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Utilisation d’unique molécule fluorescente hybridation In Situ (FISH-SM) afin de quantifier et Lo...
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JoVE Journal Genetics
Use of Single Molecule Fluorescent In Situ Hybridization (SM-FISH) to Quantify and Localize mRNAs in Murine Oocytes

Utilisation d’unique molécule fluorescente hybridation In Situ (FISH-SM) afin de quantifier et Localize ARNm dans les ovocytes murin

Full Text
11,268 Views
08:18 min
April 24, 2019

DOI: 10.3791/59414-v

Kelsey R. Timme1, Jennifer R. Wood1

1Department of Animal Science,University of Nebraska-Lincoln

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Pour compter reproductible les numéros des ARNm dans les ovocytes, in situ en fluorescence seule molécule RNA hybridation (RNA-poisson) a été optimisée pour les cellules non adhérentes. Ovocytes ont été recueillis, hybridaient avec des sondes spécifiques de transcription et quantifiées à l’aide d’un logiciel de quantification d’image.

Cette technique permet non seulement la localisation, mais aussi la quantitation des ARNM candidats dans les ovocytes et les embryons individuels. Par rapport à d’autres analyses, y compris pcr, l’achèvement de la technique se traduit par des données reproductibles avec une faible variation. Kelsey Timme, étudiante diplômée dans mon laboratoire, démontrera la procédure.

Commencez cette procédure avec la préparation du matériel requis et des souris femelles à l’âge de cinq à huit semaines comme décrit dans le protocole de texte. Nettoyez la souris à l’aide de 70 % d’éthanol. Exposer la cavité abdominale et visualiser l’appareil reproducteur féminin.

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