pics de faible abondance, qui sont généralement de mauvaise qualité chromatographique, ont des variances élevées ou sont le résultat d’autre extraction pauvre logiciel. Un seuil approprié doit être déterminé par expérience et par matrice basée sur un niveau acceptable de génération mauvaise fonctionnalité (par exemple, les fonctionnalités ci-dessous la chromatographie trop mauvaise pièce de seuil). Encore QC analytique peut être utilisé pour rejeter les caractéristiques au niveau chromatographique basé sur l’identification incompatible en répétitions analytiques et/ou préparatoires (seuil répétée) ou fondée sur la mauvaise reproductibilité dans répétitions (seuil de CV). Niveaux appropriés dépendent de la qualité du logiciel intégration pic utilisé et les entités chimiques incriminés. Pour les composés perfluorés soluble dans l’eau et protocoles d’intégration légèrement optimisée, les caractéristiques doivent être identifiées dans 80 + % d’analytique réplique et CVs devraient tomber sous les 30 %, tel que décrit dans la section méthodes.
Les pics détectés d’analyse non ciblés ne donnent pas des estimations quantitatives des concentrations des matériaux détectés. En outre, l’identité du véritables inconnues peut être difficile à confirmer car de nouveaux composés sont absents des bases de données accessibles au public. Détermination de structure roman exige une analyse approfondie avec plusieurs méthodes et nécessite une expertise en chimie et en spectrométrie de masse. Cependant, normaliser la surface des pics des caractéristiques chimiques peut produire des estimations semi-quantitatives des concentrations d’inconnues des espèces connues de21. Si cohérent d’échantillonnage et les étapes de préparation sont employés, information sur les tendances temps pour chaque espèce peut être généré pour surveiller la persistance d’un produit chimique dans l’avenir comme la réponse pour une seule espèce devrait correspondre à moins grande variations dans la matrice21.
Le principal avantage de cette méthode est l’extensibilité de la traitement de l’échantillon pour permettre une analyse ciblée et non ciblée. Analyse ciblée fournit des informations quantitatives équivalentes ou supérieures, il manque grandement de profondeur de l’analyse souhaitée lorsqu’ils traitent avec des matériaux nouveaux et émergents, ainsi que leur relation avec les matériaux de matrice. Appliquer une méthodologie ciblée, ou même un suspect méthode de criblage basée uniquement sur les matériaux connus et bases de données limités est complètement aveugle aux espèces précédemment non prise en charge, même s’ils peuvent avoir des effets importants sur la santé. Comme le logiciel améliore et bases de données deviennent plus robustes, la précision d’identité inconnue continuera d’augmenter, avec une diminution concomitante de l’investissement de temps et le niveau d’expertise nécessaire pour analyser les données multidimensionnelles générées par cette approche. Néanmoins, les données produites actuellement sont très utile de futur parce que la banque de données permettant l’analyse post-hoc avec logiciel nouvellement développé et permet la comparaison au fil du temps même si l’identité d’un composé détecté est actuellement inconnue.

La classe par- et substances polyfluoroalkyle (PFASs) sont des polluants organiques persistants, avec une préoccupation de santé publique important. Le perfluorooctane (SPFO) et l’acide perfluorooctanoïque (APFO) de composés spécifiques ont l’eau potable santé niveau consultatif fixées par l’EPA1,2 et leur importante production américaine a cessé dans les années 20003,4 . Pour acquérir une compréhension importante pour les propriétés de RFP documents du produit textiles et consommation, fabrication des sphères, des centaines, sinon des milliers d’autres chimies RFP ont été conçus pour combler les niches de produits, y compris le remplacement des les composés désapprouvée5,6,7,8. Il y a un en cours doivent surveiller les concentrations dans l’environnement d’acides perfluorocarboxyliques à chaîne droite et sulfonates telle PFOS, PFOA et leurs séries homologues connexes, mais de nouveaux composés chimiques ne sont pas couverts par des méthodes reconnues telles que l’EPA 537 méthode9 et souvent manque de normes analytiques pour les analyses ciblées traditionnelles. L’intention du présent protocole est donc double. Il fournit une voie pour l’analyse de LC-MS/MS ciblée des espèces de composés fluorés dans l’eau où il existe des normes analytiques et détaille l’intégration transparente d’une approche non ciblée, haute résolution basé sur la spectrométrie de masse pour l’analyse des données qui permet la détection de composés inconnus ou inattendues dans les mêmes échantillons.
