In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice In Vivo

Nous effectuons la première thérapie, basée sur un inhibiteur de microARN dans un modèle de cancer de la thyroïde. Ces thérapies en développement s’affichent prometteuses pour le traitement de cette maladie. Ce type de modèle orthotopique, utilisant une voie systémique d’administration du traitement, facilite la validation d’un nouveau médicaments à base de microARN.

Bien que nous utilisions un modèle orthotopique pour implanter les cellules cancéreuses thyroïdiennes humaines dans la thyroïde de souris, ces modèles pourraient être tous systémiques pour d’autres types de cancer. La démonstration de la procédure avec Julia Ramirez-Moya et Adrian Acuna sera Raquel Arocha Riesco. C’est une technicienne de notre institut.

Après avoir établi un cal-62 ligne de cellules cancéreuses thyroïdiennes humaines milieu incomplet, suspendre un 1 fois 10 à la 6e cellule aliquot dans 50 microlitres de PBS à 4 degrés Celsius, et mélanger les cellules avec un volume égal de matrice membranaire sous-sol. Chargez les cellules dans une seringue de 1 millilitre, munie d’une aiguille de 27 gages d’un demi-pouce, et injectez sous-cutanément 100 microlitres de l’échantillon sur le flanc gauche d’une souris nue de 6 semaines. Deux semaines après l’injection, ajouter l’antagomiR ou la solution tampon de traitement contrôlé à 160 microlitres de température ambiante in vivo réaccentation dans un tube de 1 point 5 millilitres.

Et vortex immédiatement la solution pendant 10 secondes pour assurer la complexification du mélange. Incuber la solution de traitement pendant 30 minutes à 50 degrés Celsius, suivie d’une brève centrifugation dans une micro centrifugeuse. Ensuite, diluer le complexe de traitement sédimenté six fois avec du PBS frais et un mélange approfondi.

Et injecter l’ensemble du volume de 200 microlitres du traitement directement dans la tumeur. Injectez 50 microlitres d’une solution de substrat de D-Luciferin de 40 milligrammes par litre sous-cutanée 2 fois par semaine, dans chaque animal expérimental. S’assurer de confirmer un manque de réponse au pincement des pieds après anesthésie isoflurane.

Placez l’animal dans la chambre d’un système d’imagerie par bioluminescence in vivo et imagez le signal de bioluminescence avec le logiciel d’imagerie in vivo selon les protocoles standard. Ensuite, analyser la croissance tumorale. Comparer les deux traitements et déterminer l’importance et les différences de croissance à l’aide d’un test T.

Pour l’inoculation orthotopique de cellules tumorales thyroïdiennes suspendre un aliquot de cellules CAL-62 dans 5 microlitres de PBS, et injecter sous-cutanément 100 microlitres d’analgésiques et 100 microlitres d’antibiotiques dans une valve de 7 semaines C souris nue. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des orteils, placez l’animal sous un microscope disséquant et désinfectez le cou de l’animal avec de l’iodopovidone. Ensuite, faire une incision d’environ 2 centimètres dans la peau, et déplacer le gland salivaire pour exposer le cou.

Utilisez des forceps de dissection, et/ou ciseaux, pour disséquer les muscles de la sangle pour exposer la trachée et la glande thyroïde, et utiliser une seringue de 10 microlitres, pour injecter le volume de 5 microlitres de cellules tumorales dans le lobule thyroïdien droit, situé sur le côté du cartilage cricoïde. Lorsque toutes les cellules ont été livrées, repositionnez le gland salivaire et utilisez des sutures tressées de soie, enduites et non absorbables pour fermer l’incision. Ensuite, appliquez l’iodopovidone sur la zone de la plaie, et placez la souris sur une couverture thermic avec surveillance jusqu’à ce que la récupération complète.

deux à trois semaines après l’injection intrathyroïde de cellules, préparez la solution de traitement telle que démontrée, et livrez la solution par voie intraveineuse par injection rétro-orbitale du sinus veineux de l’animal anesthésié tumeur-roulement de thyroïde. Dans cette expérience représentative, la croissance des tumeurs injectées intratumoralement sans inhibiteur de microARN 146B, a été sensiblement supprimée en ce qui concerne le contrôle négatif. Des niveaux intratumoraux d’expression de quelques marqueurs de prolifération ont été également observés dans de bas niveaux, dans les tumeurs traitées antagomiR, comparées aux tumeurs témoins.

En outre, la récupération des cibles de micro-ARN peut être étudiée par l’analyse de l’ARN extrait de tumeur, ou protéine. Révélant collectivement que l’inhibition in vivo des micro ARN individuels est efficace et peut être exploitée thérapeutiquement pour les traitements du cancer de la thyroïde. L’analyse histologique des tumeurs thyroïdiennes établies chez la souris comme démontré, permet la coloration pour les cellules épithéliales entourant la tumeur, révélant l’architecture thyroïdienne de follicule du tissu de tumeur.

Notamment, l’injection intraveineuse de l’inhibiteur du microARN 146B chez la souris, avec une tumeur établie, entraîne une diminution significative du volume tumoral par rapport aux animaux traités par le contrôle. En outre, l’expression du nouveau microARN 146B cible DICER1 dans la tumeur primaire, augmente après le traitement anti-micro-ARN 146B, soulignant en outre le potentiel de l’inhibition de l’expression indogène micro-ARN et donc la restauration de ses gènes cibles comme une thérapie dans le cancer de la thyroïde. Cette technique, et les résultats ultérieurs de lipine, ouvrent la possibilité d’explorer de nouvelles thérapies basées sur l’ARN non-curing pour le traitement du cancer thyroïde.