In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones In Vitro Ubiquitination and Deubiquitination Assays of Nucleosomal Histones In Vitro

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25 juillet 2019

10.3791/59385-v

25 juillet 2019

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L'ubiquitination est une modification post-traductionnelle qui joue un rôle important dans les processus cellulaires et est étroitement coordonnée par la désubiquitination. Les défauts dans les deux réactions sous-tendent les pathologies humaines. Nous fournissons des protocoles pour mener la réaction d'ubiquitination et de deubiquitination in vitro utilisant des composants purifiés.

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Essai d ubiquitination

Chapters in this video

0:04

Title

1:01

GSH-agarose Affinity Purification of the GST-RING1B(1-159)-BMI1 (1-109) E3 Ubiquitin Ligase Complex

2:16

Purification of the BAP1/DEUBAD (ASXL2) Deubiquitinase Complex

4:58

Purification of the Nucleosomes from HEK293T Cells

7:38

Nucleosome Ubiquitination Assay Using BMI1/RING1B E3 Ubiquitin Ligase Complex and In Vitro Nucleosomal H2A DUB Assay Using BAP1/DEUBAD

9:05

Results: Purification, Ubiquitination, and Deubiquitination

10:40

Conclusion

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