Extraction en phase solide (SPE) est une technique établie pour l’échantillon et la concentration des demandes visant plusieurs analytes et échantillon matrices10,11. Pour l’analyse des propositions d’action, plusieurs phases rétentives solides, y compris non polaires, fonctionnalisés polaire et colonnes échangeuses d’ions ont servi à des degrés variables pour les sous-classes d’espèces fluorés dans une grande variété de matrices9,12, 13,14,15,16. Avances dans l’analyse de l’échantillon SPE en utilisant des configurations en ligne grandement augmentent le débit de l’approche et à améliorer la reproductibilité de la manipulation des échantillons, mais le processus fondamental demeure cohérente17. Des efforts pour éliminer la concentration en mode hors connexion de SPE en utilisant des injections de grand volume ont aussi été réalisées, mais elles nécessitent des modifications à la chromatographie qui les exposent en dehors du domaine d’analyse occasionnelle18,19 . Notre analyse de l’échantillon utilise une phase rétentive de polymère anionique faible échange (cire) pour bien séparer les matières acides RFP les contaminants organiques traditionnels tout en réalisant des facteurs de concentration important échantillon. Cette phase de cire est importante de saisir les acides perfluorés à chaîne courte comme le sulfonate de perfluorobutane (PFBS) ou les éthers de perfluorés tels que l’acide dimère oxyde d’hexafluoropropylene (HFPO-DA) qui sont plus polaires que le plus long perfluorés hérités de chaîne espèces de20,21. Comme il y a eu une évolution significative vers des plus courtes chaînes et l’inclusion de l’éther dans le récent RFP chimie5, cette sélection de phase permet une récupération plus complète de nouveaux composés pour analyse par SM.
Quantification de la LC-MS/MS ciblé à l’aide authentifié normes et isotopes stables, intitulée normes internes fournit un niveau inégalé de la spécificité et la sensibilité pour l’analyse quantitative. Bien que cette approche soit souhaitable dans de nombreuses situations, il est impraticable pour les situations de tout-trop-commun dans l’analyse. Approches ciblées fonctionnent uniquement pour les espèces qui sont attendus dans l’échantillon, et pour quelles méthodes ont déjà été établis. Pour les composés nouveaux et émergents, cette approche est incapable de détecter même les espèces qui peuvent être d’intérêt, indépendamment de leur chimie ou de la concentration, et les spectromètres de masse basse résolution sont presque incapables de fournir suffisamment d’informations pour faire sans équivoque affectations chimiques de composés inconnus. Par conséquent, le domaine de l’analyse non ciblés a été soulevée, s’appuyant sur la puissance des spectromètres de masse modernes à haute résolution pour analyser les échantillons sans une hypothèse présupposée et attribuer rétroactivement produits chimiques caractéristiques détectables dans l’échantillon. Cette approche a été largement utilisée dans les domaines de la biologie22,23,24 et sciences de l’environnement25,26,27 sur nombreuses catégories de produits chimiques. Produits chimiques perfluorés sont particulièrement faciles à identifier dans cette méthode en raison de leurs habitudes de spectrométrie de masse uniques, et des centaines de composés ont été décrites dans juste les dernières quelques années5,28.
