Chirurgie du nerf facial dans le modèle de rat pour étudier l’inhibition et la régénération axonales

Ce protocole décrit une approche reproductible à la chirurgie du nerf facial dans le modèle de rat, y compris des descriptions de divers modèles inductibles de blessure.

Ce protocole peut aider les scientifiques à étudier les résultats après les lésions nerveuses faciales et les méthodes pour améliorer la régénération à travers de nombreux paramètres différents. Le principal avantage de cette technique est que l’anatomie du rat permet un accès facile au nerf facial, et sa grande échelle nous permet d’étudier tous les modèles de blessures pertinents. Les applications de cette technique s’étendent vers la réadaptation des patients après des dommages faciaux de nerf.

En tant que potentiel régénérateur, le rat fournit un modèle expérimental reproductible et concis. Et cette méthode peut fournir un aperçu des thérapies chirurgicales et médicales pour la parésie nerveuse faciale ou la paralysie. Et il est traduisible à d’autres modèles de tête et de cou ou d’autres nerfs périphériques.

Opérer au microscope à l’aide des deux mains peut s’avérer difficile. Je recommande de pratiquer en utilisant la version binoculaire sous le microscope avant de tenter une dissection du nerf facial. Après avoir confirmé un manque de réponse à la pincement des pieds, appliquer de la pommade sur les yeux du rat et raser la zone chirurgicale.

Établissez une méthode d’identification des rats et placez un rouleau de gaze sous le cou. Désinfecter la peau exposée avec trois gommages alternatifs de chlorhexidine et 70% d’éthanol et placer le rat sous un microscope stéréo. Manipulez l’oreille ipsilateral dans une direction antérieure-postérieure pour déterminer le pliage normal de la peau postauricular.

Utilisez une lame numéro 15 pour faire une incision de deux à trois millimètres dans le pli postauricular. La planification et le placement de l’incision sont les étapes les plus critiques pour assurer une identification fiable du nerf facial tout en minimisant la taille de la plaie. Disséquer brutalement à travers le fascia sous-cutané immédiat et placer un rétracteur micro-Weitlaner pour améliorer l’exposition des tissus.

Identifiez le muscle digastrique antérieur pendant qu’il se déplace dans une direction inférieure-à-supérieure vers son insertion le long de la base de crâne. Étendre doucement à travers le ventre musculaire le long du point d’insertion musculaire pour révéler le tendon du ventre digastrique antérieur. Le tendon apparaîtra comme un processus blanc filmé émanant du muscle avec une insertion solide sur la base du crâne.

Après identification du muscle digastrique antérieur et de son tendon, ajustez le rétracteur de Weitlaner pour rétracter davantage le ventre de muscle. La région exposée est l’espace tridimensionnel dans lequel se trouve le tronc principal du nerf facial. Disséquer le long du nerf dans une direction inférieure distally de la sortie du foramen stylomastoid.

Pour induire un motif de blessure d’écrasement, utilisez les forceps du bijoutier à surface lisse pour saisir fermement et compresser le nerf en appliquant une pression constante et reproductible pendant 30 secondes pour assurer une blessure d’écrasement appropriée. Pour une transection simple, saisir l’épineurium immédiat en survolant le nerf avec des forceps à dents fines, et utiliser des microscisseurs pointus pour transecter proprement le nerf au point désiré avec une seule coupe. Pour un modèle d’écart nerveux, utilisez des étriers réglables pour définir la longueur désirée de l’écart nerveux pour assurer des modèles de blessures similaires entre les animaux et transecter le nerf comme nous venons de le démontrer.

Après que la blessure expérimentale ait été livrée, irriguer la blessure avec la solution saline stérile et sécher le tissu avec la gaze stérile. avant de fermer l’incision cutanée selon les directives institutionnelles. Ici, l’imagerie en direct du tronc principal du nerf facial avec une blessure d’écrasement approximativement de deux à trois millimètres distal au point de branche du premier PSE dans un rat transgénique adulte de Thy1-GFP est montrée.

L’évaluation du retour progressif de la fluorescence à un, deux, trois et quatre semaines après la blessure peut être utilisée comme marqueur pour surveiller la régénération nerveuse chez ces animaux transgéniques. L’analyse histomorphométrique peut être employée pour obtenir des images transversales de la division mandibulaire marginale permettant la quantification du diamètre axonal, de la quantité de débris, de la fibre nerveuse, du pourcentage de nerf, et des mesures de densité. Il est important d’ajuster fréquemment le placement du rétracteur au besoin pour s’assurer que les nerfs anatomiques pertinents sont visibles lors de l’identification du nerf facial.

Après cette procédure, les nerfs et les muscles pertinents peuvent être récoltés pour l’analyse immunohistochimique afin d’évaluer le degré de régénération par rapport à d’autres groupes expérimentaux. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans l’étude des résultats fonctionnels après une lésion du nerf facial. Plus précisément, comment effectuer le phénomène de synkinésie.