Le protocole nous discuté vise à aligner ciblée quantification RFP LC-MS/MS avec la nécessité d’identifier et de contrôler semi quantitativement émergents composés d’intérêt. La phase SPE sélection et des techniques de préparation d’échantillon visent à assurer l’intégration des acides plus hydrophiles de RFP émergents de l’eau et peut être moins adaptée pour la plus longue chaîne polymérique espèces et non ioniques. En outre, les données générées par l’analyse indifférenciés sont denses et de haute dimensionnalité, qui nécessite l’utilisation du logiciel d’analyse de données. Ces progiciels sont fréquemment fournisseur spécifique et nécessitent des modifications à opérer entre les plates-formes de l’instrument. Si possible, le processus d’analyse a été décrite de manière générique et alternatives open source/freeware sont référencés, mais l’efficacité et la précision de toute approche de logiciels doivent être évalués sur une base individuelle.

<table><tbody><tr><td>Système de chromatographie liquide à ultra-haute performance Acqity&nbsp ;</td><td>Waters Corporation</td><td></td><td>Modifié avec un kit d’analyse des PFC (176001744) ; un système UPLC équivalent est acceptable si les antécédents de PFAS sont vérifiés et confirmés comme étant à faible teneur en</td></tr><tr><td>acétate d’ammonium</td><td>Fluka</td><td>17836</td> Hydroxyde d’ammonium <td>pur à >99 %</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>338818</td><td></td></tr><tr><td>Balance</td><td>Mettler</td><td>AB204S</td><td></td></tr><tr><td>Colonne UPLC à phase inverse BEH C18, 2,1 & fois ; 50&nbsp ; mm, 1,7 &mu ; m&nbsp ;</td><td>Waters Corporation</td><td>186002350</td><td></td></tr><tr><td>Pousse-seringue à double piston&nbsp ;</td><td>Waters Corporation</td><td>SPC10-C</td><td></td></tr><tr><td>Acide acétique glacial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ARK2183&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Filtres en microfibre de verre</td><td>Whatman</td><td>1820-070</td><td></td></tr><tr><td>Flacon d’échantillon en polyéthylyse haute densité&nbsp ;</td><td>Nalgene</td><td>2189-0032&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Spectromètre de masse à haute résolution</td><td>Divers</td><td></td><td>spectromètres de masse doivent être capables de fournir une masse précise à < 10 ppm et collecte de données MS/MS. Agilent 6530 qTOF et Thermo Fisher Orbitrap Fusion ont été utilisés dans ce travail</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acide nitrique (35 % p/p)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SVCN-5-1</td><td>Peut être préparé en interne à l’aide d’acide nitrique concentré et d’eau réactive</td></tr><tr><td>Entonnoir en polypropylène Buchner</td><td>ACE Glass</td><td>12557-09&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Tube et capuchon en polypropylène CENITRFUGE</td><td>BD Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Bouteille à vide en polypropylène (1 L)</td><td>Nalgene</td><td>DS4101-1000</td><td></td></tr><tr><td>Quattro Premier XE spectromètre de masse triple quadripôle&nbsp ;</td><td>Waters Corporation</td><td></td><td>Un système triple quadripôle équivalent ou supérieur peut être utilisé à la place, devrait fournir une sensibilité et une stabilité élevées pour une analyse ciblée</td></tr><tr><td>Eau</td><td></td><td></td> réactive <td>Toute source déterminée comme étant sans PFAS</td></tr><tr><td>Acétate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302406</td><td></td></tr><tr><td>TurboVap évaporateur d’azote&nbsp ;</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>103198</td><td>Des systèmes équivalents ou un évaporateur rotatif à vide peuvent être utilisés à la place</td></tr><tr><td>Cartouche SPE à échange d’anions faibles (Oasis WAX Plus)</td><td>Waters Corporation</td><td>186003519</td><td></td></tr><tr><td>Standard Solutions</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,3,3-Tetrafluoro-2-(1,1,2,2,3,3,3-heptafluoropropoxy)acide propanoïque (HFPO-DA)</td><td>Wellington</td><td>HFPO-DA</td><td></td></tr><tr><td>Autres étalons de composés ciblés d’intérêt</td><td></td><td></td><td>à déterminer sur la base d’une analyse préliminaire et de la disponibilité des étalons</td></tr><tr><td>Mélange natif d’APFC/PFAS marqué dans la masse HFPO-DA (2 μg/mL)</td><td>Wellington</td><td>PFAC-MXA</td><td>ou PFAC-MXB ; ou mélange préparé individuellement contenant des composés d’intérêt</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> Isotope stable Marqué PFCA/PFAS <td></td></tr><tr><td> Mélange (2 μg/mL)</td><td>Wellington</td><td>MPFAC-MXA</td><td>ou MPFAC-MXB ; ou mélange préparé individuellement contenant des composés d’intérêt selon le cas pour les PFAS natifs</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mass Profiler Professional</td><td>Agilent</td><td></td><td>Ou progiciels open source</td></tr><tr><td>Profinder</td><td>Agilent</td><td></td><td>Ou progiciels open source</td></tr></tbody></table>

identification par- et les espèces chimiques polyfluorés avec un flux de travail combinée spectrométrie de masse à haute résolution ciblée et non-ciblés-dépistage

Identifying Per- and Polyfluorinated Chemical Species with a Combined Targeted and Non-Targeted-Screening High-Resolution Mass Spectrometry Workflow

Historiques et émergents par- et substances polyfluoroalkyle (PFASs) ont suscité d’intérêt significatif depuis les institutions publiques et gouvernementales de l’échelon local au niveau fédéral. L’évolution continue des chimies RFP présente un défi pour la surveillance de l’environnement, où le développement continu des méthodes ciblées accuse nécessairement la découverte de nouveaux composés chimiques. Il faut, par conséquent, d’avoir les méthodologies prospectives qui peuvent détecter des composés nouveaux et inattendus, surveiller ces espèces au fil du temps et régler les détails de leur structure chimique pour permettre de futures à travailler dans la santé humaine. À cette fin, indifférenciés analyse par spectrométrie de masse haute résolution offre une approche large détection de base qui peut être combinée avec presque n’importe quel schéma de préparation d’échantillon et fournit des capacités importantes pour l’identification des composés après détection. Dans les présentes, nous décrivons une méthode de concentration échantillon extraction en phase solide (SPE) basée à l’écoute pour la chaîne plus courte et plus hydrophiles chimies de RFP, tels que par acides éthers fluorés et sulfonates et décrire l’analyse des échantillons préparés de cette façon dans modes ciblés et non ciblés. Méthodes ciblées fournissent quantification supérieure lorsque les normes de référence sont disponibles mais sont intrinsèquement limités aux composés attendus lors de l’exécution de l’analyse. En revanche, une approche non ciblée peut identifier la présence de composés inattendus et fournir des informations sur leur structure chimique. Informations sur les fonctionnalités chimiques permet de corréler des composés dans l’ensemble de points d’échantillonnage et de suivre l’abondance et présence au fil du temps.

Nous présentons ici un protocole de quantification ciblée séquentielle et d’analyse indifférenciés de composés fluorés dans l’eau par spectrométrie de masse. Cette méthode fournit des niveaux quantitatifs de composés connus de composés fluorés et identifie des produits chimiques indéterminés dans les exemples associés avec des estimations semi-quantitatives de leur abondance.

Identification par- et les espèces chimiques polyfluorés avec un flux de travail combinée spectrométrie de masse à haute résolution ciblée et Non-ciblés-dépistage

Historical and emerging per- and polyfluoroalkyl substances (PFASs) have garnered significant interest from the public and government agencies from the ...

Cette approche permet la quantitation du SFI connu et la découverte de nouvelles substances dans les mêmes échantillons, comparativement aux approches ciblées seules qui ne contiennent pas les composés émergents préoccupants. Ce protocole cible une plus grande variété de composés PFAS, qui sont représentatifs des produits chimiques émergents les plus récents. Si l’étape de concentration est adaptée aux composés, les méthodes de mesure utilisées ici pourraient être appliquées à n’importe quelle classe de produits chimiques.Pour prélassez un échantillon sur le terrain, portez des gants de nitrile et recueillez de 500 à 1 000 millilitres d’eau sur le terrain dans une bouteille de polyéthylène, de HDPE ou de polypropylène propre et haute densité. Ajouter cinq millilitres d’agent de conservation de l’acide nitrique à 35 % à la bouteille de l’échantillon et à un champ vierge, et transporter les échantillons au laboratoire. Versez chaque échantillon dans des cylindres gradués individuels, pré-nettoyés, d’un litre et de haute densité en polypropylène, et enregistrez le volume exact des échantillons.Ajouter 10 millilitres de méthanol à chaque bouteille d’échantillon vidée avant de plafonner et de secouer vigoureusement pour rincer les substances absorbées par et polyfluoroalkyl, ou PFAS, de l’intérieur de la bouteille. Ensuite, retournez l’échantillon d’eau mesuré à la bouteille rincée avec le rinçage méthanolique. Pour obtenir une courbe standard de quantitation, remplissez huit bouteilles d’échantillons vides d’un litre d’eau déionisée sans PFAS et étiquetez les bouteilles avec huit concentrations uniformément espacées couvrant la plage de quantitation souhaitée.Ensuite, ajoutez une quantité de mélange de PFAS indigène à chaque bouteille pour donner les concentrations appropriées de PFAS, et ajoutez le mélange pfas standard interne à chaque échantillon à une concentration se rapportant au point médian de la courbe d’étalonnage. Ensuite, filtrer les échantillons à travers des filtres en fibre de verre A sous vide doux dans des flacons individuels, pré-nettoyés, d’un litre à haute densité sous vide en polypropylène. Si les particules restent dans la bouteille, rincez l’eau déionisée supplémentaire et filtrez le lavage dans le flacon.Pour l’extraction en phase solide, retourner l’eau filtrée dans la bouteille de l’échantillon et conditionner un faible échange d’anion, ou WAX, cartouche avec 25 millilitres de méthanol et 25 millilitres supplémentaires d’eau déionisée. Placez le tube d’extraction de pompe dans les bouteilles filtrées d’échantillon, et étiquetez l’extraction de phase solide, ou SPE, cartouches avec les noms appropriés d’échantillon. Pompez 500 millilitres de chaque échantillon à travers chaque cartouche à un débit régulier de 10 millilitres par minute, rejetant le débit.Retirez les cartouches WAX SPE des pompes à pistons et transférez la cartouche SPE dans un collecteur sous vide, équipé de réservoirs de verre externes. Rincer chaque cartouche SPE avec quatre millilitres de 25 millimilles, pH quatre tampon d’acétate de sodium sous vide doux, suivie d’un lavage neutre au méthanol de quatre millilitres. À la fin du lavage, placez un tube de centrifugeuse en polypropylène de 15 millilitres sous chaque cartouche SPE pour recueillir l’élitente et élévez les échantillons avec quatre millilitres d’hydroxyde d’ammonium de 0,1 % dans le méthanol.Ensuite, enlevez les tubes d’élitution et réduisez le volume d’élitate à 500 à 1 000 microlitres par évaporation sous le flux d’azote sec dans un bain d’eau à 40 degrés Celsius. Pour la chromatographie liquide ciblée avec spectrométrie de masse tandem, diluer 100 microlitres d’extrait d’échantillon avec 300 microlitres de tampon d’acétate d’ammonium de deux millimlaires dans un flacon d’échantillon de chromatographie liquide haute pression, et préparer une liste de travail analytique composée de la courbe standard, des échantillons, et une réplique supplémentaire de la courbe standard pour évaluer la dérive instrumentale à travers la course. Analyser les échantillons à l’aide de méthodes standard de chromatographie liquide et de spectrométrie de masse établies pour les composés ciblés d’intérêt.À la fin de l’analyse, générer une courbe standard à partir des échantillons standard en utilisant le rapport de zone de pointe de l’analyte à la norme interne par rapport à la concentration d’analyte, et de générer une formule de régression quadratique avec un sur x pondération pour la prévision de la concentration. Quantifier les analytes ciblés dans chaque échantillon à l’aide des courbes standard préparées et du rapport de zone pour chaque mesure. Si la concentration dépasse la plage d’étalonnage, diluer l’échantillon d’origine avec de l’eau déionisée piquée avec la concentration standard interne appropriée, et ré-extraire pour amener la concentration dans la plage appropriée.Pour la chromatographie liquide non ciblée avec spectrométrie de masse tandem, diluer 100 microlitres d’extrait d’échantillon avec 300 microlitres de tampon d’acétate d’ammonium de deux millimolaires dans un flacon d’échantillon de chromatographie liquide à haute pression. Après avoir mis en place une liste de travail comme démontré, utilisez le logiciel d’instrument pour recueillir des données de spectrométrie chromatographie-masse liquide avec un balayage large en mode dépendant des données. Pour le traitement de données non ciblé, ouvrez le logiciel d’extraction de fonctionnalités moléculaire approprié et sélectionnez Ajouter/Supprimer des fichiers d’échantillons et ajoutez des fichiers, et sélectionnez les données brutes de l’expérience non ciblée.Cliquez sur OK, et sélectionnez extraction de fonctionnalités récursives par lots et méthode ouverte pour charger une méthode préé établie ou pour modifier manuellement les paramètres du logiciel. Pour chaque fonctionnalité restante après le filtrage, générer des formules chimiques prévues à partir du spectre de masse exacte et composite, et ouvrir l’agence de protection de l’environnement CompTox Chemicals Dashboard Batch Search outil. Pour rechercher les formules chimiques prévues ou les masses neutres contre, pour retourner les structures chimiques potentielles, sélectionnez le type d’identificateur et coller la liste des identificateurs dans la boîte d’identification.Sélectionnez Télécharger des données chimiques et toutes les données physiques, chimiques ou toxicologiques souhaitées pour les correspondances potentielles à partir du menu drop-down. Ensuite, confirmez les structures à l’aide des normes disponibles et/ou de la spectrométrie de masse tandem à haute résolution ciblée correspondant aux fragments par rapport aux spectres des bases de données, dans les spectres théoriques silico ou la curation manuelle. Chromatographie liquide quantitative avec des résultats de spectrométrie de masse tandem sont présentés sous la forme de chromatogrammes irationnelle pour le chromatogramme irional total et les chromatogrammes irionaux extraits de transitions chimiques spécifiques pour les produits chimiques mesurés.La zone de pointe intégrée d’une transition chimique est liée à l’abondance composée et peut être utilisée pour calculer la concentration exacte à l’aide d’une courbe d’étalonnage normalisée selon une norme interne. L’analyse non ciblée à l’aide d’un balayage complet de la SP donne un chromatogramme ion total pour les échantillons, ce qui permet une génération ad hoc de chromatogrammes iions extraits pour des ions individuels. Les composés pfas ont des défauts de masse négatifs en raison de leur prépondérance des atomes de fluor, et les composés polyfluorés ont des défauts de masse positifs mais sensiblement plus petits que les matières organiques homologues.Une deuxième étape de filtrage de méthode consiste à identifier les séries homologues contenant des unités répétées communes aux espèces de PFAS à l’aide d’un logiciel approprié. À partir de données sur la SP à haute résolution, une ou plusieurs formules chimiques putatives peuvent être appariées à l’empreinte isotopique du spectre de masse et notées. Les formules chimiques peuvent être confirmées davantage, et certaines informations structurelles peuvent être recueillies à partir de données de spectrométrie de masse en tandem.D’autres expériences de spectrométrie de masse peuvent être utilisées pour confirmer l’identité de nouveaux composés, et des comparaisons d’échantillons peuvent fournir des informations sur la prévalence et la quantité relative de produits chimiques. Il est très important d’avoir des blancs appropriés et des échantillons de contrôle de la qualité pour la matrice afin de valider les mesures quantitatives et non ciblées. Les stratégies présentées sont devenues la nouvelle approche du dépistage environnemental de la SPFO en permettant la découverte d’inconnus et la prédiction de leur identité.

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